大鼠心脏Ⅰ、Ⅲ型胶原增龄变化的免疫组织化学观察

目的 探讨大鼠心脏Ⅰ和Ⅲ型胶原纤维的增龄变化规律。 方法 2 1只Wistar雄性大鼠随机分为幼年、青年和老年组 ,应用SP免疫组织化学方法 ,检测 3组大鼠心脏Ⅰ和Ⅲ型胶原的蛋白表达。 结果 1 Ⅰ型和Ⅲ型胶原纤维均分为粗、细 2种。细纤维包绕在每个心肌外围 ,相互吻合成网 ;粗胶原呈现斑块状 ,散在分布于心肌细胞群之间。Ⅰ型胶原纤维较Ⅲ型含量多。 2 不同年龄大鼠心肌Ⅰ和Ⅲ型胶原表达有明显差异。幼年组少而密集 ,均匀 ;青年组相对疏松而均匀 ;老年明显增多 ,分布不均。心脏胶原纤维从幼年到老年一直在增长 ,青年期以前增长最快。 3 在幼年大鼠心脏右心室的胶原含量多于左心室 ,在青年和老年大鼠心脏各部位的胶原含量无差异。 结论 大鼠心脏Ⅰ型胶原纤维多于Ⅲ型 ,2种类型的胶原纤维含量均随年龄增长而增加。

学生主体参与的组织学实习课教学模式

老师的职责不仅是想方设法让学生掌握本专业知识,更重要的是对学生能力的培养.经过多年的组织学实习课带教的反复探索和实践,我们总结出'学生主体参与的组织学实习课教学模式',深受学生好评.该模式是通过学生主体参与教学,使学生的主观能动性得到发挥,从而提高学习效果、培养学生能力.

慢性给予应激水平的糖皮质激素对海马神经元和突触的影响

为探讨慢性给予应激水平糖皮质激素对大鼠海马的影响,在实验组大鼠饮用水中加入皮质醇,使动物皮质醇吸收量达每日10mg/kg,从而引起与应激动物相同的皮质醇水平,共21d,然后用免疫组织化学和免疫印迹法观察海马内caspase-3、synap-tophysin(Syn)和neurogranin(Ng)表达的变化。结果显示:(1)实验组大鼠海马结构中可见较多细胞出现核固缩的病理改变,但未见或偶见极个别caspase-3免疫反应阳性细胞;(2)与正常组Syn表达水平(1.2197±0.3443)和Ng表达水平(1.9330±0.3450)相比,实验组大鼠海马结构中Syn和Ng的表达明显减少(P<0.05),其表达水平分别为0.5512±0.0540和1.3375±0.3317。上述结果表明慢性给予应激水平的糖皮质激素可损伤海马功能,引起不依赖caspase-3的海马神经细胞退变、使海马突触数量减少以及改变海马突触效能可能是其作用的部分机制。

雌激素受体在发育不同时期大鼠大脑的表达

目的探讨雌激素受体(ER)在大鼠大脑神经元及神经胶质细胞表达的增龄性变化。方法采用免疫组织化学方法观察不同年龄正常组及脑损伤组SD大鼠脑内ER的表达变化并行统计学分析。结果正常老年组海马齿状回神经元ER表达明显少于青年组;脑损伤组海马各区出现大量ER阳性反应的胶质细胞,且青年组阳性胶质细胞明显多于老年组。结论老年组海马齿状回神经元雌激素受体表达下降,从而更易发生退行性变;在受到伤害性刺激时青年组胶质细胞表达更多的雌激素受体,从而更好地利用雌激素的神经保护作用。

慢性复合应激对大鼠海马生长休止蛋白7表达的影响

目的探讨慢性复合应激对大鼠海马神经元中生长休止蛋白7(Gas7)的表达变化及意义。方法36只大鼠随机分为慢性复合应激组和正常对照组。复合应激组动物进行6周的垂直旋转、睡眠剥夺、捆绑(6h/d)和夜间光照等慢性复合性应激试验;实验结束后,所有动物采用免疫组织化学和免疫印迹等方法检测大鼠海马Gas7蛋白表达的变化和神经元凋亡情况。结果Gas7在对照组和实验组大鼠海马各区均有表达,主要表达在海马神经元的胞质和突起内。其中在CA1区和齿状回呈较强阳性表达,CA3区表达则较弱;慢性复合应激组CA1区和齿状回阳性染色加深,平均吸光度明显上升(P<0.05),而CA3区则不明显(P>0.05)。慢性复合应激组中部分切片在下托可见少量Caspase-3免疫反应阳性细胞。免疫印迹检测表明,慢性复合应激组大鼠海马Gas7表达明显增强,与正常对照组相比,差异具有显著性(P<0.05)。结论Gas7可能参与了在应激情况对神经元的保护作用,以及促进神经元的发生和发育。

