Anisomycin过度激活丝裂原活化蛋白激酶使tau发生过度磷酸化(英文)

阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)的病理特征之一是神经元内存在神经原纤维缠结(neurofibrillary tangles,NFTs),后者是由过度磷酸化的微管相关蛋白tau形成的双股螺旋细丝(pairedhelical filaments,PHFs)构成。为了探讨丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)在微管相关蛋白tau磷酸化中的作用及机制,本实验用0.1μg/mL、0.2μg/mL和0.4μg/mL三种不同浓度的MAPK激动剂anisomycin处理小鼠成神经瘤细胞株(mouse neuroblastoma cells,N2a),检测MAPK活性的变化及其与tau蛋白多个AD相关位点过度磷酸化的关系,并检测糖原合酶激酶-3(glycogen synthase kinase-3,GSK-3)和蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)的活性变化。结果显示,anisomycin以剂量依赖的方式激活MAPK活性,但免疫印迹结果显示tau蛋白的Ser-198/199/202位点和Ser-396/404位点的过度磷酸化只在anisomycin浓度为0.4μg/mL时出现,三种浓度的anisomycin均未引起tau蛋白Ser-214位点磷酸化的改变;同时,GSK-3活性在anisomycin为0.1μg/mL时没有明显变化,当anisomycin浓度升高到0.2μg/mL和0.4μg/mL时出现明显增高,而PKA的活性没有明显的改变。使用GSK-3的特异性抑制剂氯化锂(LiCl)则完全阻断MAPK被过度激活导致的tau蛋白磷酸化水平的增高,而同时MAPK活性不受影响。以上结果提示:过度激活MAPK可以导致tau蛋白Ser-198/199/202和Ser-396/404位点过度磷酸化,其机制可能涉及MAPK激活GSK-3的间接作用。

生长休止蛋白7在大鼠小脑皮质中的免疫细胞化学研究

目的探讨生长休止特定蛋白7(Gas7)在大鼠小脑中的表达定位。方法应用Gas7抗血清,对大鼠小脑组织切片进行免疫组织化学染色。结果在小脑皮质分子层可见大量的Gas7阳性神经纤维;蒲氏细胞层中,Gas7主要表达在神经元胞膜和部分胞质处;颗粒层中可见Gas7阳性神经纤维。结论Gas7主要在小脑神经元的定位特征可能与Gas7促进神经元和神经突起发育的调节功能有关。

侧脑室注射PP2对慢性复合应激大鼠学习记忆功能和海马内Fyn、BDNF和TrkB表达的影响

为了探讨酪氨酸激酶抑制剂PP2对慢性复合应激性学习记忆增强大鼠的学习记忆功能和海马内非受体酪氨酸激酶(Fyn)、脑源性神经营养因子(BDNF)和Trk酪氨酸激酶B(TrkB)表达的影响,本实验将成年雄性大鼠22只,随机分为三组:即慢性复合应激组(对照组)、慢性复合应激+注射盐水组(盐水组)和慢性复合应激+注射PP2组(PP2组)。全部动物暴露于复合应激原中6周后,盐水组和PP2组动物分别侧脑室注射生理盐水或PP2(1次/d,共11d)。实验结束后,用Morris水迷宫测试大鼠的空间学习记忆成绩;采用免疫组织化学方法检测Fyn、BDNF和TrkB在海马内蛋白表达的变化。结果显示:与对照组和盐水组相比,PP2组动物的学习与记忆成绩明显下降(P<0.05);海马内Fyn和BDNF蛋白阳性表达减弱(P<0.05);但3组动物海马内TrkB的蛋白表达无显著性差异(P>0.05)。上述结果表明:侧脑室注射PP2可抑制大鼠慢性复合应激性学习记忆能力的增强作用,下调Fyn和BDNF在海马内的表达;提示Fyn和BDNF/TrkB信号转导途径在慢性复合应激增强大鼠学习记忆能力的过程中发挥重要作用。

