抗CD4单抗干预实验鼠自身免疫性心肌病的T细胞信号转导机制(英文)

目的:探讨抗L3T4单克隆抗体对BALB/c小鼠实验性自身免疫性心肌病的治疗作用及T细胞信号转导机制。方法:以ADP/ATP载体肽免疫小鼠建立自身免疫性心肌病模型。3个月后,向小鼠体内注入抗L3T4单抗,以清除CD4+T细胞,并以无关抗体为对照。通过实时荧光定量PCR检测小鼠T细胞中信号分子(p56lck、p59fyn和Zap-70)和细胞因子(IFN-γ、IL-2和IL-4)的表达;通过免疫组化技术分析各组小鼠T细胞内CD45的表达。结果:给予抗L3T4单抗治疗的DCM小鼠T细胞内信号分子(p56lck、p59fyn和Zap-70)和细胞因子(IFN-γ、IL-2和IL-4)表达均减少,CD45的表达也明显减少。相反,以无关抗体免疫小鼠并不能对其产生保护作用,T细胞信号分子、CD45和细胞因子的表达也不被抑制。结论:抗L3T4单抗可以抑制ADP/ATP载体肽诱导的小鼠DCM过程中的T细胞信号分子和细胞因子的表达,可能起到治疗作用。

腺苷酸转位酶诱导自身免疫性心肌病小鼠的异常T细胞受体信号通路

目的:通过研究T细胞信号分子的表达,探讨自身免疫性扩张型心肌病发生的分子机制。方法:以线粒体腺苷酸转位酶(ANT)合成肽免疫液免疫Balb/c小鼠,建立自身免疫性扩张型心肌病动物模型(DCM组),运用实时荧光定量PCR法检测其T细胞内P56lck的表达,流式细胞术检测其Th细胞内IFN-γ和IL-4的含量,ELISA法检测其血清抗ANT自身抗体水平,免疫组化法观察其T细胞表面CD45的表达。以不含ANT合成肽免疫液免疫小鼠作为对照组(control),试验期6个月。结果:DCM组小鼠P56lck的基因表达(1369·51±874·05vs47·93±10·21,P<0·01)、IFN-γ和IL-4的百分含量(尤其是IL-4)(8·27±1·29vs5·58±0·59,P<0·01;9·93±1·53vs2·05±0·21,P<0·01)、抗ANT自身抗体的水平(0·105±0·015vs0·006±0·002,P<0·01)、CD45的表达强度(0·154±0·021vs0·026±0·008,P<0·01)均明显高于对照组。结论:异常的T细胞受体信号转导通路在ANT肽诱导扩张型心肌病发生中起着重要作用。

自身免疫性心肌病小鼠免疫球蛋白G亚类和Th细胞亚群分析

目的:探讨Th细胞介导的免疫应答在自身免疫性扩张型心肌病(DCM)发生中的作用趋势。方法:应用 线粒体ADP/ATP载体肽(免疫应答组)和不含肽的免疫液(对照组)免疫Balb/c小鼠,试验期内(6个月)光镜和电 镜观察心肌组织病理学变化,ELISA法检测其血清抗ADP/ATP载体自身抗体及IgG亚类水平,三色荧光标记的流 式细胞术测其脾细胞中Th细胞亚群分布。结果:免疫应答组小鼠自身抗体均为阳性,且在免疫过程中其抗体水平、 血清IgG1及IgG2a亚类、Th1/Th2细胞亚群含量均持续高于对照组(P均<0.01)。免疫的第1个月末,免疫应答 组小鼠心脏形态及病理学变化类似心肌炎,IgG2a亚类与Th1细胞亚群在体内占优势;第6个月末,心脏改变类似 扩张型心肌病,且以IgG1与Th2亚群为主,对照组均正常。结论:线粒体ADP/ATP载体肽可诱导小鼠血清IgG2a 向IgG1优势的转化,此转化与Th1、Th2免疫应答分别在自身免疫性DCM发生的早期和后期阶段起优势作用有关。

