敲减NLRP3抑制LPS诱导BV2小胶质细胞的炎症反应

目的 评价NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)对脂多糖(LPS)诱导的BV2小胶质细胞活化的影响及意义。方法 设计shRNA质粒转染BV2小胶质细胞敲减NLRP3表达,应用qRT-PCR和蛋白质免疫印迹实验挑选转染效率最高序列。运用蛋白免疫印迹法检测细胞系中NLRP3表达情况;光镜下观察NLRP3-shRNA(shNLRP3)转染对细胞系形态学的影响,酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞培养上清液炎症因子IL-18、IL-1β、TNF-α水平,免疫荧光染色观察小胶质细胞活化标志蛋白iNOS、Arg-1、Iba1表达。结果 NLRP3在LPS诱导的BV2细胞中高表达。NLRP3-mus-727组mRNA表达最低,沉默效果最好,蛋白免疫印迹结果显示细胞转染成功。光镜观察显示转染shNLRP3的BV2细胞系在LPS刺激后呈圆形、短梭形,与空白对照组静息态细胞相似。ELISA检测到转染shNLRP3的BV2细胞系在LPS刺激后促炎性介质IL-18、IL-1β、TNF-α和NO含量较阴性对照组(转染NC shRNA后给予LPS刺激)下降(均P<0.05);免疫荧光染色观察到转染shNLRP3的细胞系在LPS刺激后iNOS/Iba1相对表达量较阴性对照组下降,Arg-1/Iba1上调。结论 LPS诱导的BV2细胞系中NLRP3高表达,抑制NLRP3表达能够抑制LPS诱导的BV2细胞炎症反应,促使其向M2表型极化。

盐酸丁咯地尔拮抗缺氧诱导的PC-12细胞分化的类神经元凋亡诱导因子的核转位

目的:探讨含盐酸丁咯地尔鼠血清拮抗PC-12细胞分化后的类神经元缺氧后凋亡的分子机制。方法:将12只老年Wistar大鼠分为2组各6只,药物组以盐酸丁咯地尔灌胃,对照组以蒸馏水灌胃,3 d后取2组血清与PC-12细胞分化后的类神经元预处理后制备24 h缺氧模型,免疫荧光标记凋亡诱导因子(AIF)、热休克蛋白60(HSP60)及DAPI,观察2组AIF的核移位情况。结果:PC-12细胞分化后的类神经元经历24 h缺氧后,对照组细胞发生AIF从线粒体中释放并转移到细胞核,药物组则未出现AIF的核移位。结论:含盐酸丁咯地尔血清可通过有效阻止缺血后凋亡早期AIF的核移位来拮抗PC-12细胞分化的类神经元的凋亡。

黄连解毒汤对APP/PS1双转基因阿尔茨海默病小鼠自由基代谢及海马区病理形态学影响

目的观察黄连解毒汤对阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)模型小鼠自由基代谢及海马CA1区的神经细胞形态学、组织病理学的影响,并探讨其可能治疗机制,为黄连解毒汤治疗AD提供实验依据。方法采用APP/PS1双转基因AD小鼠模型,随机分为模型对照组、阳性对照组(安理申)、黄连解毒汤大剂量组[865mg/(kg.d)]、黄连解毒汤中剂量组[433mg/(kg.d)]、黄连解毒汤小剂量组[216mg/(kg.d)],每日予以相应药物灌胃治疗7个月后,于10月龄检测自由基代谢指标超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA),观察各组干预措施对小鼠海马区CA1区神经细胞形态学及老年斑的影响。结果各用药组均能明显提高SOD,降低MDA含量(P<0.05),减少神经细胞的破坏、老年斑的形成,有效阻止海马神经细胞的退变,黄连解毒汤中剂量组优于安理申组(P<0.05)。结论黄连解毒汤治疗AD的机制可能与提高抗氧化能力,保护海马神经细胞,减少老年斑的生成等机制相关。

