阿霉素联合p21^(CIP1)基因转染对人肝母细胞瘤细胞株HepG2增殖的影响

背景与目的:阿霉素类药物是治疗肝母细胞瘤的传统化疗药,但近年来其疗效不佳是困扰临床的一大问题,目前配合基因治疗提高阿霉素的疗效,是肝母细胞瘤治疗发展的新趋势。本实验研究阿霉素与p21基因转染联合对人肝母细胞瘤HepG2细胞增殖的影响。方法:实验分为空白对照组、单独加药组、pcDNA3转染对照组、p21转染组及p21转染+药物联合组。用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测转染后HepG2细胞的生长趋势,联合处理后细胞增殖抑制状况;荧光定量PCR检测转染后p21mRNA的表达情况,联合处理后survivinmRNA的水平变化。结果:转染后,p21转染组在第3d和第4d的生长速度明显慢于两对照组(P<0.01);经鉴定其有p21mRNA表达量的增高,是空白对照组的155倍(P<0.05)。以空白组为对照,在第3～5d,联合组增殖抑制率明显高于单独加药组和p21转染组(第3d:43.92%vs.32.97%、35.77%,P<0.01;第4d:59.86%vs.39.35%、40.96%,P<0.01;第5d:51.81%vs.33.91%、10.68%,P<0.01);且1～4d内随联合用药时间的延长,抑制效应增强(r=0.91,P<0.05),并在第4d时较显著(Q=1.07)。荧光定量PCR显示,联合组survivinmRNA水平显著低于p21转染组(P<0.01);与单独加药组比较,联合作用仅在48h时差异有统计学意义(P<0.01)。结论:在一定时间范围内p21可增强阿霉素对HepG2细胞的增殖抑制作用,降低胞内survivinmRNA的表达。

砷剂和维甲酸对急性早幼粒细胞白血病凝血异常作用的临床研究

目的 研究全反式维甲酸 (ATRA)或三氧化二砷 (As2 O3 )治疗急性早幼粒细胞白血病(APL)对患者凝血异常的作用 ,探讨APL患者出血形成机制。方法 采用逆转录 聚合酶链反应(RT PCR)检测APL细胞凝血酶调节蛋白 (TM)和组织因子 (TF)mRNA的转录 ;同时采用ELISA法测定患者治疗期间血浆的相关凝血参数及细胞促凝活性 (PCA)的改变 ,临床监测APL患者出血症状变化。结果 APL患者在ATRA治疗期间血浆及APL细胞表面TM表达均显著上调 ,从治疗前血浆含量(5 0 7± 0 5 3) μg/L ,渐进上升到治疗后第 5天 (2 1 86± 5 32 ) μg/L ,达完全缓解 (CR)后接近正常水平 ;而TM抗原由治疗前的 (14 31± 1 6 0 )ng / 10 7到治疗后 2 0天上升至 (2 1 6 1± 6 82 )ng / 10 7细胞 ;血浆P选择素、可溶性纤维蛋白单体复合物和D 二聚体 (D D) ,在As2 O3 或ATRA治疗APL患者期间 ,均较治疗前显著下降 (P值均 <0 0 1) ;同时发现APL细胞TFmRNA异常表达增高 ,用ATRA或As2 O3 治疗APL患者期间均具有下调TFmRNA和蛋白表达的作用 ,在ATRA或As2 O3 治疗期间 ,TF抗原由治疗前的 (14 81± 6 2 3)ng/L ,均呈显著下降 ,治疗 2 0天后均未能检测到TF的表达 (P <0 0 1) ,APL细胞的PCA亦呈显著下调 ,同时伴随临床出血症状明显改善。结论 As2

过敏性支气管哮喘儿童正常T淋巴细胞表达和分泌的活性调节蛋白基因启动子-28位基因多态性研究

目的 探讨中国儿童正常T淋巴细胞表达和分泌的活性调节蛋白 (RANTES)基因启动子 - 2 8位基因多态性对儿童过敏性哮喘的影响。方法 采用聚合酶链反应 限制性片段长度多态性(PCR RFLP)方法 ,对 10 0例过敏性哮喘儿童 (A组 )的RANTES基因进行多态性分析 ,用化学发光法检测患者血浆总IgE浓度 ,用酶联免疫吸附试验 (ELISA)检测血浆中RANTES浓度 ,用全自动血细胞计数仪进行嗜酸粒细胞计数 ;并与 90名健康儿童 (B组 )进行比较。结果 (1)RANTES启动子 - 2 8位存在C/G 2种等位基因 ,A组和B组G等位基因频率分别为 19 5 %、10 6 % ,两组间G等位基因频率比较差异有显著性 (P <0 0 5 ) ;(2 )基因型CC、CG、GG的哮喘儿童血浆RANTES浓度分别为 (2 89± 199)ng/L、(5 15± 119)ng/L、(10 71± 138)ng/L ,3种基因型间比较差异有显著性 (P <0 0 1) ;(3)A组血浆总IgE浓度 (以lgIgE表示 )分别为 2 4 5± 0 12、2 77± 0 0 7、3 16± 0 0 9,组间 3种浓度比较差异无显著性 (P >0 0 5 ) ;(4)A组外周血嗜酸粒细胞计数分别为 (2 9± 1 4 )× 10 8/L、(6 4± 0 8)× 10 8/L、(9 9± 2 3)×10 8/L ,组间细胞计数比较差异有显著性 (P <0 0 1)。结论 RANTES启动子 - 2 8C/G基因多态性与儿童过敏性哮喘易感性相关 ,

