人hepcidin真核表达载体的构建及稳定转染细胞系的建立

目的构建人hepcidin全长结构基因真核表达载体,建立稳定高表达hepcidin的HepG2细胞系,以应用于拮抗hepcidin从而增强铁吸收的活性药物筛选。方法化学合成结合PCR拼接hepcidin全长结构基因,插入原核表达载体pMD18-T中,测序正确后再经HindⅢ与EcoRⅠ双酶切,定向插入真核表达载体pcDNA3.0内,酶切鉴定后,采用脂质体转染法将重组质粒转染人HepG2细胞,G418选择抗性细胞克隆,ELISA检测转染细胞hepcidin的蛋白表达。结果经酶切鉴定,成功构建hepcidin真核表达载体pcDNA3-hepcidin;重组质粒转染HepG2,经G418筛选3周获得抗性细胞克隆,其hepcidin蛋白表达量为普通HepG2细胞表达量的3倍。结论成功构建了稳定高表达hepcidin的HepG2细胞,该稳定转染细胞系的建立为进一步研究hepcidin降低肠道铁吸收的分子机制以及筛选拮抗hepcidin作用的活性药物奠定了实验基础。

知母宁的体外抗单纯疱疹病毒Ⅱ型作用

目的检测知母宁体外抗单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSVⅡ)作用。方法以Vero细胞为宿主细胞,阿昔洛韦为阳性对照药物,采用中性红染色法测定不同药物加入方式下知母宁的体外抗HSVⅡ有效率,并检测其抑制病毒作用的时效关系及对病毒感染性的影响。结果知母宁表现出对HSVⅡ333的综合抑制作用和抑制病毒吸附后的后续复制增殖作用,其抗病毒有效率(ER%)最高达80%,这两种作用的半数有效浓度(EC50)均约为0.8mg/ml。知母宁浓度≥2.08mg/ml时能显著抑制HSVⅡ,ER%最高达95%。知母宁还有较弱的预防病毒吸附作用。知母宁抗病毒作用的时效关系研究表明,随药物作用时间延长,低浓度药物抗病毒有效率呈减小趋势,在高浓度时(≥2.08mg/ml)其病毒抑制强度基本维持稳定。随药物作用时间延长,知母宁可明显削弱病毒的感染性,知母宁组病毒的-lgTCID50值较病毒对照组的下降值呈增大趋势,其下降百分比维持稳定,约为40%。结论知母宁体外抗单纯疱疹病毒Ⅱ型效果好,且其抗病毒作用具有多个作用点。

牛磺胆酸钠滴眼剂的制备及药效学初步研究

以胆酸为原料合成牛磺胆酸钠 ,制备了牛磺胆酸钠滴眼剂 ,并对其 p H值、渗透压及稳定性等理化性质进行了测定。通过动物实验证实 ,该滴眼剂无明显刺激性。在此基础上 ,以家兔为实验动物 ,采用兔眼石灰碱烧伤模型进行药效学观察 ,结果表明 ,牛磺胆酸钠滴眼剂有较显著的疗效。提示 :用人工合成的方法制备的牛磺胆酸钠滴眼剂对治疗眼科疾病具有一定的临床意义和开发价值。

化疗药物在肿瘤免疫微环境调节中的应用

尽管肿瘤的诊疗技术在不断的探索中进步,我国恶性肿瘤患者死亡率仍然呈现持续增长的趋势,癌症已经超过心血管疾病成为威胁人类健康的第一大杀手。肿瘤的形成需经历一个复杂的过程,是机体内癌基因活化、抑癌基因失活以及稳定性基因发生改变的综合结果。但实际上,在肿瘤的整个发生发展过程中。