武汉地区900例缺血性脑卒中风痰瘀阻型及气虚血瘀型患者危险因素回顾性分析

目的探讨缺血性脑卒中的危险因素与中医风痰瘀阻型和气虚血瘀型的相关性。方法收集缺血性脑卒中风痰瘀阻型和气虚血瘀型患者900例,采用χ2检验及非条件Logistic回归分析法观察这两种证型性别、年龄、发病时间、发病部位、舌质、舌苔、脉象、高血压、糖尿病、既往卒中史、高血脂、红细胞压积、吸烟、饮酒、遗传、血型及并发症等危险因素的差异。结果风痰瘀阻型与气虚血瘀型年龄(χ2=8.2392,P=0.0413)、高血脂(χ2=4.8386,P=0.0278),舌质(χ2=7.9470,P=0.0048)、舌苔(χ2=4.3298,P=0.0375)4个因素比较差异有统计学意义。风痰瘀阻型和气虚血瘀型高血脂、舌质、舌苔相对危险度(OR)比较,差异均有统计学意义,其OR值分别为0.699(P=0.0282)、0.332(P=0.0071)和0.667(P=0.0382)。既往卒中史,并发症和前循环梗死3个因素其OR值分别为3.226(P=0.0314),0.203(P=0.0705)和0.214(P=0.0098)。结论各年龄组气虚血瘀型构成比明显高于风痰瘀阻型,且气虚血瘀型更易发生高血脂、前循环梗死和并发症,年龄、血脂水平、梗死部位、并发症与缺血性脑卒中中医证型关系密切,可为缺血性脑卒中中医辨证分型提供客观量度。

无创脑水肿动态监测在自发性脑出血患者中的应用

目的:观察自发性脑出血(SICH)患者甘露醇治疗前后脑水肿的动态演变。方法:选择30例SICH患者在甘露醇治疗前、后不同时点运用无创脑水肿动态监护仪动态检测扰动系数。结果:治疗后30 min、1 h、3 h脑出血侧和对侧分别与治疗前比较,有显著性差异(P<0.01);在治疗5 d脑出血侧与对侧相比,有显著性差异(P<0.01),第7天无差异;SICH患者出血侧在治疗后第7天与治疗前比较有显著性差异(P<0.01)。结论:甘露醇治疗3 h后SICH患者全脑脑水肿减轻,脑出血侧脑水肿在用药后5 d内一直重于对侧,第7天出血侧脑水肿减轻。

黄连解毒汤对APP/PS1双转基因AD小鼠海马区病理形态学及脑内β-APP基因mRNA的影响

目的:探讨黄连解毒汤(HLJDD)对APP/PS1双转基因阿尔茨海默病(AD)模型小鼠海马CA1区的病理形态学及脑内β-淀粉样前体蛋白(β-APP)基因mRNA的影响。方法:选用3月龄的APP/PS1双转基因AD小鼠模型50只,随机分为对照组、安理申组、HLJDD大剂量组、HLJDD中剂量组、HLJDD小剂量组各10只,分别给予安理申或不同剂量HLJDD灌胃治疗6个月,对照组不予治疗,记录并比较各组死亡率;分别于6月龄和10月龄时采用HE染色观察各组海马CA1区神经细胞形态,采用改良甲醇刚果红染色观察各组老年斑形成情况;于末次灌胃治疗后,通过实时荧光定量PCR检测各组脑内β-APPmRNA水平。结果:各组小鼠死亡率差异无统计学意义;10月龄HLJDD各剂量组海马CA1区神经损伤情况较对照组明显减轻,老年斑数量少于对照组(P<0.05);HLJDD各剂量组β-APPmRNA水平低于对照组(P<0.05),其中以中剂量组水平降低最明显(P<0.01)。结论:HLJDD能保护海马神经细胞。

大鼠骨髓间质多能成体祖细胞系统移植治疗脑缺血性损伤的研究

目的探讨骨髓间质分离的多能成体祖细胞(MAPCs),通过系统移植方式(尾静脉注入)进入大鼠脑组织内及修复受损的神经功能。方法采用改良Nagasaway与Zea Longa等线栓法建立大鼠脑缺血再灌注模型,并将大鼠随机分为对照组(n=40)和MAPCs组(n=40)。将在体外纯化、增殖和已用5-溴脱氧尿苷(BrdU)处理过的MAPCs经尾静脉注射入大鼠体内。采用行为学评定、免疫荧光技术、RT-PCR和免疫电镜等方法识别移行入大鼠脑组织内的MAPCs分化的神经元样细胞及其功能表达。结果(1)MAPCs能移行入大鼠脑组织内并在大脑中动脉阻断(MCAO)的同侧海马区分化为神经元样细胞,免疫荧光双重标记染色显示BrdU、神经元特异性烯醇化酶(NSE)表达阳性;(2)与对照组比较,在MAPCs移植组(MAPCs组),MCAO所致的大鼠行为损伤明显恢复,神经生长因子(NGF)表达水平明显升高(P<0.05);(3)电镜下观察到MAPCs所分化的神经样细胞与其它神经细胞形成突触联系。结论MAPCs能经血液途径进入脑缺血灶微环境中,分化为神经样细胞并有效地修复大鼠MCAO所致的神经功能缺失症状。因此,MAPCs有望成为中枢神经系统疾病自体移植治疗的最佳候选干细胞之一。

