野山楂根拮抗雷公藤多苷对雄性大鼠生殖损伤作用的研究

目的:观察中药野山楂根水煎剂对雷公藤多苷所致雄性不育大鼠生育力的影响。方法:将成年雄性大鼠随机分组,分别给予雷公藤多苷片溶液(10 mg.kg-1),野山楂根水煎剂(1.8,5.4,18 g.kg-1)+雷公藤多苷片溶液(10 mg.kg-1)和蒸馏水(1 mL.kg-1)灌胃,8周后停用雷公藤多苷,中药组继续行野山楂根灌胃。4周后各组动物与成年雌性大鼠交配,观察交配雌鼠妊娠率和平均胚胎、黄体数。测定雄鼠生殖器官性腺脏器指数、附睾精子计数、活力、存活率,观察各组动物睾丸、附睾组织病理和超微结构改变,放射免疫法测定血清和睾丸组织睾酮(T),血清卵泡刺激素(FSH)和促黄体生成素(LH)含量。结果:与雷公藤多苷模型组比较,野山楂根组交配雌鼠妊娠胎数、雄鼠睾丸、附睾脏器指数以及附睾精子计数、活力均有提高(P<0.05);野山楂根组精子超微结构较模型组有明显恢复;睾丸组织匀浆T显著高于模型组(P<0.01)。结论:野山楂根能够拮抗雷公藤多苷对雄性大鼠的生殖损伤作用,提高不育症模型雄鼠的生育力。

t(14;21)平衡易位携带者体细胞和生殖细胞的细胞遗传学研究(英文)

15%-20%的妊娠因为自发流产而中止,其中约50%是因为染色体异常所致。夫妇中的一方为平衡的染色体异常携带者时,即可能产生不平衡的配子和胚胎,临床症状可以有不同程度的变化:如不育、反复流产、甚至产出染色体综合症的患儿。以临床接诊的一对具有反复自然流产史夫妇为研究对象,常规进行精液、激素水平检测。取患者外周血淋巴细胞用RPMI1640培养基进行短期培养,经低渗、固定处理制备染色体标本片,对染色体数目和结构进行核型分析。选用特异的21qter和14qterDNA标记作为探针,对患者外周血淋巴细胞中期染色体进行FISH分析。运用FISH技术对患者精子细胞进行研究,配合流式细胞分析技术对精细胞DNA组份进行检测,分析配子中遗传物质的组成及各种类型配子的比例。结果发现女方核型正常为46,XX,男方核型为罗伯逊易位的携带者45,XY,-14,-21,+t(14;21)。患者外周血体细胞的分裂相染色体FISH显示一个细胞中分别存在1个红色的21qter和1个绿色的14qter杂交信号,另外有1个红色和1个绿色信号共同存在于一条由易位形成的亚中着丝粒染色体上。在患者精液样本的精细胞FISH研究中,可以观察到5种不同类型的杂交信号,异常的配子的种类与理论推断相同,但各型所占的比例有其特点,结合精液中精细胞流式细胞术的分析表明,平衡的单倍体配子占71%,不平衡的配子占29%。通过国内外文献资料统计,对罗伯逊易位染色体的常见和罕见类型进行综述,为其生育的临床治疗方案提供建议。

少弱精子症和正常生育男性精液中尿激酶及其受体含量的研究

目的:通过研究精子正常和异常男性精浆和精子中尿激酶及受体含量差异,以了解尿激酶及受体与男性生育力的关系。方法:采用双抗体夹心ELISA法测定22例正常生育男性和44例少弱精子症男性精浆和精子中尿激酶及受体的含量。结果:①正常男性精浆尿激酶平均含量为(4 803.69±602.78)mU/L,与少弱精子症组[(4 061.35±736.23)mU/L]相比,差异有显著性(P<0.01)。正常生育男性精子尿激酶平均含量为(30.29±3.16)mU/106个精子,与少弱精子症组[(20.51±4.2)mU/106个精子],差异有显著性(P<0.01)。②正常生育男性精子尿激酶受体平均含量为(12.97±3.11)mU/106个精子相比,与少弱精子症组[(6.09±1.45)mU/106个精子]相比,差异有显著性(P<0.01)。③精子和精浆中尿激酶含量和精子活率和活力呈显著正相关。结论:尿激酶和男性生育力相关,少弱精子症和正常生育男性精液中尿激酶及其受体含量存在差异。

