艾灸疗法影响兔膝骨性关节炎软骨细胞凋亡的效应

目的:观察艾灸疗法对兔膝骨性关节炎软骨细胞凋亡的影响。方法:于2004-03/2005-04在华中科技大学同济医学院和武汉体育学院完成本课题。选取6～8月龄健康新西兰兔36只,按照组间均衡一致的原则,随机抽签法分为3组:正常对照组,骨关节炎模型组,艾灸治疗组,每组12只。骨关节炎模型组,艾灸治疗组动物于左侧或右侧兔膝关节腔内注入16g/L木瓜蛋白酶制备骨性关节炎模型,0.5mL/次,隔3天再注射1次,共注射3次。艾灸治疗组动物于术后6周开始进行艾灸治疗。剪除造模侧膝关节约3cm×3cm区域毛后用点燃的艾条,距后三里(相当于人足三里)、阴阳陵泉、血海四穴高2cm处各悬灸10min,2天1次,共治疗4周。正常对照组,骨关节炎模型组不予治疗。术后10周处死所有动物,切开膝关节腔,先大体观察关节软骨、滑膜的病变。然后切取胫骨平台和股骨内髁的软骨约0.5cm×0.5cm×0.5cm组织块,行苏木精-伊红、Masson三色和甲苯胺蓝染色,通过光镜观察有关的组织形态学变化。采用硝酸还原法测定关节滑液一氧化氮含量。采用原位未端原位标记法和流式细胞仪检测软骨细胞的凋亡率。结果:在模型制备及饲养过程中,所有动物均无死亡,全部纳入结果分析。①大体观察结果:正常组兔膝关节软骨为淡蓝白色,表面光滑而有光泽;造模组关节软骨无光泽,为淡黄白色,软骨表面凸凹不平,出现裂隙;艾灸组关节软骨为淡白色,软骨表面粗糙。②组织形态学结果:正常组苏木精-伊红染色可见关节软骨的细胞致密而均匀,基本无破坏;Masson三色染色正常,软骨胶原蓝绿色;甲苯胺蓝染色均匀无失染。骨关节炎模型组关节软骨破坏严重,软骨表层变薄,粗糙,出现裂隙,部分软骨剥落,形成缺损区,软骨细胞数目明显减少,排列紊乱,四层结构不易分辨;Masson三色染色蓝绿色丢失严重,仅表层软骨尚可保留一些;胺蓝染色仅残存的软骨细胞及簇集的细胞核蓝染,细胞的胞浆呈紫红色。艾灸组苏木精-伊红染色可见关节软骨破坏程度较造模组明显减轻,关节软骨表面有表浅裂隙,软骨细胞排列轻度紊乱,四层结构可以分辨。Masson三色染色全层未钙化软骨保持蓝绿色着染;甲苯胺蓝染色蓝紫色着染均匀。③骨关节炎模型组关节液一氧化氮含量较正常对照组明显升高、艾灸治疗组较正常对照组明显升高,比模型组降低,差异均有显著性意义(P<0.05)。④骨关节炎模型组、艾灸治疗组关节软骨细胞凋亡阳性表达较正常对照组明显升高;艾灸治疗组比骨关节炎模型组明显降低,差异均有显著性(P<0.05)。⑤骨关节炎模型组软骨细胞凋亡率比正常组明显升高,艾灸治疗组比正常对照组明显升高,比模型组明显降低,差异均有显著性(P<0.05)。结论:艾灸疗法能减少关节液一氧化氮的含量,抑制软骨细胞的凋亡,治疗膝骨性关节炎具有有效性和可行性。