白介素10在心脏移植排斥反应中表达的实验研究

研究白介素 10 (IL- 10 )在大白鼠心脏移植排斥反应中心脏局部的表达变化情况 ,并探讨其参与排斥反应的可能机制。分五组 :A组 (对照组 )、 B组 (供体特异性全血输注组 )、 C组 (Anti- IL- 2 Mab组 )、 D组 (Anti- IL- 4Mab组 )、E组 (Anti- IL- 2 Mab+Cs A组 )处理受体 ,将大鼠移植心移植到受体的颈部 ,观察移植心存活时间、动态病理变化。并于移植术后第 1d、第 3d、第 5 d、第 7d、第 9d、第 11d、第 14d分别取移植心置于液氮中待测。应用半定量的 RT- PCR法动态检测移植心 IL- 10的表达情况。结果表明 :各组移植心存活时间分别为 (8.3± 1.7) d、 (2 9.2±7.1) d、 (2 6 .4± 5 .7) d、 (10 .2± 1.9) d、 (5 5 .0± 10 .6 ) d。其中 B组、 C组对 A组差异有显著意义 ,E组对 A组及 C组分别有极显著意义和显著意义。 IL- 10在 B组、 C组及 E组均有较强的表达 ,在 A组及 D组表达微弱 ,并与移植物的存活时间密切相关。结果提示 :IL- 10参与调节移植排斥反应 ,其表达水平与移植物存活时间正相关 ,机制可能为 Th类细胞因子的免疫偏离。应用 TH1类细胞因子单克隆抗体并联用免疫抑制剂可以有效的抑制移植排斥反应 。

小鼠颈部异位心脏移植技术的改进

目的 建立简便易行的同种小鼠颈部异位心脏移植模型 ,探讨小鼠颈部异位心脏移植模型的建立与手术方式的改进。方法 在显微镜和低温条件下切取供心 ;分离受体右侧的颈外静脉及颈总动脉。采用供心主动脉与受体颈总动脉侧壁长度相近的切口行端 侧间断缝合 ,供心肺动脉与受体颈外静脉后壁连续缝合、前壁间断缝合的吻合方法进行小鼠颈部异位心脏移植。术后通过视诊和触诊检测供心心跳 ,病理学检查确定排斥情况。结果 应用该方法共进行移植正式实验 4 0次 ,成功 36次 ,供心总缺血时间为 30min ,7d存活率达 90 %。结论 这种移植术式降低了手术难度 ,易于暴露 ,手术时间短 ,创伤小、污染少 ,观察方便 ,成功率高 ,是一种简单。

吗啡预处理对大鼠体外工作心脏的保护作用

目的研究吗啡预处理对大鼠体外工作心脏缺血再灌注损伤的保护作用,并探讨其机制。方法50只雄性大鼠随机分为5组,每组10只,建立体外工作心脏模型,用4℃St.ThomasⅡ停搏液诱导心脏停搏30 min,心脏停搏前采用5 min缺血,10 min再灌注的缺血预处理或0.3μmol/L吗啡灌注两种处理方法,并分别用纳洛酮和格列苯脲对吗啡的作用进行干预,观察心脏复灌后心功能指标、心肌酶值变化、心肌超微结构改变及心肌含水率。结果吗啡组和缺血预处理组在心排血量恢复率、左室收缩压力变化速度、左室发展压恢复率及心肌乳酸脱氢酶(LDH)均优于对照组(均P<0.05);吗啡组和缺血预处理组心肌含水率明显低于对照组(P<0.05);心肌线粒体等超微结构损伤明显减轻;纳洛酮和格列苯脲可以完全阻断吗啡预处理的心肌保护作用。结论吗啡预处理可以产生与缺血预处理同样的心肌保护作用。吗啡是通过心脏局部的阿片受体及心肌细胞ATP敏感性钾通道介导产生心肌保护作用。

