中草药抗生育作用研究新进展

中草药作为天然植物药材,无论是抗御疾病还是抗生育都有悠久的应用史。随着现代医药的发展,激素类避孕药逐渐占据市场,但中草药某些抗御疾病的作用仍无可替代,特别是在生殖领域。近年实验研究发现,一些中草药不仅具有抗生育作用,甚至兼具抗病原微生物作用。综述中草药抗生育作用研究现状及其抗生育的有效成分,为具有抗生育作用中草药的进一步研究和临床应用提供依据。

干细胞向生殖细胞分化的研究进展

胚胎干细胞(ESC)是一种多能干细胞,具有向生殖细胞分化的能力,由于具有致瘤性和伦理问题,限制了ESC向临床应用发展的前景。成体干细胞(ASC)也是一类多能干细胞,理论上也能分化为生殖细胞,但诱导分化过程往往受到阻滞。诱导性多能干细胞(iPS)是一种具有多能性的重编程体细胞,一定程度上可替代ESC用于基础和临床研究。目前,全球不孕不育的发生率呈逐年递增的趋势,充分认识干细胞向生殖细胞分化的机制是解决该难题的重要理论前提。就各种干细胞向生殖细胞分化的研究进展作一综述。

少弱精子症患者睾丸组织中NOSTRIN的表达及其与eNOS的相关性研究

目的通过测定少弱精子症患者睾丸组织中内皮型一氧化氮合酶运输介导物(endothelial nitric oxide syn-thase traffic inducer,NOSTRIN)和内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)的表达,探讨其与少弱精子症发病的相关性。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测11例严重少弱精子症患者(病例组)和7例正常男性(正常组)睾丸组织中NOSTRIN mRNA的表达;分光光度法测定睾丸组织中eNOS的活性;应用硝酸还原酶法测定睾丸组织上清液中NO代谢产物NO2-/NO3-水平。结果病例组患者睾丸组织中NOSTRIN mRNA呈弱表达(0.312±0.076),明显低于正常组(0.793±0.082,P<0.01);病例组患者睾丸组织eNOS活性[(33.73±3.58)U/mg]与正常组[(17.69±3.84)U/mg]比较显著增强(P<0.01);病例组患者睾丸中NO2-/NO3-水平为(48.56±8.49)μmol/L,较正常组(25.37±9.61)μmol/L显著升高(P<0.01);病例组睾丸组织中NOSTRIN表达水平与eNOS活性呈负相关(r=-0.57,P<0.01),与NO代谢产物NO2-/NO3-同样呈负相关(r=-0.61,P<0.01)。结论少弱精子症患者睾丸组织中NOSTRIN表达水平降低,eNOS活性增强,NO2-/NO3-水平升高,可能与少弱精子症的发生有着相关性。

人精子染色质损伤及其检测的研究进展

人精子染色质损伤是常见的影响男性生殖能力的重要原因之一,受到遗传、环境和生活习惯等多因素的影响,且与男性不育、复发性流产等有着密切的联系。随着人们对精子染色质结构和功能认识的加深,对精子染色质结构分析技术的不断改进和推广,以及辅助生殖技术越来越广泛的应用,精子DNA损伤逐渐被认识到是一个新的评价精子质量的重要检测指标,对男性生殖力的评估和辅助生殖技术的选择具有重要的临床意义。

维生素E抑制子痫前期脐血清诱导脐静脉内皮细胞中NOSTRIN表达上调的体外研究

目的：探讨子痫前期患者脐血清诱导脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cell，HUVEC）中人内皮型一氧化氮合酶运输介导物（endothelial nitric oxide synthase traffic inducer，NOSTRIN）的表达及维生素E对其表达的调节作用。方法：采用消化培养法培养正常晚孕妇女的HUVEC，传代后待细胞长满至70％～80％后，加或不加维生素E作用30min后分别加入正常妊娠（正常组）及子痫前期（子痫前期组）脐静脉血清，培养48h后，MTI测定细胞活力，RT-PCR测定NOSTRINmRNA的表达，分光光度法测定细胞上清中eNOS的活性。结果：子痫前期患者脐静脉血清培养的HUVEC，其细胞的活力明显低于正常组（P〈0．05），细胞中NOSTRINmRNA的表达量明显高于正常妊娠组（P〈0．01），细胞上清中eNOS的活性明显低于正常组（P〈0．01）；加维生素E预处理后，子痈前期组细胞的活力明显升高（P〈0．05），其细胞中NOSTRIN的表达水平明显下降（P〈0．01），eNOS活性明显升高（P〈0．01）。结论：子痫前期患者脐静脉血清可使HUVEC细胞活力降低、NOSTRIN表达增加以及eNOS活性降低，维生素E可抑制子痫前期患者脐静脉血清诱导的NOSTRIN表达的增加以及eNOS活性降低。

