男性无精子症患者血清生殖激素水平与睾丸生精功能的相关分析

目的观察男性无精子症患者血清生殖激素水平情况,探讨生殖激素水平异常能否预测临床穿刺取精结果。方法选择2011年1月至2013年10月在我院生殖中心就诊的878例男性无精子症患者作为研究组,同期在本院体检的40例正常男性作为对照组。采用免疫分析法检测外周血生殖激素水平,根据体格检查情况,对520例无精子症患者行睾丸/附睾穿刺取精,比较各组生殖激素水平及穿刺取得精子情况。结果研究组卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)水平较对照组显著增高(P<0.01),泌乳素(PRL)和睾酮(T)水平两组间比较无显著性差异(P>0.05);穿刺无精子组与穿刺有精子组及对照组比较,FSH、LH水平升高,有显著性差异(P<0.01),T水平显著下降(P<0.05),PRL水平无显著性差异(P>0.05)。结论血清生殖激素FSH、LH升高与男性无精子症有关,FSH的升高程度可初步预测睾丸/附睾的穿刺结果,对临床上睾丸穿刺处理具有一定的指导意义。

人精子RNA的提取及含量分析

目的建立可靠的提取人精子RNA的方法，分析其含量并用于检测基因mRNA。方法9例正常精液标本液化后，经Percoll纯化，用体细胞裂解液（含0．1％十二烷基硫酸钠和0．5％Triton X-100的水溶液）于O℃处理15min去除精子以外的细胞。用RNeasy Kit提取精子RNA，微量核酸测定仪测定RNA量。RNA用于逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR），检测β-Actin、精子特异性阳离子通道2（CatSper2）、鱼精蛋白2（Protamine-2）mRNA，同时，检测c-Kit、CD4、上皮细胞钙粘蛋白（E-Cadherin）mRNA，分别排除生精细胞、白细胞和上皮细胞的污染。结果体细胞裂解液于0℃处理15min能去除精子以外的细胞，使精子RNA提取量提高（2．2～4.9倍）。9例正常精液标本RNA量为（233．5±75．3）ng／10^6精子。所有标本RNA用RTPCR，均成功扩增β-Actin、CatSper2、Pmtamine-2，但扩增c-Kit、CD4、E-Cadhefin未见目的条带。结论人精子中含微量RNA，本提取方法能提取人精子中微量RNA，且避免其他细胞污染，可供人精子RNA研究和临床检测选用。

多胎减胎术的应用进展

随着人类辅助生殖技术的发展,多胎妊娠减胎术(MFPR)在降低多胎妊娠率,改善妊娠结局中发挥了重要作用。近二十余年来,MFPR在手术途径、手术方式上都有了很大的进步,已成为目前解决多胎妊娠的主要手段之一。多胎妊娠包括双胎的患者,减少胎儿数量可明显降低流产率,改善围生儿结局。同时,减胎前有必要进行产前基因诊断,并且建议有经验的医师操作。

CatSper1在小鼠睾丸发育过程中的动态表达及与人精子活力的关系

目的研究CatSper1 mRNA在小鼠睾丸发育过程中的动态变化,并探讨CatSper1蛋白表达与精子运动的关系。方法采用荧光实时逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)相对定量法检测CatSper1 mRNA在出生后11、15、18、21、25、28、35、42、56和120 d龄C57BL/6小鼠(每天龄3只)睾丸中的表达;分别从4例正常精液标本中用四层密度梯度Percoll(浓度分别为95%、76%、57%和47.5%)离心分离出高活力和低活力精子,用于Western Blot定量检测CatSper1蛋白的表达。结果CatSper1 mRNA在18 d龄小鼠睾丸开始表达,在25和28 d龄表达上调明显,分别为21 d龄表达水平的2.95和7.59倍。自42 d后上调缓慢,至成年小鼠时达到最高水平。CatSper1蛋白在每例标本高活力精子中的表达量均显著高于低活力精子(P<0.05)。结论CatSper1与精子活力特性有关,为进一步研究CatSper家族各成员间的关系和确切功能提供参考依据。