白细胞介素2、10和转化生长因子β_1在大鼠心脏移植急性排斥反应中的表达

目的研究白细胞介素2、10(IL-2、IL-10)与转化生长因子β1(TGF-β1)在大鼠心脏移植急性排斥反应中的表达.方法分两组建立同种大鼠颈部心脏移植模型:对照组(n=25)和新赛斯平组(CsA组,n=25),各5例观察移植心脏存活时间,于移植术后第1、5、7、14天分别取移植心组织各5例,半定量RT-PCR的方法动态检测移植心脏中IL-2、IL-10及TGF-β1的表达情况.结果对照组移植心存活时间为(8.6±1.5)d,CsA组移植心存活时间为(20.4±5.1)d,两组间移植心存活时间差异有显著性意义(P<0.01).两组中TGF-β1表达强度不同,对照组中表达较CsA组中弱,二者间差异有显著性意义(P<0.01).IL-2在对照组中先增高,于术后第5～7天达高峰,之后逐渐降至术后第14天的较低水平,而CsA组中IL-2则维持在较低水平.IL-10在对照组中表达维持于较低水平,CsA组中IL-10表达增高,于第7天达峰值,并维持高水平;两组间IL-10的表达差异有显著性意义(P<0.01).结论 IL-10和TGF-β1的产生和表达因CsA的干预而增加,IL-2的表达则受到抑制,CsA的干预明显延长了移植心脏的存活时间.

白介素4单克隆抗体对心脏移植排斥反应中细胞因子表达的影响

为观察白介素 4单克隆抗体 (IL- 4Mab)对同种大鼠心脏移植物存活时间及局部细胞因子网络的影响 ,将实验对象分对照和实验组 ,分别静脉给予生理盐水及抗白介素 4单克隆抗体 (OX81) ,采用改良的移植术式建立移植模型 ,常规监测排斥反应发生情况。应用 RT- PCR的方法检测移植物局部细胞因子如 IL- 1β、IL- 2、CD2 5、IL- 4、IL- 5、IL- 6、IL-10、TNF- α、IFN- γ的表达水平。结果表明 :IL- 4Mab组移植心存活时间没有显著性变化 ,IL- 1β、IL- 2、IL- 5、CD2 5、TNF-α、IFN- γ的表达较强 ,而 IL- 4、IL- 6、IL- 10的表达较弱。提示单纯应用抗 IL- 4单克隆抗体可能调节 TH1/ TH2类 CK的表达 ,但对于移植物的存活时间却少有影响 ,其可能的机制为 :1CK网络中存在其它的独立于 IL- 4的 TH2类 CK;2TH亚群中存在除 TH1及 TH2亚群以外的亚群 THX;3IL-

完全性肺静脉异位连接外科治疗的经验与体会(附11例报告)

目的 报道 11例完全性肺静脉异位连接的外科治疗。方法 心上型 7例 ,其中 6例经右房行左房后壁与肺静脉共同干吻合 ,1例于心外行左房后壁与共同干平行吻合。心内型 4例 ,采用扩大房间隔缺损将异位的肺静脉开口矫正入左心房 ,其中肺静脉开口于冠状静脉窦者 ,采用补片沿隔瓣根部环绕至冠状静脉窦后下方将冠状静脉窦开口于左心房。异位静脉开口于上腔静脉入口处者 ,切开上腔静脉外后侧壁 ,并用自体心包扩大上腔静脉的入口。结果 11例患者全部存活 ,顺利康复。结论 最大限度地扩大左房与共同干的吻合口 ,远离共同干结扎垂直静脉 ,扩大左心房容积 ,加宽上腔静脉的入口 。

婴幼儿心脏移植临床经验总结

目的：心脏移植已成为终末期心脏病患者的标准治疗方式，而国内婴幼儿心脏移植近年来随着脑死亡供心捐献的实施才逐步开展，因此总体数量少，经验有限。基于我院4例（<5岁）婴幼儿心脏移植的临床经验，对心脏移植在适应证、供心保护、手术技术、供受体匹配、围术期管理进行总结。