无精子症和生精功能正常者睾丸组织中血红素加氧酶的表达与差异性研究

目的:对人类睾丸组织中表达血红素加氧酶(HO)的细胞进行定位;通过测定原发性无精子症及梗阻性无精子症患者睾丸组织中血红素加氧酶1(HO-1)的表达量与正常睾丸组织中HO-1表达量的差异性,来探讨其与无精子症发病的相关性。方法:应用免疫组化方法对人类睾丸组织中表达HO的细胞进行定位;采用逆转录-荧光定量PCR(FQ-PCR)方法定量检测无精子症患者与正常人睾丸组织HO-1及HO-2基因水平的表达量;应用W est-ern印迹检测各组之间HO蛋白水平表达量。结果:在正常睾丸组织,HO-1主要表达在支持细胞上;而HO-2在支持细胞和各级生精细胞中均有表达;FQ-PCR结果显示非梗阻性无精子症患者睾丸组织HO-1、HO-2的表达量均显著低于正常组及梗阻性无精子症组(P<0.05),差异具有统计学意义。而梗阻性无精子症患者睾丸组织表达HO-1、HO-2的量与正常组相比无显著性差异。W estern印迹结果显示HO-1蛋白水平的表达量差异与基因水平一致。而HO-2的蛋白水平在各组之间表达没有显著性差异。结论:非梗阻性无精子症患者睾丸组织中HO的表达量显著性降低,且HO-1无论是蛋白水平还是基因水平的差异一致。HO-1可以通过抗炎、抗氧化、抗凋亡的机制保护睾丸组织免受各种应激的损伤,从而维护正常的生精功能。可见,HO-1的减少可能与生精功能低下相关,这可能是非梗阻性无精子症的发病机制之一。

生殖细胞核因子及Oct-4在P19细胞系诱导分化中的表达

目的体外培养未成熟畸胎瘤细胞(P 19细胞)并诱导分化,检测生殖细胞核因子(GCNF)及Oct-4在P 19细胞诱导分化前后的表达。方法用全反式维甲酸(ATRA)诱导P 19细胞分化,通过间接免疫荧光染色和RT-PCR方法检测GCNF及Oct-4在P 19细胞诱导分化前后的表达。结果 Oct-4在P 19细胞诱导前呈强阳性表达,诱导2 d后表达下降;而GCNF在P 19细胞诱导前呈阴性表达,诱导2 d后呈阳性表达。结论 GCNF参与了恶性生殖细胞肿瘤的体外分化。GCNF可能是通过下调Oct-4基因的表达参与了恶性生殖细胞肿瘤的分化。

诱导多潜能干细胞在精子发生过程中的研究进展

精子发生是一个复杂的过程,目前关于人类精子发生的认知主要来源于动物模型,而对于人类精子发生的早期阶段,仍不是非常了解。体外精子发生模型的建立不仅能促进深入了解精子发生过程及不育症发病机制,而且有助于男性不育症的临床治疗。本文将对多潜能干细胞(i PSCs)在诱导精子发生过程中的相关研究进行综述,并探讨诱导i PSCs应用于男性不育症临床治疗所面临的问题以及发展前景。

内皮型一氧化氮合酶运输介导物在子痫前期患者胎盘组织中的定位及定量研究

目的探讨内皮型一氧化氮合酶运输介导物(endothelial n itric oxide synthase traffic inducer,NOSTR IN)在子痫前期(pre-ec lampsia,PE)患者胎盘血管内皮细胞中表达的变化及其在子痫前期发病过程中的作用。方法HE染色后镜下观察胎盘组织及血管的病理变化,免疫组织化学方法及W estern b lot检测子痫前期患者胎盘组织中NOSTR IN的表达。结果HE染色显示子痫前期患者胎盘绒毛血管变细,数目减少,血管合体膜增厚,纤维素样坏死明显多于正常妊娠;免疫组织化学显示正常妊娠和子痫前期患者胎盘血管内皮细胞中都有NOSTR IN的表达,但子痫前期患者胎盘血管内皮细胞胞浆染色较正常妊娠明显增强;W estern b lot显示子痫前期患者胎盘组织中NOSTR IN的表达显著高于正常妊娠(P<0.01)。结论胎盘组织中NOSTR IN表达增加可能是子痫前期发病机制的重要环节之一。

