脂多糖活化的大鼠肺泡巨噬细胞TNF-α产生的新机制

目的:探讨脂多糖(LPS)活化的肺泡巨噬细胞中低氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达及其在肺泡巨噬细胞产生肿瘤坏死因子α(TNF-α)中的作用。方法:应用HIF-1α诱骗法(HIF-1αdecoy)抑制其作用,并用Westernblotting、半定量RT-PCR、酶联免疫吸附法(ELISA)分别检测HIF-1α蛋白、mRNA的表达和TNF-α的产生。结果:HIF-1α蛋白含量在LPS组(1.95±0.57)和HIF-1αdecoy组(1.89±0.59)均明显高于对照组(0.41±0.14,P<0.05);HIF-1αmRNA的表达在对照组(0.7838±0.3183)、LPS组(0.7622±0.3387)和HIF-1αdecoy组(0.8155±0.3594)之间无显著差异(P>0.05);LPS刺激24h后,大鼠肺泡巨噬细胞TNF-α的产生明显高于对照组(61ng/Lvs156ng/L,P<0.05),抑制HIF-1α后TNF-α的产生明显低于LPS刺激组(90ng/Lvs156ng/L,P<0.05),但HIF-1αdecoy组TNF-α的产生仍然高于对照组(61ng/Lvs94ng/L,P<0.05)。结论:大鼠肺泡巨噬细胞在LPS的刺激下HIF-1α蛋白的稳定性增强使其表达明显上调,并且促进TNF-α的产生,提示HIF-1α在肺部慢性炎症性疾病如COPD的发病机制中可能有重要作用。

低氧诱导大鼠肺泡巨噬细胞产生TNF-α的机制

目的:研究低氧诱导肺泡巨噬细胞低氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达及HIF-1α对肺泡巨噬细胞 产生肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响。方法:应用HIF-1α诱骗法(HIF-1α decoy)抑制低氧(3％O2,5％CO2,92％ N2)培养的肺泡巨噬细胞中HIF-1α的作用,并用免疫组织化学、Western blot、半定量RT-PCR、酶联免疫吸附法 (ELISA)分别检测HIF-α蛋白、mRNA的表达和TNF-α的产生。结果:HIF-1α在常氧对照组肺泡巨噬细胞核中表 达呈阴性,在低氧组和HIF-1α decoy组表达呈阳性;低氧组和HIF-1α decoy组中HIF-1α蛋白的含量显著高于常氧 对照组(P<0．05)。HIF-1α mRNA的含量在低氧组和HIF-1α decoy组明显高于常氧对照组(P<0．05);培养的巨噬 细胞上清液中TNF-α的含量在低氧组(115±17 ng／L)明显高于常氧对照组(69±13 ng／L,P<0．05)和HIF-1α decoy 组(8l±15 ng/L,P<0．05)。结论:低氧可明显诱导肺泡巨噬细胞HIF-1α的表达和活性增强,后者能促进TNF-α 的产生,提示在可导致肺部低氧的炎症性疾病如COPD中HIF-1α可能发挥重要作用。

PI-3K在低氧大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖中的表达

目的 :研究低氧肺动脉平滑肌细胞 (PASMC)增殖时磷脂酰肌醇 3激酶 (PI- 3K)的表达。方法 :实验分为无血清培养基 (SFM)组和低氧 4 8h(H4 8h)组 ,应用免疫组织化学法和流式细胞仪检测低氧PASMC。结果 :SFM组和H4 8h组PASMC细胞浆内均有PI- 3Kp110阳性表达 ,H4 8h组 (0 1891± 0 0 30 1)的表达明显高于SFM组 (0 10 2 5± 0 0 16 4 ,P <0 0 5 ) ;PCNA在SFM组的少数PASMC细胞核内有阳性表达 ,H4 8h组 (2 4 5 8± 4 0 7) %的增殖指数 (PI)明显高于SFM组 (8 76± 1 2 1) % (P <0 0 5 ) ;流式细胞仪检测发现PASMC的S +G2 /M期细胞所占细胞总数的百分比在H4 8h(2 7 15± 5 4 3) %显著高于SFM组 (10 6 4± 1 5 2 ) % (P <0 0 5 )。结论 :低氧可显著上调PI3K的表达 。