对ANT合成肽诱导的自身免疫性心肌病传染性耐受的小鼠T细胞信号机制分析

目的:通过对T细胞信号分子和CD45的表达分析探讨T细胞信号转导在自身免疫性心肌病小鼠传染性耐受中的作用。方法:用含有人线粒体腺苷酸转位酶(ANT)多肽的免疫液多次免疫BALB/c小鼠得到心肌病组(n=6),单抗组(n=6)小鼠在给予ADP/ATP肽免疫的第0、1和2天,同时接受尾静脉注射400μg抗L3T4单抗;第180天时,将单抗组小鼠的脾淋巴细胞取出转输到正常小鼠体内(转输组,n=6),此小鼠亦同时给予多肽免疫,方法同心肌病组。正常对照组(n=6),以不含多肽的盐水免疫小鼠,时间和剂量同心肌病组。以实时荧光定量PCR法检测各组小鼠T细胞中的信号分子(p56lck、p59fyn和zap-70)mRNA的表达;免疫组化法观察其T细胞表面CD45的表达;流式细胞术检测其Th细胞内细胞因子IFN-γ和IL-4的含量。结果:过继转输组小鼠T细胞内三个信号分子的mRNA表达均受到抑制,T细胞表面CD45的表达强度亦明显低于心肌病组;通过流式细胞术检测到的IFN-γ和IL-4的含量在转输组亦明显降低。结论:T细胞信号机制在自身免疫性心肌病的发病机制中起重要作用,通过对T细胞信号通路的干预,可能阻止实验鼠自身免疫性心肌病的发生。

过继转输抗L3T4单抗治疗的心肌病小鼠脾细胞对心肌抗体的影响

目的通过对心肌自身抗体的分析探讨Th细胞在自身免疫性心肌病发病机制中的作用。方法用含有人线粒体ADP/ATP载体肽的免疫液多次免疫Balb/c小鼠得到心肌病组(n=6),单抗组(n=6)小鼠在给予ADP/ATP肽免疫的第0、1和2天,同时接受尾静脉注射400μg抗L3T4单抗;第180天时,将单抗组小鼠的脾细胞取出转输到正常小鼠体内(转输组,n=6),此小鼠亦同时给予多肽免疫,方法同心肌病组。对照组(n=6),以不含多肽的盐水免疫小鼠,时间和剂量同心肌病组。以ELISA法检测各组小鼠血清抗ADP/ATP载体自身抗体水平及IgG亚型的变化;以实时荧光定量PCR法检测各组小鼠T细胞中的细胞因子mRNA的表达。结果转输组小鼠血清自身抗体在各时间点均为阴性,类似于单抗组和对照组,而心肌病组抗体水平在各时间点均显著高于对照组(P<0.01);转输组IgG1亚型的生成受到明显抑制;细胞因子(IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-6)表达在单抗组和转输组均受到显著抑制。结论Th细胞介导的免疫应答在自身免疫性心肌病的发病机制中起重要作用。

抗L3T4单抗早期干预对心肌病小鼠细胞因子的影响

目的研究早期应用抗L3T4单抗对心肌病小鼠血清和心肌组织中细胞因子的影响,探讨抗L3T4单抗治疗自身免疫性心肌病的机制。方法用含有人线粒体ADP/ATP载体肽的免疫液免疫近交系Balb/C小鼠建立类扩张型心肌病模型(心肌病组);以不含肽免疫液免疫小鼠作为对照组;在同时用含有ADP/ATP载体肽的免疫液免疫小鼠的前1d连续3d以400μg抗L3T4单抗免疫小鼠获得单抗组。采用流式细胞术检测小鼠脾脏中CD4+T细胞内IFN-γ/IL-4的表达;以ELISA法检测其血清中IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-6和TNF-α水平;实时荧光定量PCR法检测其心肌细胞因子基因表达。结果心肌病组小鼠血清IFN-γ和IL-4水平明显高于对照组,而单抗早期干预使其生成受到抑制,此结果与流式细胞仪检测到的T细胞内IFN-γ和IL-4水平相一致;血清中IL-2含量在3组小鼠差异均无显著性;TNF-α则在单抗组显著高于对照组和心肌病组。从心肌组织中细胞因子表达情况来看,心肌病组各种细胞因子合成均增多,而早期应用单抗能够抑制其基因表达。结论抗L3T4单抗能够阻断绝大部分细胞因子的生成,从而能够治疗实验鼠自身免疫性心肌病。