PD-1/PD-L1信号通路在妊娠中的研究进展

程序性细胞死亡受体1（Programmed cell death1,PD-1）及其配体（PD-L1和PD-L2）介导的信号通路在调控机体免疫稳态,尤其是T细胞免疫应答和T细胞免疫稳态中发挥重要作用。研究表明,PD-1/PD-L1信号通路除参与自身免疫、慢性感染性疾病、移植排斥和肿瘤免疫逃逸之外,还参与母胎免疫耐受的诱导和妊娠的维持。

男性不育症患者生殖道解脲支原体感染与细胞因子、自身抗体的相关性研究

目的:探讨男性不育症生殖道解脲支原体(UU)感染与细胞因子水平及自身抗体的相关性。方法:按WHO的标准对生育组和不育组(包括少精组、弱精组及无精组)进行精液常规分析,解脲支原体培养;采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测血液和(或)精浆IL-2、IL-6、TNF、AcAb的水平;采用混合抗球蛋白反应试验(MAR)法检测AsAb;采用间接免疫荧光(IFA)法检测ANA。结果:与生育组比较,无精组血液和精浆中IL-2、IL-6、TNF-α水平显著增高,其差异具有统计学意义(P<0.01);弱精症组血液及精浆IL-6水平与生育组相比差异有统计学意义(P<0.05),血液及精浆IL-2、TNF-α水平与生育组相比差异无统计学意义(P>0.05);少精症组血液和精浆中IL-2及血清IL-6与生育组相比差异有统计学意义(P<0.05);在生殖道解脲支原体的培养中不育各组的阳性率均高于生育组;在AsAb、AcAb、ANA的检测中,不育症各组的阳性率均高于对照组,用IFA检测ANA阳性结果中发现,ANA核型均为胞浆颗粒/核颗粒型,而弱精症血清以及不育症各组精浆中未检测出AcAb、ANA。结论:男性生殖道UU感染可诱生细胞因子,打破细胞因子间的平衡,引起体内自身抗体的产生;同时也会影响精液质量,与男性不育密切相关;对男性不育症患者上述指标的检测,并探讨感染、细胞因子及自身抗体之间的相关性,可为不育症的诊断与治疗提供实验依据。

附睾或睾丸精子对梗阻性无精子症ICSI治疗结局影响的系统评价

目的:系统评价梗阻性无精子症患者选择附睾精子或睾丸精子行ICSI治疗对其临床结局的影响。方法:通过计算机检索Pub Med、Medline、EMBASE、Cochrane图书馆和CNKI、VIP、CBM、万方数据库建库至2015年12月有关梗阻性无精子症患者采用附睾精子或睾丸精子行ICSI治疗的文献,由2位研究者按照纳入与排除标准进行文献筛选、资料提取和质量评价,并采用Rev Man5.3软件进行meta分析。结果:共纳入14项试验研究,包括梗阻性无精子症患者1 278例,共计1 552个周期。Meta分析结果显示:梗阻性无精子症患者行ICSI治疗,附睾精子比睾丸精子具有更好的受精率[RR=1.08,95%CI(1.05,1.11),P<0.01];附睾精子和睾丸精子的卵裂率[RR=1.04,95%CI(0.99,1.10),P=0.13]、优质胚胎率[RR=1.01,95%CI(0.93,1.09),P=0.85]、种植率[RR=1.14,95%CI(0.75,1.73),P=0.55]、临床妊娠率[RR=1.14,95%CI(0.98,1.31),P=0.08]以及流产率[RR=0.86,95%CI(0.53,1.39),P=0.54]差异均无统计学意义。结论:梗阻性无精子症患者行ICSI治疗,附睾精子显示出更高的受精率,而在卵裂率、优质胚胎率、种植率、临床妊娠率以及流产率方面,两者临床结局差异不大。