不同年龄小鼠脂肪源间充质干细胞体外原代培养衰老和凋亡的变化

目的探讨小鼠脂肪源间充质干细胞(ADMSCs)体外原代培养过程中衰老和凋亡变化。方法用差速贴壁法对1月和24月龄小鼠(各30只)腹股沟脂肪组织的ADMSCs进行原代培养,免疫荧光技术检测第3代ADMSCs表面抗原CD73、CD90和CD105的表达,比较两组细胞的形态差异和生长情况,β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测ADMSCs衰老情况,PI-Hoechst33342双染色观察ADMSCs的凋亡变化。结果两组体外原代培养的ADMSCs均贴壁生长,具有典型干细胞的形态和生长特征,两组ADMSCs CD73、CD90和CD105的表型一致。SA-β-Gal染色显示:原代培养的老年组ADMSCs衰老比例比幼年组多,1月组原代培养2～7d的ADMSCs阳性率分别为(3.87±1.34)%、(4.21±1.22)%、(9.00±0.98)%、(11.20±1.24)%、(9.50±2.19)%和(13.20±2.93)%;24月组分别为(8.67±1.05)%、(10.23±0.98)%、(12.80±0.78)%、(17.10±1.13)%、(19.80±1.59)%和(24.70±1.86)%。PI-Hoechst 33342染液双染显示:1月组原代培养2～7d的ADMSCs凋亡率分别为(22.1±1.4)%、(36.7±1.62)%、(11.7±1.45)%、(38.4±1.57)%、(6.5±1.32)%和(11.3±1.63)%;24月组4～7d的ADMSCs凋亡率分别为(29.4±1.72)%、(37.6±1.64)%、(19.4±1.29)%和(18.9±1.25)%。结论老龄ADMSCs增殖能力下降,衰老、凋亡和坏死的细胞比例增加;随着ADMSCs原代培养时间的延长,其衰老增加,但凋亡和坏死无规律性变化。

糖皮质激素对大鼠下丘脑亨廷顿蛋白相关蛋白1表达的影响

目的探讨外源性糖皮质激素对大鼠下丘脑亨廷顿蛋白相关蛋白1（HAP1）表达的影响。方法成年雄性Wistar大鼠80只,随机分为实验对照组（注射生理盐水）、皮质酮注射组、皮质酮＋皮质酮受体拮抗剂（RU38486）注射组、饮用氢化可的松组。皮质酮注射[（5mg/（kg.12h）]组又分为注射持续1d、3d、5d、7d组;皮质酮＋皮质酮受体拮抗剂（RU38486）注射[（10mg/（kg.12h）]组注射持续3d;饮用氢化可的松组大鼠饮用水中加氢化可的松（0.01g/L）,连续1个月。应用RT-PCR、免疫印迹法观察大鼠下丘脑HAP1表达的变化。结果注射皮质酮1d和3d后,下丘脑HAP1表达明显减少,其mRNA的表达明显下调,5d后HAP1开始回升,7d后恢复到正常水平,HAP1mRNA表达5d后明显增加,并高于正常水平;长期（一个月）饮用氢化可的松的大鼠,其下丘脑中HAP1的表达明显减少;在皮质酮注射的同时注射RU38486,可以对抗由皮质酮注射所引起的下丘脑HAP1的变化。结论外源性过量糖皮质激素能影响下丘脑HAP1的表达,下丘脑中的HAP1可能参与下丘脑神经元或神经内分泌细胞的功能活动。