不同氧浓度对体外受精-胚胎移植妊娠结局的影响

目的:探讨体外培养时不同氧浓度对体外受精-胚胎移植(in vitro fertilization-embryo transfer,IVF-ET)中胚胎发育潜能及妊娠结局的影响。方法:将471例于2013年在本生殖中心行IVF-ET的患者,根据其体外培养的氧浓度将其随机分为5%低氧浓度组(n=247)和20%高氧浓度组(n=224)。比较两组间卵子成熟率、受精率、卵裂率、正常受精率、多PN率、D3优质胚胎率、囊胚形成率、可利用胚胎率、临床妊娠率、着床率及活产率。结果:两组间患者的卵子成熟率、受精率、卵裂率、正常受精率、多PN率、D3优质胚胎率、囊胚形成率、可利用胚胎率、临床妊娠率、着床率均无统计学差异(P>0.05)。但低氧浓度组的活产率显著高于高氧浓度组(48.2%vs.38.4%,P<0.05)。结论:低氧浓度胚胎培养能够改善IVF的妊娠结局。

体外受精合并重度卵巢过度刺激综合征的妊娠结局

卵巢过度刺激综合征（OHSS）是一种潜在危及患者生命的医源性并发症。OHSS总体发生率约为20％，其中重度为1％～10％。随着促排卵药物应用的增加，OHSS越来越普遍，发生率呈上升趋势。其发病机制尚不明确，临床上也缺乏完全有效的防治措施。

体外受精-胚胎移植后先兆流产患者不良情绪与社会支持的相关性

目的探讨体外受精-胚胎移植(IVF-ET)后先兆流产患者不良情绪与社会支持的相关性。方法选择本院2016年7月至2019年6月进行IVF-ET患者142例,根据其是否发生先兆流产,分为先兆流产组60例和非先兆流产组82例。比较两组的基本情况、焦虑自评量表(SAS)、抑郁自评量表(SDS)、赫氏希望量表(HHS)、社会支持评定量表(SSRS)评分。结果两组的婚龄、不孕年限、不孕因素、文化程度、是否初次行IVF-ET比较差异均无统计学意义(P>0.05);先兆流产组的年龄显著高于非先兆流产组,孕周显著低于非先兆流产组,差异有统计学意义(P<0.05)。先兆流产组的SAS,SDS评分显著高于非先兆流产组(P<0.05);HHS,SSRS各项评分显著低于非先兆流产组(P<0.05)。经Pearson直线相关法分析,IVF-ET后先兆流产患者的SAS,SDS评分与社会支持呈正相关(P<0.05),HHS与社会支持呈负相关(P<0.05)。结论IVF-ET后先兆流产者的不良情绪易受社会支持的影响,临床可根据患者焦虑、抑郁严重程度及希望水平的高低采取针对性干预措施。

输卵管积液对体外受精及胚胎移植的影响

目的分析输卵管积液对体外受精及胚胎移植效果的影响。方法比较接受体外受精-胚胎移植治疗的输卵管积液患者(45例)及输卵管阻塞但无输卵管积液患者(67例)的治疗结局。结果输卵管积液组中妊娠率及种植率(27.67%及13.22%)显著性低于无输卵管积液组(37.31%及17.64%),P<0.05;患者是否有输卵管积液对获卵数、受精卵、合子及胚胎质量并无影响。结论输卵管积液显著性降低体外受精-胚胎移植的成功率。

妇科肿瘤与生育力保护及保存

15%~20%的妇科肿瘤患者处于育龄期,这些患者中有很多仍有生育要求。然而妇科肿瘤治疗中的手术切除、放疗及化疗等均可对生育力产生严重损害,生育力下降或丧失将严重影响肿瘤幸存者的生活质量。因此如何在保证肿瘤治疗效果的前提下尽可能保护患者的生育力已成为肿瘤治疗中的重要议题。近十年,妇科肿瘤患者生育力保护研究取得了长足进展,保留生育力手术、药物和辅助生殖技术的不断改进和应用,其有效性和安全性也逐步得到临床证据的支持。现就妇科肿瘤中各种生育力保护和保存方法进行概述。