不同阶段应用抗L3T4单抗干预治疗对心肌病小鼠细胞因子的影响

目的:研究不同阶段应用抗L3T4单抗对心肌病小鼠Th1/Th2亚群及血清和心肌组织中细胞因子的影响,探讨抗L3T4单抗治疗自身免疫性心肌病的机制。方法:用含有人线粒体ADP/ATP载体肽的免疫液免疫近交系BALB/c小鼠建立类扩张型心肌病模型(心肌病组);以不含肽免疫液免疫小鼠作为对照组;在用ADP/ATP载体肽免疫小鼠的前1d连续3d以400μg抗L3T4单抗免疫小鼠获得早期治疗组;心肌病组小鼠于第4个月初始连续3d给予抗L3T4单抗治疗获得中期治疗组,单抗使用方法同早期治疗组。运用3色荧光标记流式细胞术检测小鼠脾脏中Th1/Th2的百分含量;以ELISA法检测其血清中IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-6和TNF-α水平;实时荧光定量PCR法检测其心肌细胞因子基因表达。结果:早期治疗组Th1及Th2亚群明显低于心肌病组;中期治疗组Th1相关细胞因子水平高于心肌病组,Th2水平介于心肌病组和早期治疗组之间。早期治疗组IFN-γ和IL-6与对照组相近,IL-2和TNF-α均高于对照组和心肌病组,IL-4介于前两组之间且与它们均有显著差异;中期治疗组IFN-γ和IL-2水平介于对照组和心肌病组之间,IL-6和IL-4明显低于心肌病组。结论:不同阶段应用抗L3T4单抗能够阻断或减轻系统性和局部细胞因子的生成,早期治疗较中期治疗对细胞因子的抑制作用更显著。

过继转输扩张型心肌病小鼠淋巴细胞诱导心肌损害

目的探讨扩张型心肌病(DCM)小鼠的自身免疫学机制。方法用人线粒体ADP/ATP载体肽免疫小鼠建立扩张型心肌病模型(DCM组),分别将其以伴刀豆凝集素A(ConA)刺激和未刺激的脾淋巴细胞过继转移给同源近交系小鼠(DCM-T-A组和DCM-T组),以用不含肽的对照液体免疫的小鼠为对照组;观察各组小鼠心肌组织病理学变化,以酶联免疫吸附法检测其血清抗ADP/ATP载体自身抗体水平、实时荧光定量聚合酶链反应检测其心肌细胞因子基因表达。结果在免疫或过继后的第1和第6个月末,DCM组和以ConA刺激的DCM-T-A组小鼠血清抗ADP/ATP载体自身抗体均为阳性;心脏在前期分别出现心肌炎性细胞浸润和轻度心肌纤维化,在后期均出现心脏增大、心肌细胞溶解断裂和弥漫性纤维化;心肌中细胞因子表达均增高,其中干扰素(IFN)-γ(DCM组30d:1486.0±243.0,180d:192.0±38.0;DCM-T-A组30d:357.0±38.6,180d:186.0±19.27)和白细胞介素(IL)-2(DCM组30d:197.0±11.0,180d:103.0±19.0;DCIN-T-A组30d:166.0±13.8,180d:96.0±4.47)表达增高在前期明显,IL-4、IL-6和肿瘤坏死因子(TNF)-α表达增高在后期更为显著。未用ConA刺激的DCM-T组与对照组均无上述改变。结论过继转输DCM小鼠脾淋巴细胞可诱导同源近交系小鼠产生抗ADP/ATP载体自身抗体和T细胞介导的免疫应答,发生过继免疫性心肌损害,且此损害与供体小鼠体内改变相似。