无血清培养上调N2a细胞钙反应性反式激活因子的表达

目的探讨钙反应性反式激活因子(calcium-responsive transactivator,CREST)是否与神经细胞的分化有关。方法选用在促分化因素作用下具有分化为神经元能力的小鼠神经母细胞瘤(N2a)细胞,用无血清培养(血清撤除)诱导N2a细胞分化。接种和培养N2a细胞12～24h后,将其分为对照组和无血清诱导组,对照组继续在含5%胎牛血清(FBS)的培养基中培养,无血清诱导组在不含FBS的培养基中培养。采用免疫印迹技术、免疫荧光技术和RT-PCR检测无血清诱导分化对N2a细胞CREST蛋白和mRNA表达的影响。结果在含5%胎牛血清(FBS)培养基培养的对照N2a细胞中,CREST蛋白水平在各时间点均无明显变化,CREST mRNA水平仅在培养48h后略有升高。而在无血清诱导分化的N2a细胞中,CREST蛋白表达水平在无血清诱导12h时无明显变化,但在诱导24h后明显升高,诱导48h后进一步升高;RT-PCR检测显示,CREST mRNA在无血清诱导12h后即开始升高,诱导24h和48h则升高更为明显。结论无血清诱导分化的N2a细胞中CREST的表达上调,提示CREST可能参与神经细胞的分化。

皮质酮对原代培养的海马神经元及其[Ca^(2+)]_i和钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ表达的影响

目的:探讨皮质酮(CORT)对培养的海马神经元及其[Ca2+]i和钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)表达的影响和可能的机制。方法:海马神经元被分为不同终浓度的CORT处理组、CORT+MK-8 0 1或高浓度葡萄糖组。采用MTT法、流式细胞术、荧光标记和免疫细胞化学法,观察海马神经元活力、死亡方式[、Ca2+]i和CaMKⅡ表达的变化规律。结果:1 0-6和1 0-5mol/L CORT组,其海马神经元的活力明显降低,分别以凋亡和坏死为主,并使海马神经元[Ca2+]i显著升高;CaMKⅡ的表达明显减少。MK-8 0 1和高浓度葡萄糖均能拮抗1 0-6mol/L CORT对海马神经元的损伤作用。结论:在CORT的作用下,海马神经元发生凋亡和坏死;[Ca2+]i升高可能既是海马神经元损伤的结果,又是引起其发生凋亡和CaMKⅡ表达下降的原因。

寒冷应激对大鼠肾上腺髓质亨廷顿蛋白相关蛋白1表达的影响

目的探讨亨廷顿蛋白相关蛋白1（HAP1）在大鼠肾上腺髓质的超微结构定位,以及寒冷应激对大鼠肾上腺髓质HAP1表达的影响。方法成年雄性Wistar大鼠14只,2只用于免疫电镜研究,12只用于寒冷实验研究。寒冷实验中,将动物随机分为对照组和寒冷组,每组6只,寒冷组动物放置4℃环境下,12h后用免疫组织化学和Western blotting方法检测大鼠肾上腺髓质HAP1表达的变化。结果免疫电镜结果显示,HAP1免疫反应产物分布在肾上腺髓质细胞分泌颗粒外膜及分泌颗粒间的膜性细胞器上。寒冷组大鼠肾上腺髓质HAP1的表达明显减少,和对照组比较有显著性差异（P＆lt;0.01）。结论HAP1可能与肾上腺髓质细胞内分泌颗粒及位于分泌颗粒内的肾上腺素/去甲肾上腺素的运输和释放有关。

高压氧对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑神经细胞凋亡及bcl-2蛋白表达的影响

目的:探讨高压氧对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑神经细胞凋亡及bcl2蛋白表达的影响。方法:选取健康雄性Wistar大鼠60只,随机分为假手术组(10只)、缺血对照组(25只)及缺血再灌注加高压氧治疗组(HBO组,25只)。采用动脉线栓法制成大脑中动脉(MCA)局灶性脑缺血再灌注模型。用四氮唑染色观察局灶性脑缺血再灌注后120h各组大鼠脑梗死灶的大小,应用TUNEL法及免疫组化方法检测缺血3h再灌注6h、24h、48h、72h、120h大鼠脑组织神经细胞凋亡及bcl2蛋白的表达。结果:假手术组未发现脑梗死灶,凋亡细胞及bcl2蛋白表达阴性。HBO组缺血再灌注后120h大鼠梗死灶体积(15.9±4.2)明显小于缺血对照组(26.8±4.9)(P<0.01);HBO组大鼠再灌注24h,48h,72h各时点凋亡指数均低于缺血对照组,bcl2蛋白表达均高于缺血对照组(P<0.05)。结论:脑缺血再灌注后凋亡细胞增多,bcl2蛋白表达增强,高压氧治疗可以上调bcl2蛋白的表达,抑制脑神经细胞凋亡,具有脑神经保护作用。