黄体酮阴道缓释凝胶用于IVF/ICSI术后黄体支持的临床观察

目的探讨黄体酮阴道缓释凝胶(雪诺同8%)应用于IVF/ICSI-ET术后黄体支持的临床效果,探讨其有效性和安全性。方法回顾性分析2015年3～8月在我中心长方案降调后行常规IVF/ICSI-ET的321例患者(共321个周期)的临床资料,按照不同的黄体支持方法分为两组:针剂组(肌肉注射黄体酮针剂,166个周期)和缓释凝胶组(使用黄体酮阴道缓释凝胶,155个周期)。比较两组患者的一般资料、妊娠结局及不良反应发生情况。结果 321个新鲜移植周期中,总临床妊娠率为57.32%(184/321)。针剂组和缓释凝胶组的一般资料比较均无显著性差异(P>0.05);缓释凝胶组的临床妊娠率(67.10%vs.48.19%)、活产率(59.35%vs.41.57%)均显著高于针剂组,不良反应发生率(1.29%vs.5.42%)显著低于针剂组(P<0.05);两组的胚胎种植率、自然流产率、生化妊娠率比较无显著性差异(P>0.05)。结论黄体酮阴道缓释凝胶可用于IVF/ICSI-ET术后的黄体支持,其能有效提高临床妊娠率、活产率,并降低不良反应发生率。

国产与进口重组人FSH用于WHOII类排卵功能障碍患者促排卵的多中心、盲法、随机对照Ⅲ期临床试验

目的评价国产重组人FSH（rhFSH）用于WHO1I类无排卵性患者促排卵的临床有效性及安全性。方法多中心、随机、盲法、平行阳性对照的非劣效试验。2008年5月-2009年8月在13家医院确诊的531例WHOⅡ类无排卵性不孕症育龄期妇女被纳入统计学分析，随机分为试验组（予国产rhFSH，n=352）和对照组（予进口rhFSH，n=179）。比较两组患者在启动周期内达到成熟卵泡（B超下卵泡直径〉118mm）的有效率、排卵率、临床妊娠率、多胎妊娠率、卵巢过度刺激综合征（OHSS）发生率及不良反应发生率等指标。结果启动周期内达到成熟卵泡的有效率，试验组和对照组分别为91．8％（323，352）和88．8％（159／179），两组比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。基于成熟卵泡周期的排卵率和临床妊娠率，试验组为91．3％（295／323）和19．2％（62／323），对照组为90．6％（144／159）和18．2％（29／159），分别比较，差异均无统计学意义（P〉0．05）。直径〈14mm的卵泡数、hCG日LH和孕酮水平、hCG日子宫内膜厚度，两组比较，差异均无统计学意义（P〉0．05）；14mm≤直径〈18mm、直径≥18mm的卵泡数及hOG日雌二醇水平，试验组均显著高于对照组（P〈0．05）。试验组患者rhFSH总用量和刺激天数分别为（879±419）U、（9．8±2．2）d，对照组分别为（1043±663）U、（11．4±0．6）d，分别比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）。试验组的多胎妊娠率高于对照组，分别为21％（13／62）和10％（3／29），两组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。治疗期间，OHSS和不良反应发生率，两组比较，差异均无统计学意义（P〉0．05）。试验组未出现进口rhFSH不良反应以外的事件。结论针对WHOII类无排卵性患者采用国产rhFSH促排卵治疗有效、安全、经济，值得推广。