脂肪因子chemerin促进巨噬泡沫细胞形成

目的观察脂肪因子chemerin是否调节巨噬泡沫细胞形成,以及对巨噬泡沫细胞CD36、ATP结合盒转运子A1(ATP-binding cassette transporter A1,ABCA1)表达和炎症因子释放的影响。方法 100nmol/L佛波酯(phorbolmyristate acetate,PMA)诱导THP-1单核细胞分化为巨噬细胞,随机分组,Chemerin不同浓度和作用时间下联合相同浓度(50μg/mL)氧化型低密度脂蛋白与THP-1源性巨噬细胞共孵育。油红O染色观察细胞内脂滴变化,Western blot和实时PCR检测CD36、ABCA1的mRNA和蛋白水平的表达。ELISA法检测培养液中炎症因子———肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)和白细胞介素10(interleukin-10,IL-10)的浓度,酶法检测细胞内胆固醇含量。结果Chemerin诱导巨噬细胞内脂滴蓄积,下调CD36和ABCA1mRNA及蛋白的表达,增加培养液中促炎因子TNF-α的释放而降低抗炎因子IL-10的释放,提高细胞内胆固醇的含量,且有浓度和时间依赖性。结论 Chemerin通过下调CD36和ABCA1基因的mRNA及蛋白的表达,诱导THP-1巨噬细胞内脂滴蓄积和泡沫细胞形成;ABCA1表达下调可能与促炎因子TNF-α释放增加和抗炎因子IL-10释放减少有关。

住院患者对护患沟通感受与需求的质性研究

目的了解住院患者对护患沟通的感受和需求,为进一步深化优质护理服务、完善护患沟通提供参考。方法以质性研究访谈法对15例住院患者进行个人深度访谈,以Colaizzi分析法归纳主题。结果共提炼出4个主题:患者表达了满意的护患沟通体验;患者对护患沟通的需求主要是态度与沟通内容;让患者满意的护患沟通体现为人性化关怀及专业化服务;护患沟通中需要双方换位思考。结论优质护理服务提升了患者的护患沟通体验;在护患沟通中需强调护士的态度及提供健康相关信息。

血管内皮祖细胞的体外扩增特性研究

目的 :探讨血管内皮祖细胞 (EPCs)在体外扩增特性。方法 :利用磁性活化细胞分选系统 (MACS)系统富集CD34+ 细胞 ,在相同条件下与同批的单个核细胞 (MNC)、CD34+ 和CD34-混和细胞进行对照培养 ,比较EPCs体外扩增效果。另外研究血管内皮生长因子 (VEGF)和传代培养对细胞分化、扩增动力学和细胞凋亡的影响。应用细胞免疫化学和流式细胞术对细胞定性定量分析。结果 :MNC培养、CD34+ 和CD34-细胞混和培养明显高于CD34+细胞单独培养EPCs扩增率 (P <0 0 5 ) ,一旦细胞形成线索样结构行传代培养明显低于未传代的细胞凋亡 (P <0 0 5 )。VEGF对细胞凋亡 (P >0 0 5 )无明显影响 ,这些分化的EPCs免疫细胞化学染色CD34、vWF、KDR、CD31阳性 ,并且吞噬乙酰化低密度脂蛋白 (Ac -LDL)。培养 7d流式细胞检查CD34+ 、AC133+ 分别占贴壁 (AT)细胞的 6 8 2 %±6 3% (n =6 )、5 7 2 %± 9 8% (n =6 )。结论 :MNC培养、CD34+ 和CD34-细胞混和培养提高了EPCs扩增率 ,早传代使凋亡率明显降低。VEGF对EPCs体外扩增无明显影响。

10例单向与双向Glenn手术的评价

报道 10例单向与双向 Glenn手术。其中 7例单向 Glenn手术 ,上腔静脉与右肺动脉进行侧侧吻合 ,结扎右肺动脉近心端 ,环缩上腔静脉近心端。 3例双向 Glenn手术 ,上腔静脉与右肺动脉进行端侧吻合 ,上腔静脉近心端予以缝闭。手术结果 ,单向 Glenn手术患者 ,术后动脉血氧饱和度由术前的 5 0 %～ 6 0 %提高至术后的 70 %～ 80 %。双向 Glenn手术患者 ,术后动脉血氧饱和度由术前的 5 0 %～ 6 0 %提高至 85 %～ 90 % ,术后缺氧状态基本消失。手术结果表明 :双向 Glenn手术 ,上腔静脉的血流均匀地灌注左、右两侧肺 ,来自右心室的搏动性血流 ,促进了肺循环的血流灌注 ,因而双向 Glenn手术的患者 ,术后缺氧状态的改善远比单向