环境雌激素对雄性生殖系统的影响及研究进展

近年来,环境化学物的内分泌干扰效应日益引起学术界的关注。具有雌激素活性或抗雄激素效应的一类化学物质称之为“环境雌激素”。大量实验表明,环境雌激素具有生殖和/或发育毒性。其作用机制非常复杂,检测方法尚需标准化。介绍环境雌激素对男性生殖系统的影响、作用机制及检测方法。重点讨论环境雌激素的作用机制和检测的研究进展。为以后的研究课题提供了方向。

中草药抗生育作用研究新进展

中草药作为天然植物药材,无论是抗御疾病还是抗生育都有悠久的应用史。随着现代医药的发展,激素类避孕药逐渐占据市场,但中草药某些抗御疾病的作用仍无可替代,特别是在生殖领域。近年实验研究发现,一些中草药不仅具有抗生育作用,甚至兼具抗病原微生物作用。综述中草药抗生育作用研究现状及其抗生育的有效成分,为具有抗生育作用中草药的进一步研究和临床应用提供依据。

干细胞向生殖细胞分化的研究进展

胚胎干细胞(ESC)是一种多能干细胞,具有向生殖细胞分化的能力,由于具有致瘤性和伦理问题,限制了ESC向临床应用发展的前景。成体干细胞(ASC)也是一类多能干细胞,理论上也能分化为生殖细胞,但诱导分化过程往往受到阻滞。诱导性多能干细胞(iPS)是一种具有多能性的重编程体细胞,一定程度上可替代ESC用于基础和临床研究。目前,全球不孕不育的发生率呈逐年递增的趋势,充分认识干细胞向生殖细胞分化的机制是解决该难题的重要理论前提。就各种干细胞向生殖细胞分化的研究进展作一综述。

少弱精子症患者睾丸组织中NOSTRIN的表达及其与eNOS的相关性研究

目的通过测定少弱精子症患者睾丸组织中内皮型一氧化氮合酶运输介导物(endothelial nitric oxide syn-thase traffic inducer,NOSTRIN)和内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)的表达,探讨其与少弱精子症发病的相关性。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测11例严重少弱精子症患者(病例组)和7例正常男性(正常组)睾丸组织中NOSTRIN mRNA的表达;分光光度法测定睾丸组织中eNOS的活性;应用硝酸还原酶法测定睾丸组织上清液中NO代谢产物NO2-/NO3-水平。结果病例组患者睾丸组织中NOSTRIN mRNA呈弱表达(0.312±0.076),明显低于正常组(0.793±0.082,P<0.01);病例组患者睾丸组织eNOS活性[(33.73±3.58)U/mg]与正常组[(17.69±3.84)U/mg]比较显著增强(P<0.01);病例组患者睾丸中NO2-/NO3-水平为(48.56±8.49)μmol/L,较正常组(25.37±9.61)μmol/L显著升高(P<0.01);病例组睾丸组织中NOSTRIN表达水平与eNOS活性呈负相关(r=-0.57,P<0.01),与NO代谢产物NO2-/NO3-同样呈负相关(r=-0.61,P<0.01)。结论少弱精子症患者睾丸组织中NOSTRIN表达水平降低,eNOS活性增强,NO2-/NO3-水平升高,可能与少弱精子症的发生有着相关性。

睾丸巨细胞病毒感染对精子存活率影响的实验研究

目的:探讨小鼠睾丸感染鼠巨细胞病毒(MCMV)对附睾尾部成熟精子存活率的影响。方法:运用酶联免疫吸附试验(ELISA)筛选出无MCMV感染史的BALB/c小鼠分为2组:对照组40只,睾丸直接接种不含MCMV的细胞培养液;实验组64只,睾丸直接接种MCMV悬液;分别于接种后第1、2、4、6、9、14、21、38d处死小鼠,行睾丸组织病理学检查,同时取附睾尾部成熟精子进行精子存活率的检测。结果:实验组小鼠睾丸间质细胞中出现特异性MCMV嗜碱性包涵体,生精细胞空泡变性、排列紊乱。与对照组比较,实验组精子存活率在接种病毒后的第1d(D1PI)显著降低,存活率由71.42%下降至56.04%(P<0.05);D2PI至D38PI时两组小鼠精子的存活率比较无统计学意义(P>0.05)。结论:小鼠睾丸MCMV早期感染可造成精子存活率的显著下降,但随感染时间延长,精子存活率恢复正常;提示CMV感染可能短暂性地影响生育。