大鼠心脏缺血再灌注对Ⅰ和Ⅲ型胶原纤维的影响

目的 :探讨缺血、缺血再灌注对心Ⅰ、Ⅲ型胶原的影响。方法 :钳夹冠状动脉左旋支 ,制备缺血和再灌注实验动物模型 ,免疫组化染色。观察各组Ⅰ和Ⅲ型胶原纤维的变化。结果 :( 1 )正常心脏Ⅰ型胶原纤维粗细不等 ,数量较多。Ⅲ型胶原纤维呈散在的斑片状 ,数量较前者少。 ( 2 )缺血组Ⅰ型胶质原纤维结构稍有破坏 ,Ⅲ型胶原纤维含量减少明显。 ( 3 )缺血再灌注组各种微小血管的管壁破坏加重。Ⅰ型胶原纤维形态改变、数量减少 ,Ⅲ型胶原纤维数量明显减少 ,但形态变化不大。结论 :心脏缺血可使胶原纤维破坏 ,再灌注进一步加重胶原成分的破坏。

雌激素对去卵巢大鼠局灶性脑缺血神经细胞凋亡及Bcl-2表达的影响

目的:探讨雌激素对大鼠局灶性脑缺血神经细胞凋亡与Bcl-2表达的影响。方法:雌性Wistar大鼠30只均于脑缺血手术前7d切除双侧卵巢,随机等分为假手术组、手术对照组及雌激素用药组。采用大脑中动脉阻断制成局灶性脑缺血模型。缺血2h再灌注24h后断头取脑,应用TUNEL染色及SP免疫组织化学方法观察并测定梗死灶体积、凋亡细胞数及Bcl-2的表达。结果:假手术组未发现脑梗死灶和凋亡细胞及Bcl-2阳性细胞。雌激素用药组较手术对照组脑梗死体积缩小((59.32±8.95)mm3vs(96.93±11.63)mm3,P<0.05),凋亡细胞数减少((96±12)个vs(126±9)个,P<0.05);Bcl-2表达增强(P<0.05)。结论:雌激素通过上调Bcl-2的表达抑制脑细胞凋亡,具有脑保护作用。

造血干细胞移植后HLA-G表达与移植物抗宿主反应的相关性研究

背景长期以来,许多研究者花费大量精力致力于研究移植排斥与存活相关的机制,但对造血干细胞移植、器官移植的了解依然缺乏。自从上世纪90年代发现HLA-G在诱导母亲与胎儿耐受起着重要的生理作用以来,研究HLA-G作用于异体移植的观点已经得到有力支持。一些研究报道已经证实,同种移植中HLA-G的出现以及可溶性sHLA-G的血清/血浆水平的增加与更好的移植耐受,并增加移植物的存活都有相关性。目的本研究确定造血干细胞移植后血浆sHLA-G水平和单个核细胞(mononuclear cells)膜HLA-G表达与移植物抗宿主反应的关系。方法 225名首次造血干细胞移植患者依据移植物抗宿主反应的活性,分为急性移植物抗宿主反应组(acute GVHR)和慢性移植物抗宿主反应组(chronic GVHR),分别为96名和129名。健康献血者95名作为对照组。流式细胞法分析单核白细胞膜HLA-G(mHLA-G)表达。ELISA法检测血浆中可溶性HLA-G(sHLA-G)含量。ROC曲线评价sHLA的临界值与预判GVHR活性的相关性。RT-PCR和Western印迹分别分析HLA-G mRNA表达和蛋白一致性。免疫组化染色检测12名移植患者皮肤组织HLA-G表达状态。结果外周血单个核白细胞在acute GVHR组和chronicGVHR组都有低表达。急性组外周血中单核细胞CD14+mHLA-G1+细胞占(45.53±17.32)%,而慢性组中只有(10.22%±5.78)%,两者比较差异有统计学意义。sHLA-G5表达水平在急性组有显著性增加。sHLA-G5预判急性GVHR的最佳临界值是253.9μg/L,有很高的诊断准确度。12名acute GVHR患者中10名皮肤组织HLA-G表达阳性。RT PCR和Western印迹分析显示急性GVHR组的血浆sHLA-G5水平显著高于慢性组。结论 ROC曲线分析得出血浆sHLA-G5水平的临界值253.9μg/L可用于预测造血干细胞移植后移植物对宿主的急性排除反应。单核细胞CD14+HLA-DR-HLA-G+细胞具有干细胞特征,该细胞将可能用于移植排除反应的预防和治疗。