微泡造影剂结合超声介导一氧化氮合成酶基因转染血管平滑肌细胞

目的探讨微泡造影剂及超声辐照介导内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)基因转染体外培养大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)的可行性。方法实验分为A、B、C、D、E 5组,分别为空白对照组、单纯质粒浸泡组、质粒+微泡造影剂组、质粒+超声辐照组、质粒+超声辐照+造影剂组。用重组真核表达载体pcDNA3.1-eNOS经微泡造影剂及超声辐照介导转染体外培养的大鼠VSMCs,辐照条件为超声探头频率为10MHz,机械指数为1.9,辐照时间为10min,重组真核细胞表达载体pcDNA3.1-eNOS 5μg/mL。辐照48h后,采用RT-PCR、Western blot及免疫组化检测VSMCs内eNOSmRNA和蛋白的表达。结果 RT-PCR检测E组eNOS mRNA的表达最显著,积分吸光度(IA)比值为(91.11±3.41)%,B、C、D组也有少量表达,IA比值分别为(26.10±1.32)%、(31.42±2.43)%、(35.05±2.25)%,与E组相比均P<0.05。蛋白印迹分析eNOS蛋白表达,A组有极少量表达,B、C、D组也有少量表达,IA比值分别为(22.12±1.33)%、(25.42±2.41)%、(33.11±3.11)%,而E组表达最明显,IA比值为(84.22±9.22)%,与各组相比均P<0.05。结论超声辐照结合微泡造影剂能显著提高eNOS基因在VSMCs的转染效率,提高细胞内一氧化氮合成酶的表达。

二氯乙酸盐对野百合碱诱导大鼠肺动脉高压作用的影响

目的探讨二氯乙酸盐(DCA)对野百合碱(MCT)诱导大鼠的肺动脉高压中肺血管平滑肌细胞增殖及凋亡的影响。方法将雄性SD大鼠随机分为3组:正常组,模型组和治疗组,每组各10只。后两组用野百合碱一次性皮下注射以诱导肺动脉高压产生。于注射MCT7d后,治疗组予以DCA喂养,正常组和模型组予以等量的生理盐水喂养。各组分别于第7、14、21、28天进行肺动脉平均压力测量。28d后处死动物,取肺组织进行常规病理染色和反映细胞增殖及凋亡的免疫组织化学染色。结果与模型组相比,治疗组的平均肺动脉压从第14天起开始降低,到第28天时已是模型组的一半(P<0.05)。28d后,治疗组的肺动脉中膜厚度百分比和右心室肥厚指数均比模型组显著降低(均P<0.05)。与模型组相比,治疗组的增殖细胞核抗原(PCNA)增殖度降低(P<0.05),而Caspase-3阳性率升高(P<0.05)。结论DCA可以抑制肺动脉平滑肌细胞增殖并促进其凋亡,从而逆转肺血管重构。