MCMV M83基因mRNA在小鼠感染睾丸中的表达及与睾丸病变的相关性研究

目的:探讨鼠巨细胞病毒(MCMV)感染的不同时期MCMV M83基因mRNA在小鼠睾丸中的表达及与睾丸病变程度的相关性。方法:采用地高辛标记的MCMV M83mRNA寡核苷酸探针对接种MCMV后不同时期的小鼠睾丸组织进行原位杂交(ISH)检测。将ISH阳性杂交信号的平均光吸度(A)值表示睾丸的MCMV负荷量,分析MCMV M83mRNA在感染睾丸中的表达及其负荷量与睾丸病变程度的关系。结果:接种病毒后各时期的睾丸组织中均有MCMV M83mRNA表达,ISH阳性杂交信号主要定位在间质细胞胞浆内。感染d9的平均A值最高(实验组组间比较,P<0．001)。感染不同时期的生精上皮及间质细胞呈现不同程度的病理性炎性改变,d6-9最为严重。结论:睾丸MCMV感染时,MCMV M83基因的mRNA水平与睾丸感染病变程度相关;提示:对MCMV M83mRNA动态检测可估计感染组织的预后。

人精子染色质损伤及其检测的研究进展

人精子染色质损伤是常见的影响男性生殖能力的重要原因之一,受到遗传、环境和生活习惯等多因素的影响,且与男性不育、复发性流产等有着密切的联系。随着人们对精子染色质结构和功能认识的加深,对精子染色质结构分析技术的不断改进和推广,以及辅助生殖技术越来越广泛的应用,精子DNA损伤逐渐被认识到是一个新的评价精子质量的重要检测指标,对男性生殖力的评估和辅助生殖技术的选择具有重要的临床意义。

维生素E抑制子痫前期脐血清诱导脐静脉内皮细胞中NOSTRIN表达上调的体外研究

目的：探讨子痫前期患者脐血清诱导脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cell，HUVEC）中人内皮型一氧化氮合酶运输介导物（endothelial nitric oxide synthase traffic inducer，NOSTRIN）的表达及维生素E对其表达的调节作用。方法：采用消化培养法培养正常晚孕妇女的HUVEC，传代后待细胞长满至70％～80％后，加或不加维生素E作用30min后分别加入正常妊娠（正常组）及子痫前期（子痫前期组）脐静脉血清，培养48h后，MTI测定细胞活力，RT-PCR测定NOSTRINmRNA的表达，分光光度法测定细胞上清中eNOS的活性。结果：子痫前期患者脐静脉血清培养的HUVEC，其细胞的活力明显低于正常组（P〈0．05），细胞中NOSTRINmRNA的表达量明显高于正常妊娠组（P〈0．01），细胞上清中eNOS的活性明显低于正常组（P〈0．01）；加维生素E预处理后，子痈前期组细胞的活力明显升高（P〈0．05），其细胞中NOSTRIN的表达水平明显下降（P〈0．01），eNOS活性明显升高（P〈0．01）。结论：子痫前期患者脐静脉血清可使HUVEC细胞活力降低、NOSTRIN表达增加以及eNOS活性降低，维生素E可抑制子痫前期患者脐静脉血清诱导的NOSTRIN表达的增加以及eNOS活性降低。

敲除Attractin或Mahoganoid基因对雄性小鼠生殖内分泌激素的影响

目的:探讨敲除Attractin(Atrn)或Mahoganoid(Md)基因对雄性小鼠生殖内分泌激素的影响。方法:选取成年雄性Atrn基因敲除纯合子、Md基因敲除纯合子及正常小鼠(均为C3H/Hej种系)各12只设为Atrn基因敲除组、Md基因敲除组和对照组。内眦静脉取血清取外周血,化学发光法检测血清睾酮(T)、雌二醇(E2)浓度,用酶联免疫法(ELISA)检测血清卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)和泌乳素(PRL)浓度,进行组间浓度对比。结果:Atrn基因敲除组和Md基因敲除组的外周血E2、LH、FSH、PRL浓度均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);血清T浓度Atrn基因敲除组高于对照组,而Md基因敲除组低于对照组,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:Atrn或Md基因敲除后雄性小鼠的外周血E2、LH、FSH、PRL浓度均有下降,其具体机制及对外周血T浓度的影响有待进一步研究。