变应性哮喘鼠脾巨噬细胞Toll样受体的表达与辅助性T淋巴细胞分泌细胞因子的相关性研究

目的研究卵清蛋白诱导的变应性哮喘(简称哮喘)模型鼠脾脏巨噬细胞Toll样受体(TLR)中TLR2和TLR4 mRNA的表达与该组织内辅助性T淋巴细胞(CD4+T)分泌的细胞因子的相互关系。方法用实时荧光聚合酶链反应(FQ-PCR)检测TLR2和TLR4 mRNA与次黄嘌呤磷酸核糖基转移酶管家基因(hypoxanthine-phosphoribosyl-transferase gene,HPRT)cDNA的荧光域值循环数(Ct),分别记为Ct2、Ct4和CtH,计算Ct2、Ct4与CtH的比值(Ct2／CtH、Ct4／CtH)为标本的TLR2和TLR4在mRNA水平上的相对表达量。进一步采用双标记流式细胞分析技术检测鼠脾脏CD4+T淋巴细胞,随后将单克隆抗体和高尔基体转运阻断剂结合,检测CD4+T淋巴细胞胞内γ-干扰素(IFN-γ)和白细胞介素-4(IL-4)的变化。结果对照组与哮喘组小鼠Ct2／CtH差异有统计学意义(分别为1．26±0．04,1．35±0．11,P<0．01),哮喘组TLR2 mRNA表达下调;对照组与哮喘组小鼠Ct4／CtH差异无统计学意义(分别为0．98±0．06,1．01±0．04,P>0．05);对照组与哮喘组小鼠IFN-γ和IL-4的变化差异有统计学意义[IFN-γ分别为(20．83±1．32)％,(31．78±2．54)％;IL-4分别为(2．04±0．24)％, (5．91±0．83)％,P<0．05和P<0．01],哮喘组脾脏CD4+T淋巴细胞IFN-γ和IL-4分泌增加。对照组与哮喘组小鼠IFN-γ/IL-4的比值差异有统计学意义(分别为10．30±1．05,3．58±0．39,P<0．05)。结论变应性哮喘模型鼠脾脏巨噬细胞TLR4 mRNA的表达无变化,但TLR2 mRNA的表达下调;在哮喘模型鼠脾脏CD4+T淋巴细胞中IFN-γ/IL-4比值降低。TLR2 mRNA表达的下调与IFN-γ和IL-4分泌的变化存在相关性,其机理有待进一步深入研究。

湖北地区119例 HCV 1b 型 NS3丝氨酸蛋白酶区的序列变异研究

目的：分析丙型肝炎病毒（hepatitis C virus, HCV）1b 型非结构蛋白3（non-structure protein 3, NS3）丝氨酸蛋白酶区序列的变异规律及影响意义。方法使用基因型别特异性引物,通过巢式 PCR 的方法扩增119例慢性 HCV 1b 型患者血清中 HCV NS3区。对 PCR 产物进行测序后获得 NS3区核苷酸及氨基酸序列。分析119例 HCV 1b 型 NS3区序列的同源性及种系进化,分析 NS3丝氨酸蛋白酶区的变异情况及重要功能位点的突变情况。结果湖北地区 HCV 1b 型与 HCV 1b 型标准株及亚洲地区序列同源性较高,核苷酸序列同源性为85.94％及87.68％,氨基酸序列同源性可达96.83％及92.39％,而与欧美地区1b 型同源性较低,核苷酸序列同源性均为85.57％,氨基酸序列同源性分别为92.17％及93.38％。进化树分析提示湖北地区序列与中国其他地区序列亲缘性较接近,而与日本、东南亚地区及欧美地区的1b 型亲缘性较远。 NS3丝氨酸蛋白酶区185个氨基酸内有34个位点有氨基酸突变,但其重要的功能区包括催化酶底物特异性结合位点以及 Zn2﹢结合位点在所有序列中均高度保守,无一例发生突变。结论对湖北地区 HCV 1b型 NS3丝氨酸蛋白酶区的变异规律及生物学意义的研究进一步丰富和完善了对 HCV 1b 型基因组变异情况的认识。为了解 HCV1b 型在中国地区的进化过程提供一定理论基础。