低温保存脂肪间充质干细胞的生物学特性评价

目的探讨低温保存对小鼠脂肪间充质干细胞(ADMSCs)体外培养的生物学特性和分化潜能的影响。方法分离、培养小鼠ADMSCs,取第3代细胞置于液氮深低温(-196℃)冻存12个月后复苏。MTT法测定ADMSCs的增殖活性;β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测衰老;免疫细胞化学方法检测细胞表面分子CD73、CD90和CD105;条件培养基诱导后,免疫荧光法检测心肌特异性肌钙蛋白(cTnT),茜素红、碱性磷酸酶和油红O染色检测成骨、成脂诱导分化潜能,Real time-PCR检测cTnT、Gata4、Ost和Runx2。未经低温保存的第3代ADMSCs为对照。结果低温保存的ADMSCs其增殖活性、衰老率与未冻存细胞比较差异无显著性(P>0.05)。诱导后ADMSCs的cTnT阳性表达、茜素红、碱性磷酸酶和油红O染色呈阳性反应,冻存组与对照组比较差异无显著性(P>0.05)。结论低温保存对ADMSCs体外生长特性和成心肌、成脂肪细胞、成骨细胞的分化潜能差异无显著性。

慢性复合应激对成年大鼠海马NeuroD表达的影响

本实验通过观察慢性复合应激对成年大鼠海马NeuroD表达的影响,探讨慢性复合应激与海马神经发生的关系。将成年雄性大鼠32只随机分为慢性复合应激组(简称应激组)和正常对照组(简称对照组)。应激组动物每天不规律交替暴露于四种复合应激原中,共持续6周。然后运用免疫组织化学染色、Western-blot和RT-PCR技术分别观察海马内NeuroD阳性神经元数量、NeuroD蛋白水平和核酸水平的变化。结果显示:慢性复合应激组动物海马齿状回NeuroD阳性神经元数量明显增多(P<0.05);海马NeuroD蛋白的表达明显增强(P<0.05);海马NeuroD mRNA水平明显上调(P<0.05)。表明慢性复合应激可引起海马NeuroD阳性神经元数量增多和NeuroD表达水平升高,提示慢性复合应激可能促进大鼠海马的神经发生。

3种诱导法诱导CD73^+脂肪间充质干细胞成心肌细胞效果的比较

目的从脂肪来源的间充质干细胞(ADMSCs)的混合细胞群中分离纯化出CD73阳性的细胞亚群,证明几种不同诱导法诱导CD73细胞的成心肌分化潜能。方法体外分离培养1～3月龄小鼠的ADMSCs,利用流式细胞仪从ADMSCs中分选出CD73+和CD73-两个细胞亚群。分别培养两组细胞,利用5-氮杂胞苷(5-aza)、心肌组织裂解液和5-aza+心肌组织裂解液对两组分选出的细胞分别进行成心肌的诱导。利用免疫细胞化学技术检测3种诱导法的成心肌效果。结果未分选的ADMSCs可分化为成脂和成骨细胞,分选的CD73+细胞具备分化为心肌细胞的良好潜能。3种诱导法均能诱导CD73+ADMSCs向心肌方向分化,5-aza诱导CD73+ADMSCs分化为心肌细胞率为(22.99±6.72)%,心肌组织裂解液组心肌细胞率(14.12±5.42)%,5-aza+心肌组织裂解液组心肌细胞率(26.94±6.11)%。3种方法比较,5-aza+心肌组织裂解液的诱导效果最佳(P<0.05)。结论 CD73+比CD73-的ADMSCs更易于分化为心肌细胞。化学诱导因素和体外模拟心肌微环境,可高效诱导脂肪间充质干细胞分化为心肌细胞。