人脐静脉内皮细胞中肿瘤坏死因子-α诱导NOSTRIN基因表达上调的实验研究

目的:探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中内皮型一氧化氮合酶运输介导物(NOSTRIN)基因表达的诱导作用以及二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)对此诱导作用的抑制。方法:将培养的内皮细胞分为3组:第1组为无任何处理的HUVEC,第2组为子痫前期(PE)患者血清作用的HUVEC,第3组为正常晚孕妇女血清作用的HUVEC。用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测3组细胞中NOSTRIN mR-NA的表达。酶联免疫吸附实验(ELISA)检测PE患者和正常孕妇血清中TNF-α含量。用1,3,5ng/ml3种浓度的TNF-α分别作用3组细胞6h,以及用浓度3ng/ml的TNF-α作用3组细胞分别达6h、12h、24h,RT-PCR检测NOSTRIN mRNA的表达;将PDTC(5mmol/ml)与TNF-α(3ng/ml)同时作用以及TNF-α(3ng/ml)单独作用3组细胞6h,RT-PCR检测NOSTRIN基因mRNA的表达。结果:3组细胞中都有NOSTRIN表达,第2组表达量显著高于第1组和第3组(P<0.01)。ELISA结果显示,PE患者血清中TNF-α含量显著高于正常晚孕妇女(P<0.01)。TNF-α作用HUVEC细胞后NOSTRIN显著高表达,呈时间和剂量依赖关系(P<0.01)。PDTC和TNF-α同时作用的HUVEC与TNF-α单独作用的HUVEC相比,其NOSTRIN表达显著降低(P<0.01)。结论:TNF-α可上调NOSTRIN在HUVEC中的表达。

无精子症和生精功能正常者睾丸组织中血红素加氧酶的表达与差异性研究

目的:对人类睾丸组织中表达血红素加氧酶(HO)的细胞进行定位;通过测定原发性无精子症及梗阻性无精子症患者睾丸组织中血红素加氧酶1(HO-1)的表达量与正常睾丸组织中HO-1表达量的差异性,来探讨其与无精子症发病的相关性。方法:应用免疫组化方法对人类睾丸组织中表达HO的细胞进行定位;采用逆转录-荧光定量PCR(FQ-PCR)方法定量检测无精子症患者与正常人睾丸组织HO-1及HO-2基因水平的表达量;应用W est-ern印迹检测各组之间HO蛋白水平表达量。结果:在正常睾丸组织,HO-1主要表达在支持细胞上;而HO-2在支持细胞和各级生精细胞中均有表达;FQ-PCR结果显示非梗阻性无精子症患者睾丸组织HO-1、HO-2的表达量均显著低于正常组及梗阻性无精子症组(P<0.05),差异具有统计学意义。而梗阻性无精子症患者睾丸组织表达HO-1、HO-2的量与正常组相比无显著性差异。W estern印迹结果显示HO-1蛋白水平的表达量差异与基因水平一致。而HO-2的蛋白水平在各组之间表达没有显著性差异。结论:非梗阻性无精子症患者睾丸组织中HO的表达量显著性降低,且HO-1无论是蛋白水平还是基因水平的差异一致。HO-1可以通过抗炎、抗氧化、抗凋亡的机制保护睾丸组织免受各种应激的损伤,从而维护正常的生精功能。可见,HO-1的减少可能与生精功能低下相关,这可能是非梗阻性无精子症的发病机制之一。

晟洁芙克草本抑菌凝胶治疗泌尿生殖道支原体衣原体感染疗效观察

目的探讨晟洁芙克草本抑菌凝胶治疗泌尿生殖道支原体衣原体感染的临床效果及安全性。方法选取中国人民解放军第一五九中心医院2015年4月—2017年6月泌尿生殖道支原体衣原体感染患者324例,随机数字表法分为研究组(162例)与对照组(162例)。对照组采取常规治疗,口服阿奇霉素(连续口服3d),研究组于对照组基础上加用晟洁芙克草本抑菌凝胶(治疗3d)。统计两组临床疗效、不良反应发生率。结果研究组治疗总有效率93.21%(151/162)高于对照组82.72%(134/162),P<0.05;研究组不良反应发生率8.02%(13/162)与对照组6.17%(10/162)间无显著差异(P>0.05)。结论采取晟洁芙克草本抑菌凝胶治疗泌尿生殖道支原体衣原体感染,可有效提高疾病治疗效果,且不良反应发生率较低,具有安全性。

