腹腔镜下经胆囊管的胆总管探查取石术治疗肝外胆道结石

目的探讨腹腔镜下经胆囊管的胆总管探查取石术治疗肝外胆道结石的临床应用效果。方法应用该方法治疗胆囊结石合并胆总管结石26例,总结其临床资料。结果经胆囊管途径取石成功率为24/26,1例因胆囊管变异,1例导丝插入胆总管未成功,中转为胆总管切开术。术中扩张时无胆管撕裂,术后无腹腔出血、胆漏发生,无围手术期死亡。术后住院时间4￣8d。结论对于胆囊结石合并继发性肝外胆管结石的病例,在采用腹腔镜下1次手术的方式治疗时,应首先考虑经胆囊管途径,以争取更小创伤以便更快地恢复。

经自然腔道内镜手术的进展

经自然腔道内镜手术是一种新兴的微创外科技术,它通过在自然腔道（如胃、阴道、直肠、膀胱）人为造口,然后置入软式内镜经造口进入腹腔完成手术.因其可以避免腹部切口从而实现了体表无瘢痕的目的 .尽管经自然腔道内镜手术目前还处于早期阶段,但随着技术的发展,必将开创微创外科的新纪元.

十二指肠乳头气囊扩张术在肝外胆管结石内镜治疗中的应用

目的 :探讨十二指肠乳头气囊扩张术 (EPBD)治疗肝外胆管结石的有效性和安全性。方法 :实施EPBD术38例 ,应用气囊将十二指肠乳头开口扩张至 8mm ,直接用取石网篮取石 ,当结石较大时先行机械碎石网碎石后再取石。术后鼻胆管引流 ,并造影复查。结果 :37例成功完成EPBD ,36例在EPBD后清除结石 ,7例附加机械碎石术。 37例中 ,2例十二指肠镜下取石 2次 ,1例再次ERCP时改为十二指肠乳头括约肌切开术 (EST)后取石。 37例中无出血、穿孔、重症胆管炎或重症胰腺炎发生 ,无术后胆管明显积气 ;9例出现高淀粉酶血症 ,72h内恢复。结论 :EPBD后取石具有与EST后取石相近的成功率 ,出血风险低 ,胰腺炎并发症发生率并不高 ,机械碎石比例较EST术后为高。适用于 10mm肝外胆管结石的治疗 ,但对较大结石也可应用。

内镜下十二指肠乳头气囊扩张术治疗胆管结石的临床研究

目的 探讨应用十二指肠乳头气囊扩张术 (EPBD)后进行胆管结石内镜治疗的有效性和安全性。方法 实施EPBD 42例 ,应用气囊将十二指肠乳头开口扩张至 8mm ,直接用取石网篮取石 ,当结石较大时先行机械碎石网碎石后再取石。术后鼻胆管引流 ,并造影复查。结果 41例成功完成EPBD ,3 8例单次内镜治疗清除结石 ,3例行两次十二指肠镜下取石治疗 ,其中 1例再次内镜治疗时改为十二指肠乳头括约肌切开术 (EST)后取石。 9例附加机械碎石术。 41例中无出血、穿孔、重症胆管炎或重症胰腺炎发生 ,无术后胆管明显积气 ;10例出现高淀粉酶血症 ,72h内恢复。结论 EPBD后取石具有与EST后取石相近的成功率 ,出血风险低 ,胰腺炎发生率并不高 ,机械碎石比例较EST术后为高。主要适用于直径小于 10mm的肝外胆管结石 ,但对较大结石也可应用。

经内镜十二指肠乳头肌切开取石术后消化道出血的处理与预防

目的探讨经内镜十二指肠乳头肌切开（EST）取石术后消化道出血原因、预防措施及处理方法。方法收集2008年1月至2011年1月行EST取石术的病例520例，其中术后消化道出血8例，对其I临床资料进行回顾性分析。结果8例中，十二指肠乳头肌切开后出血6例，胆道黏膜损伤出血1例，肠道黏膜损伤出血1例。出血病例中，术前合并肝硬化2例，胆管炎3例，胆总管大结石3例。行括约肌预切开者2例。术中即有出血者5例。毕Ⅱ式术后再行EST取石1例。8例分别予以药物、内镜、介入等非手术处理成功。结论EST是ERCP术后消化道出血的最主要原因，注意掌握EST的操作要领和对消化道出血的处理措施，可以使其更加有效、安全。

腹腔镜辅助改良Soave术治疗成人先天性巨结肠症

目的 评价腹腔镜辅助改良Soave术治疗成人先天性巨结肠症（HD）的临床价值.方法 回顾性分析华中科技大学同济医学院附属协和医院2005年3月至2009年12月间行腹腔镜辅助改良Soave术的28例术前诊断为成人HD患者的临床资料.结果 本组28例患者均成功实施了腹腔镜辅助改良Soave术,无中转开腹.手术时间135～185（165±12）min,术中出血量50～250 ml,无一例术中输血.术后病理诊断示：19例符合HD,9例符合先天性巨结肠类缘病.术后直肠肌鞘感染2例,肛门口轻度污粪3例,平均住院时间（17.5±1.0）d.术后随访无排粪失禁及便秘复发.结论 腹腔镜辅助改良Soave术治疗成人HD安全、有效.