慢性复合应激对大鼠胰腺HAP1表达的影响

目的探讨慢性复合应激大鼠胰腺内胰岛内分泌细胞HAP1表达的变化及其意义。方法36只大鼠随机分为两组:慢性复合应激组和正常对照组。应激组动物无规律交替暴露于垂直旋转、睡眠剥夺、捆绑(6h/d)和夜间光照等慢性复合性应激,共6周;实验结束后,采用免疫组织化学和Western-blot等方法检测两组大鼠胰腺胰岛内分泌细胞内HAP1蛋白表达的变化。结果HAP1在大鼠胰腺内选择性表达于胰岛内分泌细胞中。与对照组相比,慢性复合应激组大鼠胰腺HAP1的表达明显增强(P<0.05)。结论6周慢性复合性应激可使大鼠胰腺中胰岛内分泌细胞的HAP1表达加强,提示HAP-1在慢性复合应激促进胰腺内分泌功能中可能发挥一定作用。

慢性捆绑紧张致大鼠记忆受损及海马神经元NOS和Tau5的变化——组织化学与免疫组织化学研究

目的 探讨慢性捆绑紧张对大鼠学习与记忆的影响及其可能的神经生物学机制。方法 选雄性 SD大鼠 18只 ,其中 10只为实验组 ,8只为对照组。对实验组采用捆绑器每天捆绑 6 h,2 1天后用 Y迷宫对两组大鼠进行行为检测 ,并用酶组织化学和免疫组织化学方法观察海马内一氧化氮合酶 (NOS)阳性神经元及 Tau蛋白 (Tau5 )免疫反应的变化。结果 1实验组大鼠学会躲避电击的次数为 35 .7± 7.5次 ,对照组为 2 5 .2± 2 .8次 ,P<0 .0 1;2海马右侧 CA1 区 NOS阳性神经元数目 ,对照组 2 7.2± 4.8个 ,实验组 38.9± 6 .4个 ,P<0 .0 5 ;NOS阳性神经元胞质平均灰度 ,对照组 170 .7± 11.8,实验组 16 2 .5± 12 .6 ,P<0 .0 5 ;3海马右侧 CA3 区 Tau5免疫阳性产物的平均灰度 ,对照组 16 1.7± 12 .8,实验组 145 .8± 13.8,P<0 .0 5。结论 一氧化氮产生过多而导致的神经毒性作用可能是慢性捆绑紧张导致动物学习与记忆功能受损的部分神经生物学机制 ,而海马 CA3 区神经元内所有的 Tau蛋白 (磷酸化及非磷酸化的 Tau)的总量增多说明 Tau蛋白的变化可能在此过程中起一定的作用。

动态和延迟增强MRI诊断早期股骨头骨骺软骨缺血的实验研究

目的:研究动态和延迟增强MRI诊断乳猪早期股骨头骨骺软骨缺血的价值。材料和方法:24例2~3周龄乳猪随机分为正常组10例,缺血组14例。缺血模型制作采用双髋关节蛙式位固定1h^12h,MRI扫描序列包括SET1WI、FSET2WI、动态和延迟增强MRI扫描。扫描完成后解除固定,并于1d和1周后行MRI复查。采用时间-信号强度曲线观察股骨头骨骺二次骨化中心首过灌注状态并测量相对强化比率,采用延迟增强MRI信号变化观察骨骺软骨的造影剂弥散情况,并与组织学检查行对照研究。结果:正常组10例双侧股骨头骨骺二次骨化中心动态增强扫描呈早期快速强化,相对强化比率平均值为1.51±0.46。延迟扫描骨骺软骨强化均匀。缺血组14例,固定3h和6h者各5例,固定1h和12h者各2例。14例共28个股骨头中,MRI平扫均未见异常。动态MRI增强扫描显示24个股骨头骨骺二次骨化中心呈低灌注状态,相对强化比率平均值为0.34±0.13,与正常组比较有显著统计学差异。延迟MRI扫描20个股骨头骨骺呈片状不强化或强化减低区。其中,4个股骨头可见灌注异常而延迟增强MRI扫描呈正常强化。1d后复查,13个股骨头恢复正常强化,另7个股骨头1周后复查也恢复正常强化。组织学检查显示所有28个股骨头骨骺均未见缺血坏死征象。结论:动态MRI增强扫描能敏感地发现乳猪蛙式位固定后股骨头骨骺二次骨化中心的早期缺血性改变,延迟增强MRI能很好地显示骨骺软骨的缺血,两者结合使用能较好地评价股骨头骨骺软骨早期缺血及其恢复。

电针对大鼠脑缺血海马损伤区神经元δ-连环素表达的影响

目的探讨电针对脑缺血海马损伤区神经元δ-连环素表达的影响及其意义。方法应用免疫组织化学方法检测δ-连环素在海马CA1区的表达。结果电针组大鼠缺血侧海马CA1区δ-连环素的阳性反应产物比缺血模型组增多(P<0.05)。结论本试验的结果提示,电针可能通过上调δ-连环素的表达,从而对神经元起到保护作用。