生殖细胞核因子及Oct-4在P19细胞系诱导分化中的表达

目的体外培养未成熟畸胎瘤细胞(P 19细胞)并诱导分化,检测生殖细胞核因子(GCNF)及Oct-4在P 19细胞诱导分化前后的表达。方法用全反式维甲酸(ATRA)诱导P 19细胞分化,通过间接免疫荧光染色和RT-PCR方法检测GCNF及Oct-4在P 19细胞诱导分化前后的表达。结果 Oct-4在P 19细胞诱导前呈强阳性表达,诱导2 d后表达下降;而GCNF在P 19细胞诱导前呈阴性表达,诱导2 d后呈阳性表达。结论 GCNF参与了恶性生殖细胞肿瘤的体外分化。GCNF可能是通过下调Oct-4基因的表达参与了恶性生殖细胞肿瘤的分化。

Mahoganoid基因在小鼠精子发生中的动态表达及对雄鼠生殖力影响

目的探讨Mahoganoid(Md)基因在小鼠精子第一发生波中的动态表达以及其基因缺失对雄性小鼠生殖力的影响。方法采用荧光实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)相对定量法检测Mahoganoid mRNA在7、14、21、28、35、60d龄C3H/HeJ雄鼠睾丸中的表达;对Md基因缺失纯合子(Md^(nc))及C3H/HeJ雄鼠精子密度,精子活力,异常精子形态百分率分析,并通过交配实验观察其使正常雌鼠受孕分娩情况。结果 Mahoganoid mRNA在7d龄C3H/HeJ雄鼠睾丸有低表达,14 d表达开始上调,21 d上升趋势明显,35 d时表达水平为60 d 91%;Md^(nc)可以与雌鼠交配,但无幼鼠出生;Md^(nc)雄鼠精子快速前向运动百分比明显低于C3H/HeJ雄鼠精子(P<0.01)。结论 Mahoganoid基因与精子发生相关,Mahoganoid基因缺失会导致雄性小鼠精子活力下降,影响其生殖能力。

鼠巨细胞病毒感染对雄性小鼠生殖性激素水平的影响

目的研究鼠巨细胞病毒（MCMV）感染后雄性小鼠生殖性激素水平的变化，探讨MCMV感染影响雄性生殖功能的可能机制。方法选择无McMV活动感染的雄性小鼠，睾丸接种MCMV或不合MCMV的细胞培养液，设立实验组与对照组，采用放射免疫法检测接种后不同时段（小鼠一个生精周期内）的小鼠血清及睾丸组织内性激素含量，并进行比较。结果睾丸匀浆组织T浓度在MCMV感染第4～9d显著降低（P〈0．05），第14～21d有一短暂恢复过程，第38d又较对照组下降（P〈0.05）。血清LH浓度在MCMV感染的第4、9、14d显著升高（P〈0．05），其它时间点比较差异无统计学意义（P〉0．05）。而感染不同时期的血清T和FSH比较差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论MCMV急性感染可引起雄鼠生殖内分泌激素水平的改变：通过影响其下丘脑-垂体-性腺轴的调节导致雄鼠生殖功能障碍。

内皮型一氧化氮合酶运输介导物在子痫前期患者胎盘组织中的定位及定量研究

目的探讨内皮型一氧化氮合酶运输介导物(endothelial n itric oxide synthase traffic inducer,NOSTR IN)在子痫前期(pre-ec lampsia,PE)患者胎盘血管内皮细胞中表达的变化及其在子痫前期发病过程中的作用。方法HE染色后镜下观察胎盘组织及血管的病理变化,免疫组织化学方法及W estern b lot检测子痫前期患者胎盘组织中NOSTR IN的表达。结果HE染色显示子痫前期患者胎盘绒毛血管变细,数目减少,血管合体膜增厚,纤维素样坏死明显多于正常妊娠;免疫组织化学显示正常妊娠和子痫前期患者胎盘血管内皮细胞中都有NOSTR IN的表达,但子痫前期患者胎盘血管内皮细胞胞浆染色较正常妊娠明显增强;W estern b lot显示子痫前期患者胎盘组织中NOSTR IN的表达显著高于正常妊娠(P<0.01)。结论胎盘组织中NOSTR IN表达增加可能是子痫前期发病机制的重要环节之一。