MAPK的抑制剂SB203580和PD98059对N2a细胞神经细丝磷酸化的影响

阿尔茨海默病(Alzheimer's disease，AD)是一种常见的神经退行性疾病，临床表现为进行性的学习记忆及认知功能障碍，其两大特征性病理改变是老年斑(senile plaque，SP)和神经原纤维缠结(neurofibrillary tangles，NFTs)。已经发现NFTs是由过度磷酸化的神经元骨架蛋白成分(tau蛋白和神经细丝NF形成的。

L-NNA治疗大鼠急性脊髓损伤的实验研究

目的 观测Ｌ－ＮＮＡ治疗大鼠急性脊髓损伤后的行为学、脊髓神经元一氧化氮合酶（ＮＯＳ）、Ｎｉｓｓｌ体及其超微结构变化。方法 用运动评分和倾斜板评分法；ＮＡＤＰＨｄ组织化学技术、Ｎｉｓｓｌ法和透射电镜方法。结果 １．行为学变化：Ｌ－ＮＮＡ治疗组九鼠的后肢运动能力及倾斜板评分均较生理盐水对照组增强（Ｐ＜０．０１）；２、脊髓ＮＯＳ阳性神经元染色较生理盐水对照组浅．两组光密度比较 Ｐ＜０．０５；３．脊髓神经元 Ｎｉｓｓｌ染色，生理盐水对照组显示 Ｎｉｓｓｌ体移位、减少，甚至消失等现象，这些改变在Ｌ－ＮＮＡ治疗组较轻；４．超微结构观察，生理盐水对照组脊髓神经元胞质呈空泡样变．线粒体等细胞器变性，髓鞘严重变形，少数髓鞘呈线团状改变，常伴有高电于密度的块状沉积物。但Ｌ－ＮＮＡ治疗组脊髓神经元及大部分神经纤维的髓鞘结构清晰。结论 大鼠急性脊髓损伤可诱导神经元ＮＯＳ表达，Ｌ－ＮＮＡ可对其损伤修复起促进作用。

变异亨廷顿病蛋白凝聚物的分子生物学基础及选择性神经病理学

亨廷顿病是一种常染色体显性遗传性神经退行性疾病 ,临床上可至神经系统功能障碍 ,目前尚无任何有效方法治疗。本文通过近年来有关亨廷顿病的研究 。

CREST对N2a细胞突起生长的影响

目的观察钙反应性反式激活因子(CREST)过表达对小鼠神经母细胞瘤(N2a)细胞突起生长的影响。方法实验分为3组,实验组用pCMV-HA-CREST转染的N2a细胞,空载体对照组用pCMV-HA转染的N2a细胞,空白对照组用未转染任何试剂的N2a细胞,分别加入70mmol/L KCl孵育过夜。在转染后24h,48h采用考马斯亮蓝染色法检测N2a细胞突起生长状态。结果在转染后24h,CREST基因过表达的细胞与两对照组细胞相比较,细胞突起生长差异无显著性。在转染后48h,CREST基因过表达的细胞与两对照组细胞相比较,突起生长明显,部分突起交织成网络。两对照组间在细胞转染后各时间点突起生长状态差异无显著性(P<0.05)。结论过表达CREST可促进N2a细胞突起的生长。

Tau蛋白在神经元细胞质和细胞核内的不同功能及其磷酸化对阿兹海默病的影响

Tau蛋白的功能,现有的研究结果已经比较清晰,涉及多种胞内异常,包括自噬、轴质运输、神经极性的紊乱,以及胞质Tau蛋白分泌到胞外所引起的一系列变化。Tau蛋白在细胞质和细胞核内具有不同功能,在胞质中以微管相关蛋白(microtubule-associated proteins,MAPs)形式承担运输、细胞支架和细胞运动等功能;在核内大量存在于核仁中,并作为端粒成分保护核内DNA;糖原合酶激酶-3(glycogen synthase kinase-3,GSK-3)、磷酸腺苷活化蛋白激酶(adenosine-monophosphate activated protein kinase,AMPK)、微管亲和调节蛋白激酶(microtubule-affinity regulating kinases,MARKs)和腺苷酸环化酶依赖的蛋白激酶(cyclic AMP-dependent protein kinase,PKA)对Tau蛋白异常磷酸化的影响,并由此讨论Tau蛋白在老年痴呆等神经退行性疾病中的可能作用。