乳腺癌患者原发磷酸化信号转导与转录激活因子3活性和白细胞介素-17表达的临床意义

目的探讨炎性信号通路磷酸化信号转导和转录激活因子3(p-STAT)的原发活化状态及下游细胞因子白细胞介素(IL)-17表达在乳腺癌发生和发展中的作用及其对预后的影响。方法运用免疫组织化学Envision两步法检测了379例乳腺癌患者以及匹配癌旁245例乳腺腺病中IL-17表达和原发性p-STAT3的活化状态,分析了它们与乳腺癌组织学分型、TNM分期、临床分期及预后的相关性。统计学分析:计量数据使用t检验法,计数数据使用χ2检验法。结果 1.IL-17在乳腺癌中的阳性表达率为95.8%,显著高于乳腺腺病中的阳性表达率85.3%(χ2=21.363,P<0.001);具有活性的p-STAT3在乳腺癌中的阳性率为93.6%,也显著高于乳腺腺病中的阳性率62.0%(χ2=97.702,P<0.001)。2.IL-17和p-STAT3在乳腺癌(包括乳腺浸润性导管癌、乳腺浸润性小叶癌和腺导管原位癌分型)中的阳性率与乳腺癌组织学分型无相关性(χ2=1.245,P=0.535>0.05)。3.IL-17和pSTAT3在乳腺癌中的强阳性率分别与淋巴结的转移成正相关(IL-17:χ2=7.806,P<0.01;p-STAT3:χ2=4.053,P<0.05)。4.在乳腺癌组织中,IL-17表达与p-STAT3活性呈正相关(rs=0.136,P<0.01)。结论原发增高的p-STAT3活性及高表达的炎性细胞因子IL-17可能协同作用,产生炎性微环境,从而参与乳腺癌的发生和发展。

尿激酶型纤溶酶原激活因子在小鼠精-卵接触前通讯和体外受精中作用初探

目的:探讨尿激酶型纤溶酶原激活因子(uPA)在雄性促生育中的作用机制。方法:通过检测精子在毛细管内聚集数量的变化来测试小鼠精子体外对uPA和卵细胞的趋化性,以及将卵细胞分别经uPA、uPA抑制剂(PAI-1)以及抗-uPAR抗体预处理后,检测其趋化诱导精子的能力,来反应uPA在精-卵接触前通讯中的作用。其次观察精子经uPA预处理后其受精能力的变化。结果:精子在递减uPA浓度梯度中的聚集数量明显低于等浓度内的(P<0.05);经uPA预处理的卵细胞其聚集精子的能力显著强于未经处理的卵细胞(P<0.05),而用PAI-1预处理卵细胞后,卵细胞聚集精子的能力显著下降(P<0.05);用抗-uPAR抗体预处理卵细胞并不影响卵细胞对精子的聚集作用;uPA处理后的精子与卵细胞共孵育后其受精卵数目多于未经处理的(P<0.05)。结论:精子在体外对uPA和卵细胞均有趋化性;uPA能增加卵细胞对精子的趋化作用,增进精-卵接触前通讯,促进受精。本实验在一定程度上探讨了uPA促男性生育的机制,并为其在临床上的应用提供一定的理论依据。

1145例捐精者筛查结果与未完成捐精流程原因分析

目的:分析人类精子库的接待和招募工作质量,以及精源不足的问题。方法:本研究对湖北省人类精子库2011年9月至2012年4月的1 145例捐精者的招募工作进行统计,对捐精者淘汰原因进行分析,并对合格而未捐精者进行面谈和电话回访。结果:1 145例捐精者中,学生551例(48.12%),社会人群594例(51.88%);参与第一次精液质量检查后未继续捐精503例(43.93%),其中学生202例(占学生筛查人数36.67%),社会人群301例(占社会筛查人群50.67%);两次精液质量筛查均不合格432例(37.73%);实验室检查不合格45例(3.93%),其中解脲脲原体阳性16例;通过精液筛查和实验室检查的合格捐精者165例(14.41%),未能完成整个捐精流程21例(12.73%),最终完成捐献流程的捐精者144例。结论:人类精子库普遍存在筛查合格率低、捐精完成率低,如能让捐精者有效地完成捐精流程,有利于提高捐精者合格率及降低精子库的运行成本;通过接待时的面谈和电话回访对他们不能按流程完成捐精的原因进行分析表明,精子库需加强招募工作及捐精者第一次来精子库时的讲解,提高捐精者对精子库的满意度和信任度,以提高捐精者完成捐精流程率。

尿激酶型纤溶酶原激活因子在精子趋化运动中的作用

目的:研究尿激酶型纤溶酶原激活因子(uPA)是否能诱导精子产生趋化性运动,从而探讨uPA在治疗男性不育中的可能作用机制。方法:采用精子聚集毛细管内的方法来检测精子趋化性。根据毛细管内自下而上uPA浓度梯度的方向将实验分为递增浓度A组、递减浓度B组和对照C组。A组毛细管内的趋化液以及精子培养皿内的处理液分别是不同浓度的uPA和Ham'sF-10;B组相反,分别为Ham'sF-10和uPA;C组毛细管和精子培养皿内的液体均为Ham'sF-10。然后检测在不同时间点不同组毛细管内聚集的精子密度。结果:①精子顺递增的uPA浓度梯度进行趋化运动。A组毛细管内液体对精子的聚集作用明显大于B组和C组(P<0.05)。②20IU/ml的uPA对精子趋化作用最强。③3组中的精子密度随着时间的延长趋于增加,但在20、30min2个时间点,3组的精子密度之间差异有显著性(P<0.05)。④uPA除了对精子有趋化作用外,还能增加精子活力,促进精子运动。结论:uPA在体外既能诱导精子产生趋化性运动,又能增加精子的活力,推测此为uPA治疗男性不育的作用机制之一。