糖尿病脑病海马神经元凋亡的实验研究

目的检测糖尿病大鼠学习与记忆成绩及海马神经元凋亡情况,探讨糖尿病对学习与记忆影响的机制。方法Wistar大鼠共24只,随机分成2组,对照组12只,糖尿病组12只,糖尿病组用链脲佐菌素(STZ)制模,满12周后,用Y-迷宫检测大鼠学习与记忆成绩,处死动物取脑,应用TUNEL法、HE染色及图像分析技术对大鼠海马进行观察。结果糖尿病组大鼠学习成绩降低(P<0.05),海马神经元数目较正常组减少(P<0.05),并出现TUNEL法阳性细胞。结论海马神经元凋亡可能是糖尿病大鼠学习与记忆障碍的机制之一。

细胞免疫缺陷与认知衰老的关系研究

目的 探讨细胞免疫缺陷与认知衰老的关系及其可能的作用机制.方法 随机选取相同周龄（22～24周龄）的细胞免疫缺陷小鼠（Balb/c-nu/nu裸鼠）和正常小鼠（Balb/c）各6只,用Western blot法分析海马突触体素（Synaptophysin,Syn）表达水平和ELISA法检测海马促炎细胞因子IFN-γ、TNF-α含量.结果 细胞免疫缺陷小鼠海马Syn表达水平显著低于正常小鼠（P＜0.05）,并伴有IFN-γ水平显著增高（P＜0.01）.结论 细胞免疫缺陷加速认知衰老过程,其机制可能与其所致的海马突触数量减少和IFN-γ增高有关.

慢性复合应激对大鼠学习和记忆的影响

本文观察慢性复合应激对海马长时程增强(LTP)和一氧化氮合酶1(NOS1)表达变化的影响,并探讨了其在学习与记忆中的作用。将Wistar大鼠随机分为对照组和慢性复合应激组,每组各10只。应激组动物采用4种应激原无规律、交替性地进行长达6周的慢性复合应激试验。实验过程中测定动物血清皮质酮(CORT)水平,采用Morris水迷宫和Y迷宫测试大鼠学习和记忆成绩,记录海马齿状回LTP群体峰电位(PS)幅值的变化,同时观察海马CA1及齿状回区NOS1阳性神经元数目的变化。结果显示:(1)与对照组比较,慢性复合应激组动物在应激第4周和第6周时,血清皮质酮浓度的比值显著增高(P<0.05,P<0.01);(2)高频刺激(HFS)后各时间点的PS幅值增高更为明显(P<0.01);(3)Morris水迷宫和Y迷宫实验后慢性复合应激组动物的学习和记忆成绩优于对照组(P<0.05,P<0.01);(4)慢性复合应激组和对照组大鼠海马齿状回NOS1阳性神经元个数分别为8.80±3.91和5.44±1.14,两者间有统计学差异(P<0.05)。以上结果提示,慢性复合应激对大鼠的学习和记忆有一定的影响,可能与齿状回群体峰电位幅值增强和NOS1表达增强有关。

细胞免疫缺陷对海马盐皮质激素受体和糖皮质激素受体表达的影响

目的探讨细胞免疫缺陷对海马盐皮质激素受体(MR)和糖皮质激素受体(GR)表达水平的影响及意义。方法随机选取不同年龄(1周,7周)的雄性裸小鼠(Balb/c-nu/nu)各6只作为实验组,另随机选取与实验组动物年龄、性别、数量相一致的正常Balb/c小鼠作为对照组;所有动物采用RT-PCR方法检测其海马中MR、GR的mRNA变化。结果与正常对照组相比,1周裸小鼠MR的mRNA表达无明显变化,7周裸小鼠MR的mRNA水平较正常对照组显著上调(P<0.05);1周与7周裸小鼠GR的mRNA水平均较正常对照组显著上调(P<0.05)。结论早期裸小鼠海马内GR和MR表达上调可能是引起认知减退的原因。