无精子症、重度少弱精子症患者染色体核型与Y染色体微缺失发生率的研究

目的：探讨染色体核型异常与男性无精子症、重度少弱精子症的关系。方法对2011年1月至2013年10月来我院生殖中心要求助孕的445例无精子症、147例重度少弱精子症患者，采用外周血常规染色体制备方法对染色体进行核型分析，并采用聚合酶链反应对122例Y染色体进行AZF微缺失检测，283例不育症患者进行睾丸/附睾穿刺取精检查。结果445例无精子症者检出染色体核型异常率为38.65%，分别为性染色体异常22.7%，常染色体异常6.52%、染色体多态性9.43%；147例重度少弱精子症者染色体异常率7.48%；与对照组相比差异均有统计学意义（P＜0.01）。8例Y染色体AZF微缺失位点为AZFa（SY 84，SY 86），AZFb（SY 127，SY 134），AZFc （SY254，SY 255）。结论无精子症、重度少弱精子症与染色体核型异常及Y 染色体微缺失密切相关，有必要在提供辅助生殖技术之前进行遗传学检查。

无精子症患者精液Y染色体微缺失检测与分析

目的建立用无精子症患者精液进行Y染色体微缺失检查的简便方法，并用于检测我国无精子症患者Y染色体微缺失的发生情况和位点。方法无精子症患者241例，取精液标本（其中51例有血液标本），45例正常精液标本作为对照，快速裂解提取DNA，用4组多重PCR检测分布于AZFa、AZFb、AZFc区共15个序列标签位点（STS）的缺失。PCR产物测序证实无精子症患者精液为模板扩增的准确性，琼脂糖凝胶电泳观察精液标本和相应血液标本PCR产物的一致性。结果所有多重PCR反应均成功进行，产物测序证实为目的片段。正常精液未检测到Y染色体微缺失，而无精子症患者共检测到26例（10．8％）Y染色体微缺失，均有欧洲男科学会（EAA）和欧洲分子遗传学质量控制体系（EMQN）推荐STS位点的缺失：AZFa区、AZFb区各2例（各占7．7％），3例（11．5％）位于AZFb＋AZFc区，19例（73．1％）位于AZFc区。血液标本检测结果与精液标本检测结果完全一致。结论用无精子症患者精液进行Y染色体微缺失检查是可行、可靠的。初步表明EAA／EMQN推荐STS位点适合我国无精子症患者Y染色体微缺失检查。

神经节苷脂GM3在多囊卵巢综合征大鼠卵巢及卵泡中的定位研究

目的:探讨神经节苷脂GM3在多囊卵巢综合征大鼠卵巢发育过程中的表达及定位,为进一步研究神经节苷脂GM3在卵泡发育和排卵过程中的作用提供依据。方法:采用高性能薄层色谱分析法测定PCOS大鼠卵巢神经节苷脂GM3的表达;用免疫荧光激光共聚焦技术检测神经节苷脂GM3在PCOS大鼠的不同发育阶段卵泡中的表达及定位。结果:多囊卵巢综合征大鼠卵巢组织中提取的神经苷脂主要成分为GM3;与正常对照组相比,PCOS大鼠卵巢组织中神经苷脂GM3的表达水平显著降低。PCOS大鼠的初级卵泡、次级卵泡及窦状卵泡中的神经苷脂GM3的表达水平显著降低。结论:多囊卵巢综合征大鼠的卵巢发育过程中神经苷脂GM3的表达水平显著降低。提示,卵泡发育异常可能与GM3的表达程度密切相关。

枸杞多糖对氧化应激损伤人子宫内膜上皮细胞的保护作用

目的探讨枸杞多糖(LBP)对过氧化氢(H_2O_2)诱导的人子宫内膜上皮细胞(Human endometrial epithelium cells,EECs)损伤的影响。方法实验分4组,正常对照组:正常细胞培养,不添加任何药物;H_2O_2对照组:人子宫内膜上皮细胞中加入0.10 mmol/L H_2O_2;LBP对照组:细胞中加入100μg/ml LBP;LBP+H_2O_2组:细胞先用LBP作用1 h,再加入H_2O_2共同培养30 min。MTT比色法检测各组细胞活力;用比色法检测细胞培养液中过氧化物丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)的活力;流式细胞仪检测各组细胞凋亡率。结果 H_2O_2组的EECs存活率降低(52.40±1.31)%,细胞凋亡率增加(45.20±1.32)%,EECs释放MDA的量升高(8.13±1.56)μg/ml,而SOD的活力降低(2.11±0.74)k U/g Pro,与正常对照组相比,其差异有统计学意义(P<0.01);与H_2O_2组相比,LBP+H_2O_2组的EECs存活率升高(95.20±8.25)%,细胞凋亡率减少(15.66±0.26)%,EECs释放MDA的量增加(4.32±1.34)μg/ml,而SOD的活力升高(3.33±0.91)k U/g Pro,其差异有统计学意义(P<0.01)。结论 LBP能抑制H_2O_2诱导的子宫内膜上皮细胞损伤,对子宫内膜上皮细胞具有明显的保护作用。