脑血管病介入治疗应用中的理性认识

最近几年来出现的血管内治疗等技术为脑血管病的预防和治疗带来了新的希望。目前,针对脑血管病的介入放射治疗在医学领域尚属一门年轻的学科,但以其微创、安全、并发症低等特点越来越受到医患的认可,是一种迅速发展起来的有效的医疗手段。

甘露醇联合黄角颗粒治疗脑出血并脑水肿的疗效观察

目的:探讨中西药结合治疗自发性脑出血的疗效。方法:59例自发性脑出血患者随机分为中西药组30例和西药组29例,前者采用甘露醇和黄角颗粒联合治疗,后者仅采用甘露醇治疗,余一般常规治疗处理均相同。采用BORN-BE脑水肿无创动态监护仪在发病后第1、3、5、8天分别测定2组患者患健侧大脑半球的综合扰动系数,并进行对比、分析。结果:与同组健侧比较,发病第1天患侧综合扰动系数较低(P<0.01),第3、5天明显增高(P<0.01),第8天略高。与西药组患侧比较,中西药组患侧综合扰动系数在发病第1天略高,但在第3、5、8天明显降低(P<0.05)。结论:中西药结合治疗明显优于单纯西医治疗,可显著减轻脑出血后脑水肿形成。BORN-BE脑水肿无创动态监护仪可在一定程度上评估脑出血后脑水肿的演变过程,对临床诊断及治疗有一定的指导意义。

黄连解毒汤对APP/PS1双转基因阿尔茨海默病小鼠脑组织自由基代谢及IL-6、IL-1β含量的影响

目的观察黄连解毒汤(HLJDT)对阿尔茨海默病(Alzhemer’s disease,AD)模型小鼠自由基代谢及炎性细胞因子(IL-6,IL-1β)含量的影响,并探讨其可能治疗机制。方法采用APP/PS1双转基因AD小鼠模型,并随机分为模型对照组(CMC组)、阳性对照组(盐酸多奈哌齐组)、HLJDT大中小剂量组,每日予以相应药物灌胃治疗后检测脑组织中自由基代谢指标(SOD、MDA),并应用ELISA法检测炎性细胞因子(IL-6,IL-1β)含量。结果 HLJDT各剂量组均能明显提高SOD活性,降低MDA含量(P<0.01);盐酸多奈哌齐组及HLJDT各剂量组均显著降低IL-6含量(P<0.01);HLJDT小剂量组IL-1β含量低于CMC组,但HLJDT各剂量组及盐酸多奈哌齐组与模型对照组(CMC组)比较均无统计学差别(P>0.05)。结论 HLJDT治疗AD的机制可能与提高抗氧化能力,减轻炎症反应有关。

武汉地区脑梗死患者住院天数的影响因素分析

目的探讨武汉地区脑梗死患者住院天数及其影响因素。方法收集本院近5年间出院脑梗死患者的病例772份,排除院内感染及并发症患者。采取回顾性分析方法,按住院天数分为5~10d组,11~14d组,15~20d组三组,选取性别、意识状态、糖尿病史、心脏病史、脑卒中史、遗传倾向、中医治疗、神经康复等因素,进行Ridit统计分析,并对相关因素行住院天数的非条件logistic回归分析。结果 （1）不同性别、糖尿病史、入院时患者意识清楚与否、是否神经康复治疗患者的住院天数差异具有统计学意义（P〈0.05）;（2）既往是否有心脏病史,脑梗死病史、脑卒中遗传倾向及住院期间是否接受过中医药治疗患者的住院天数上虽有差异,但无统计学意义;（3）糖尿病史和神经康复因素进入回归方程,二者均有统计学意义。结论脑梗死患者的住院天数与不同性别、糖尿病史、入院时不同的意识状态及神经康复治疗与否有关。其中糖尿病史和康复治疗可能为影响武汉地区脑梗死患者住院天数的重要因素。