HAP-1在慢性复合应激大鼠肾上腺的表达

目的探讨慢性复合应激大鼠肾上腺髓质细胞亨廷顿蛋白相关蛋白1(Huntingtin-associated protein 1,HAP-1)表达的变化及其意义。方法36只大鼠随机分为两组:慢性复合应激组和对照组。应激组动物进行6周的垂直旋转、睡眠剥夺、捆绑(6h/d)和夜间光照等慢性复合性应激试验;实验结束后,所有动物采用免疫组织化学、Western-blot以及RT-PCR等方法检测肾上腺髓质细胞内HAP-1蛋白和mRNA水平的变化。结果与对照组相比,慢性复合应激组的大鼠肾上腺髓质中HAP-1的表达明显增强(P<0.05),HAP-1 mRNA水平明显升高(P<0.05)。结论6周慢性复合性应激大鼠HAP-1在肾上腺髓质区的表达加强,mRNA水平提高。提示HAP-1在慢性复合应激促进肾上腺功能中可能发挥一定作用。

几种SARS DNA疫苗对BALB/c小鼠重要器官影响的组织病理学研究(英文)

目的用组织病理学方法观察几种SARS DNA疫苗对BALB/c小鼠重要器官的影响,为研制安全有效的SARS DNA疫苗奠定基础。方法用RT-PCR的方法从SARS冠状病毒(SARS-CoV)基因组中扩增出M片段、E片段、N片段和S基因的两个主要片段S1,S2,然后将这些基因片段分别亚克隆至pVAC真核表达载体,制备出几种SARS DNA疫苗pVAC-S1、pVAC-S2、pVAC-M、pVAC-E、pVAC-N。用这些疫苗分别或联合免疫BALB/c小鼠后,取小鼠重要器官心、肝、脾、肺、肾,观察其组织病理学改变。结果鼠心、脾和肾未见明显的组织病理学异常,但部分小鼠的肝和肺表现出下列病理变化:肝:出现片状肝细胞染色加深和肝细胞核固缩等凋亡早期改变,部分还可见到肝细胞水变性和肝窦变窄甚至消失等病变。肺:肺泡隔增厚,肺泡轮廓消失,或肺组织淤血水肿,甚至出现支气管肺炎改变。同时,在pVAC空质粒对照组也可见个别小鼠出现上述肝、肺病变。结论由于对肝、肺产生组织病理学异常改变,制备高效、安全的SARS DNA疫苗还有待进一步研究和完善,载体的选择和质粒的用量也是必须加以考虑的问题。

慢性复合应激对大鼠胃幽门HAP1表达的影响

目的:探讨慢性复合应激大鼠胃幽门内分泌细胞亨廷顿蛋白相关蛋白1(HAP1)表达的变化及其意义.方法:大鼠12只随机分为慢性复合应激组和正常对照组.应激组动物进行6wk的垂直旋转、睡眠剥夺、捆绑(6h/d)和夜间光照等慢性复合性应激试验;实验结束后,所有动物采用免疫组织化学和Western Blot等方法检测胃幽门内分泌细胞内HAP1蛋白表达的变化.结果:HAP1在大鼠胃幽门主要表达在胃泌素细胞中.与对照组相比,慢性复合应激组大鼠胃幽门内分泌细胞内HAP1的表达增强(P<0.05).结论:慢性复合性应激大鼠HAP1在胃幽门胃泌素细胞的表达加强.

糖尿病大鼠海马中NO含量的变化

目的观察糖尿病大鼠海马中NOS表达及NO含量的变化,研究糖尿病对海马的影响。方法用Wista大鼠,共24只,随机分成2组,正常组12只,糖尿病组12只,糖尿病组用STZ制模,满12周后,取脑应用生物化学方法、免疫组化及Westernblot技术对大鼠海马进行观察。结果糖尿病组大鼠海马NOS的表达及NO含量较正常组增高(P<0·05)。结论糖尿病可引起海马的病理改变。

疼痛对不同年龄大鼠脊髓背角Caspase-3表达的影响

目的探讨凋亡相关蛋白Caspase-3在大鼠疼痛模型脊髓背角中的表达及与年龄的关系。方法应用免疫组织化学和免疫印迹反应方法检测Caspase-3在脊髓背角的表达。结果未刺激侧不同年龄组间Caspase-3表达量无显著性差异(P>0.05);疼痛刺激侧青年组Caspase-3表达量明显高于中、老年组(P<0.05),中、老年组之间Caspase-3表达量无显著性差异(P>0.05);老、中、青各组刺激侧Caspase-3的表达均较同组未刺激侧增加(P<0.05)。结论疼痛刺激可以促进脊髓背角Caspase-3的表达,并且疼痛刺激时Caspase-3的表达与年龄有密切的关系。