IVF异位妊娠高危因素

体外受精-胚胎移植（IVF-ET）是辅助生殖技术的重要组成部分。1978年获得首例IVF-ET成功以来,IVF-ET的临床妊娠率逐年提高。异位妊娠（EP）是IVF-ET常见的并发症之一。

第二极体数目与受精结局及胚胎发育潜能的相关性

目的 探讨第二极体数目与卵母细胞受精结局和胚胎发育潜能之间的关系.方法 根据受精后5 h内卵母细胞极体数目的 不同分为1个极体组（1PB组）、2个极体组（2PB组）、3个极体组（3PB组）和4个以上极体组（≥4PB组）.分别统计各组的正常/异常受精率（2PN率,1PN和3PN率）、优质胚胎率（优胚率）、移植胚胎所占比例以及相应着床率.采用χ2检验对数据进行统计学处理.结果 ① 2PB组的2PN率显著高于其它组,而异常受精率显著低于其它组;随着第二极体数目的 增加,异常受精比例逐渐增加;② 2PB组和3PB组的胚胎着床率显著高于1PB组,以2PB组为最;③ 2PB组和3PB组用于移植的胚胎比例无显著差异.结论① 短时受精后显示有两个极体的卵母细胞其受精结局和发育潜能优于其它极体数目的 胚胎;② 随着第二极体数目的 增加,异常受精比例逐渐增加,可能与卵母细胞减数分裂或基因调控异常有关;③ 1PB组的总受精率高达48.9 %.因此,短时受精后对于仅显示一个极体的卵母细胞需要延长观察时间,谨慎确定受精与否,以防止过度早补救ICSI;④ 1PB组的着床率显著低于2PB组,也不建议首选用于移植.

Wnt／BMP信号通路激活高效诱导人多能干细胞分化为血管平滑肌细胞

目的探讨体外采用无血清化学成分确定培养基诱导人多能干细胞（humanpluripotentstemcell，hPSC）分化为血管平滑肌细胞的优化方案。方法hPSC（H1／H9胚胎干细胞及诱导多能干细胞）采用无血清、化学成分确定的培养基进行单层培养，并依据诱导分化所使用的生长因子不同分为两组：A组采用骨形态蛋白4（BMP4）＋激活素A（ActivinA）；B组采用BMP4＋ActivinA＋Wnt信号通路激活剂CHIR99021。在两组干细胞诱导分化后的第9天，流式分选获取的CD31＋、CD34＋血管前体细胞，并经PDGF．BB定向诱导分化为血管平滑肌细胞。采用免疫荧光染色及实时定量荧光聚合酶链式反应（real—timeQPCR）对分化获取的细胞进行表型鉴定。结果流式分选结果显示，B组诱导方案应用于3种多能干细胞时能获得38．8％～51．4％的CD31＋、CD34＋血管前体细胞，显著高于A组诱导方案的11．7％-22．5％（P〈0．05）。两种诱导方案获得的血管前体细胞经定向诱导分化后，免疫荧光染色及real．timeQPCR检测显示所有分化细胞均具有SM22-a、SMA-a、Calponin等肌源性标志的表达。结论在采用无血清化学成分确定培养基培养条件下，同时激活BMP及Wnt信号通路可稳定、高效地将hPSC细胞诱导分化为血管平滑肌细胞，从而有望为细胞移植治疗提供“临床应用级别”的种子细胞。