卵裂期胚胎冻融后发育速度可能作为胚胎植入潜能的评估参数

目的分析卵裂期胚胎冻融后的发育速度与其临床结局的关系，探讨胚胎解冻后的发育速度能否成为评估其植入潜能的参数。方法回顾性分析卵裂期胚胎解冻后继续培养情况，比较1426个移植时无囊胚形成的周期（无囊胚形成组）及113个移植时已有囊胚形成的周期（囊胚形成组，根据囊胚个数分为1个囊胚组和1个以上囊胚组）的种植率及临床妊娠率。结果无囊胚形成组与囊胚形成组的种植率（26．49％vs．34．96％）及临床妊娠率（45．09％ vs．59．29％）均有统计学差异（P〈0．05），且1个以上囊胚组的种植率（48．81％）、临床妊娠率（74．29％）均显著高于1个囊胚组（分别为28．57％、52．56％）及无囊胚形成组（分别为26．49％、45．09％）（P〈0．05），囊胚形成组及其两个亚组的多胎率较无囊胚形成组有升高趋势，但无统计学差异（P〉0．05）；8细胞胚胎组及融合胚胎组移植时形成囊胚的比例都显著高于8-细胞以下胚胎组（5．21％ vs．11．50％ vs．0．85％）（P〈0．05）；且8-细胞胚胎组与融合胚胎组形成囊胚的比例也有显著差异（P〈0．05）。Logistic分析表明，移植个数及移植的囊胚数与临床妊娠显著相关（P〈0．05）。结论卵裂期优质胚胎解冻后继续培养18～24h，部分胚胎已发育为囊胚，且这些胚胎的植入能力和发育潜能更好。对于解冻后培养有1个以上囊胚形成的患者，建议行选择性单胚胎移植。

甲基化DNA免疫沉淀-荧光实时定量PCR检测人精浆游离DNA睾丸和附睾特异性甲基化启动子

目的:建立检测精浆游离DNA(cfsDNA)启动子甲基化水平的甲基化DNA免疫沉淀-荧光实时定量PCR(MeDIP-qPCR)方法。方法:提取精液参数正常(6例)和输精管结扎(6例)男性的cfsDNA,将两组不同个体的cfsDNA分别进行混合,超声处理后形成DNA片段,通过MeDIP分离甲基化DNA片段,然后用qPCR方法检测启动子甲基化水平。结果:精液参数正常组的PRAME、PEG10、MORC1、GML、HOXA5、DNMT3L、SNURF、MSH4、DAZ1和CLPB启动子甲基化水平分别为14.93%、2.64%、0.69%、2.66%、17.50%、21.10%、5.98%、2.28%、13.50%和3.86%,明显低于输精管结扎组的121.25%、73.62%、16.25%、42.90%、76.74%、112.40%、59.79%、25.85%、91.90%和64.53%。其中,PRAME、MORC1、GML、HOXA5、DNMT3L、SNURF、MSH4和DAZ1等8个启动子MeDIP-qPCR的检测结果与启动子甲基化芯片结果一致。结论:通过MeDIP-qPCR方法可以定量检测到cfsDNA中的特异性启动子甲基化,为确定cfsDNA中睾丸和附睾特异性甲基化启动子提供了有效途径。

CR16在特发性无精子症患者睾丸组织中的表达

目的:研究糖皮质激素区域表达基因16(corticosteroids and regional expression 16,CR16)在特发性无精子症患者睾丸组织中的表达,探讨CR16在精子发生中的作用。方法:采用免疫组化法和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测CR16蛋白和CR16 mRNA在48例特发性无精子症患者(病例组)和10例正常生育男性(正常组)睾丸组织中的表达情况。结果:CR16蛋白表达于睾丸生精小管上皮,主要分布在支持细胞与生精细胞连接区,在特发性无精子症患者睾丸组织中的表达显著弱于正常生育男性睾丸组织中的表达。CR16 mRNA在病例组睾丸组织中的表达水平显著低于正常组。结论:特发性无精子症患者睾丸组织中CR16表达水平显著降低,这可能与无精子症相关。