真实世界二叶式主动脉瓣重度狭窄患者应用Venus-A瓣膜行经导管主动脉瓣置换术的多中心经验

目的:探索我国真实世界中采用第一代自膨胀式Venus-A瓣膜行经导管主动脉瓣置换术(TAVR)治疗二叶式主动脉瓣(二叶瓣)重度狭窄患者的临床疗效。方法:连续入选2017年4月至2020年3月共22个中心行TAVR的二叶瓣重度狭窄患者,根据CT核心实验室判断将患者按Sievers分型分为0型二叶瓣组和1型二叶瓣组。通过基线、术中及短期随访指标评价其安全性及有效性。主要终点为30 d全因死亡及致残性脑卒中。次要终点包括术中即刻不良事件指标;30 d随访指标:延迟冠状动脉阻塞及瓣环破裂、主要出血、新发永久起搏器植入、NYHA心功能分级以及经胸超声心动图结果。结果:共入选199例二叶瓣重度狭窄患者,平均年龄(71.77±8.13)岁,男性113例(56.8%),0型二叶瓣组121例(60.8%),1型二叶瓣组78例(39.2%)。所有患者均采用Venus-A瓣膜行TAVR治疗,术中无死亡、无冠状动脉闭塞、无瓣环破裂,1例(0.5%)患者急诊外科开胸,7例(3.5%)患者出现瓣膜移位,24例(12.1%)患者进行了第二枚瓣膜置换。释放后即刻4例(2.0%)患者出现中度及以上瓣周反流,6例(3.0%)患者仍有残余狭窄。术后30 d随访,全因死亡率0.5%,致残性脑卒中发生率0.5%,无延迟冠状动脉闭塞及瓣环破裂。新发永久起搏器植入19例(9.5%),1型二叶瓣组发生率高于0型二叶瓣组(19.2%vs.3.3%,P=0.023)。30 d随访超声心动图提示:主动脉瓣平均跨瓣压差、主动脉瓣峰值流速及左心室射血分数较基线有明显改善。5例(2.5%)患者仍存在中量及以上瓣周反流,0型二叶瓣组发生率高于1型二叶瓣组(4.1%vs.0%,P=0.034),1例(0.5%)患者仍有残余狭窄。结论:真实世界中采用Venus-A瓣膜行二叶瓣TAVR短期整体效果满意,体现出了良好的安全性及有效性。

126例缩窄性心包炎的围手术期处理

目的探讨缩窄性心包炎的围手术期处理方法以及要点。方法统计分析1982年5月至2005年12月协和医院心脏外科手术治疗缩窄性心包炎患者126例,男88例,女38例,平均年龄(31.2±16.1)岁。术前大多有水肿、呼吸困难、胸痛等症状。X线检查有93例提示心包钙化灶,钙化率73.81%。术前心功能NYHA分级Ⅰ级7例、Ⅱ级21例、Ⅲ级98例,术前中心静脉压为(22.13±8.24)kPa,左心射血分数(EF)值为(34.3±17.4)%。其中47例行全心包切除术,79例行部分心包切除术。结果123例术后心功能均明显改善,2例术后早期死于低心功能排出量,死亡率1.6%,1例手术后出现昏迷,于术后第10天自动出院。中心静脉压下降为(9.33±4.36)kPa。术后超声心动图示左心射血分数升至(51.8±12.1)%,心功能Ⅰ级47例、Ⅱ级76例。术后随访,2例行部分心包切除术患者分别于术后第3年和第5年死于心力衰竭。结论早期处理、彻底剥离、围手术期慎重处理对提高缩窄性心包炎手术成功率具有重要意义。

HIF-1对大鼠心肌iNOS、VEGF蛋白表达的影响

目的观察缺氧诱导因子-1(HIF-1)对大鼠心肌诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达的影响。方法应用HIF-1活性诱导剂氯化钴预处理大鼠,观察大鼠心肌iNOS、VEGF蛋白表达的变化。结果HIF-1α、iNOS、VEGF蛋白表达在预处理前分别为0.57±0.04、1.39±0.07、5.87±0.58。HIF-1α在预处理后3h(3.88±0.62)显著增加(t=3.04,P<0.01),6h(12.82±0.58)达高峰(F=3.87,P<0.01);iNOS蛋白表达在预处理后3h(8.10±0.40)显著增加(t=2.95,P<0.01),24h(13.74±0.58)达高峰(F=3.92,P<0.01);VEGF蛋白表达在处理后1h(9.18±0.75)即显著增加(t=3.08,P<0.01),之后在预处理后3h(21.72±0.53)和12h(23.97±0.73)分别形成两个表达高峰(均F=3.58,P<0.01)。结论氯化钴预处理大鼠后,HIF-1可促进心肌内iNOS、VEGF蛋白的表达,同时VEGF表达增高可能还存在其他的作用机制。

心脏外科急诊手术治疗的现状和进展

随着体外循环技术及围手术期诊疗技术的提高,我国心脏外科近年快速发展,其中危重心脏病患者急诊手术比例不断增加。有计划和规范地开展急诊手术,不仅可扩大手术范围,而且能及时挽救生命,促进我国心脏外科以及多学科的发展,缩小和国外的差距。

细胞间粘附分子-1反义寡核苷酸在小鼠体内的分布及其作用

目的 探讨细胞间粘附分子-1反义寡核苷酸(ICAM-1 -ASO) 静脉注射后在小鼠体内的分布及其对心脏组织ICAM 1表达的作用。方法 FITC荧光标记的ICAM -1 -ASO (10 mg/kg) 经小鼠颈外静脉注射6 h后, 应用荧光显微镜观察其在小鼠体内的分布; 取心脏组织进行免疫组织化学及半定量RT -PCR检测, 观察心脏组织中ICAM -1 的表达, 研究ICAM- 1- ASO对心脏组织ICAM -1表达的作用。结果 ICAM-1- ASO经静脉注射6 h后, 在肾脏以及心脏组织中可见较多的颗粒状荧光分布, 而在肝、肺、脾组织中仅见少量散在的荧光分布。RT- PCR检测表明ICAM- 1- ASO (10 mg/kg) 可降低心脏组织中ICAM -1 -mRNA水平; 但免疫组织化学检测各组间ICAM -1 的蛋白水平未显示出显著性差异。结论 ICAM -1 -ASO经静脉注射6 h后可以明显抑制心脏组织ICAM- 1 -mRNA的表达, 其作用的理想靶器官是心脏和肾脏。

不同方法诱导的骨髓间充质干细胞移植修复大鼠梗死心肌

目的探讨将不同方法诱导的骨髓间充质干细胞(MSCs)移植到心肌梗死部位后对梗死心肌的修复作用。方法自成年大鼠骨髓中分离MSCs,分别以下列方式诱导:A组,用心肌细胞裂解液培养7d后移植;B组,MSCs与心肌细胞按1:4的比例共同培养7d后移植;C组,用5-氮杂胞苷(10μmol/L)诱导24h后,换DMEM培养液培养21d后移植;D组(对照组),用DMEM培养液培养21d后移植。建立大鼠心肌梗死模型,将上述4组MSCs进行DAPI标记后移植于梗死部位。用超声心动图检测移植前和移植30d后心肌功能的改变,苏木精-伊红染色观察移植细胞形态。结果A、B组移植后大鼠左室舒张末期内径(LVEDD)和收缩末期内径(LVESD)比移植前减小,A、B、C组左室收缩功能指标射血分数(EF)和短轴缩短率(FS)明显比移植前改善。D组移植前后大鼠各指标差异无显著性意义。A、B组移植后镜下可见DAPI标记的MSCs表现为成熟细胞形态,排列在残存的宿主心肌细胞之间,具备与宿主心肌细胞相似排列方向和形态学的特征。C、D组移植后镜下也可见到DAPI标记的细胞,但与宿主心肌细胞形态不同,小部分为成熟心肌细胞形态,大部分为成纤维细胞形态。结论用与心肌细胞共培养和用心肌细胞裂解液培养两种方法诱导的MSCs移植于心肌梗死部位后,分化为心肌样细胞的效率高,模型鼠心功能恢复显著。

肠造口护理质量评价指标构建的初步研究

目的构建科学、客观、全面的综合医院肠造口护理质量评价指标,为有效开展专科护理质量评价提供客观依据。方法通过文献资料分析法、专家访谈及Delphi专家咨询,借鉴Donabedian提出的"结构-过程-结果"理论构建综合医院肠造口护理质量评价指标。结果两轮专家的权威程度分别为0.853和0.869;两轮咨询的肯德尔协调系数分别为0.213和0.220,最终确定了包含结构质量、过程质量和结果质量的3个一级指标、8个二级指标和41个三级指标的肠造口护理质量评价指标。结论以三维质量理论构建的肠造口护理质量评价指标,为临床肠造口护理质量评价提供参考依据,有利于精细化护理管理的实现。