shRNA干扰STAT3基因表达对胃癌细胞MKN-45体内外生物学特性的影响

目的:研究shRNA干扰STAT3基因表达对胃癌细胞MKN-45体内外生物学特性的作用.方法:应用本实验室已构建并鉴定的STAT3基因的特异性小RNA干扰质粒(psiRNA-H1/STAT3),使用脂质体转染MKN-45细胞,实验分为对照组、psiRNA-H1转染组和psiRNA-H1/STAT3转染组3组.通过RT-PCR和Western blot检测STAT3特异性小RNA干扰基因对胃癌细胞STAT3基因mRNA和蛋白表达的影响;MTT比色法检测细胞的生长抑制率;流式细胞仪分析MKN-45细胞周期分布.用各组MKN-45细胞建立移植瘤裸鼠模型,筛选转染psiRNA-H1和psiRNA-H1/STAT3的MKN-45稳定细胞株观察裸鼠移植瘤的生长情况.结果:成功转染重组体的MKN-45细胞中STAT3 mRNA和蛋白表达明显下降(0.612±0.074vs1.937±0.043,P<0.05;0.668±0.054vs2.005±0.064,P<0.01).G0/G1期细胞比例增高,另一方面S期细胞比例降低,细胞的增殖系数明显降低(25.42±3.48vs33.54±2.91,P<0.05).移植瘤裸鼠模型显示,psiRNA-H1/STAT3组瘤体在体积上明显减小(4.47cm3±0.18cm3vs13.65cm3±5.64cm3,P<0.05).结论:针对STAT3基因的特异性小RNA干扰质粒在体外能有效抑制人胃癌细胞系STAT3mRNA和蛋白表达,细胞增殖能力减弱,在体内明显抑制肿瘤生长,为STAT3基因靶向治疗提供一定的实验依据.

siRNA沉默USP22基因对胃癌细胞增殖的抑制作用

目的:探讨小干扰RNA(siRNA)沉默泛素特异性肽酶22(ubiquitin specific peptidase22,USP22)对胃癌细胞增殖的影响.方法:针对USP22基因设计3条siRNA及阴性siRNA,用脂质体Lipofectamine 2000转染胃癌AGS细胞,通过实时定量PCR和Western blot检测转染后AGS细胞USP22基因中mRNA和蛋白表达水平的变化情况,流式细胞术检测细胞周期分布变化情况,CCK8法检测细胞增殖率及抑制率.结果:转染48h后,3条siRNA均能显著抑制USP22 mRNA和蛋白的表达.其中,以转染USP22 siRNA3后效果最明显,mRNA和蛋白表达分别下降80.47%±2.99%和79.40%±3.58%.细胞增殖明显受到抑制,USP22 siR-NA3组细胞增殖抑制率为27.33%±3.49%.细胞周期中G0/G1期细胞增多,S期细胞减少.结论:采用RNA干扰技术能够有效地沉默USP22基因的表达,并显著抑制胃癌细胞的增殖.

短发卡RNA对人胃癌细胞STAT3基因的沉默作用

目的探讨STAT3基因小发夹RNA(shRNA)表达质粒对胃癌MKN-45细胞STAT3基因的干扰作用。方法根据STAT3 mRNA编码序列,设计RNA干扰靶点,构建STAT3基因的特异性小RNA干扰质粒(psiRNA-H1/STAT3),使用脂质体转染人胃癌细胞系(MKN-45细胞)。实验分为对照(A)组,psiRNA-H1转染(B)组和psiRNA-H1/STAT3转染(C)组。通过RT-PCR和Western Blot检测STAT3特异性小RNA干扰基因对胃癌细胞STAT3基因mRNA和蛋白表达的影响。结果psiRNA-H1/STAT3经限制性酶切及部分序列分析证明基因插入正确,并经测序证实。将其成功转染MKN-45细胞后,该细胞的STAT3 mRNA和蛋白表达均明显下降(P<0.05)。结论将成功构建的针对STAT3基因的shRNA表达载体转染MKN-45细胞,能有效抑制该细胞的STAT3 mRNA和蛋白表达,为STAT3基因靶向治疗提供一定的实验依据。

磁性吉西他滨隐形纳米脂质体的制备及其理化性质

目的:研究制备磁性吉西他滨隐形纳米脂质体(MGSL)的最佳条件,并对其质量进行检测。方法:通过逆相蒸发法制备MGSL,采用扫描电镜和原子力显微镜对其形态进行观察;利用激光粒度分析仪测定MGSL粒径大小和粒度分布;通过高效液相色谱法检测药物的载药量和包封率;使用专业磁性测试仪进行体外磁响应性测定,且对MGSL的稳定性进行评价。结果:MGSL为圆形或椭圆形,大小均匀一致,其平均粒径为206.6nm,粒度分布窄,大小均匀。MGSL载药量为(10.4±0.7)%,包封率为(81.7±5.1)%。并具有体外磁响应性好、稳定性高等特点。结论:本法制备的MGSL符合纳米磁靶向给药系统的条件,有望成为一种有效的抗肿瘤物质。

5-氮杂-2'-脱氧胞苷对人胃癌SGC-7901细胞株生长及EDNRB基因启动子异常甲基化的影响

目的:探讨去甲基化药物5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对人胃癌细胞系SGC-7901细胞株的生长及EDNRB基因启动子异常甲基化的影响.方法:使用1、2、5、10μmol/L5-Aza-CdR干预胃癌SGC-7901细胞,甲基化特异性PCR(MSP)和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测药物干预前后EDNRB基因的甲基化状态和EDNRB mRNA的表达,MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞术分析细胞周期及细胞凋亡的改变.结果:未经5-Aza-CdR处理的SGC-7901细胞中EDNRB基因启动子区域CpG岛高甲基化,且EDNRB mRNA不表达,经1、2、5、10μmol/L5-Aza-CdR处理4d后,EDNRB基因启动子区域高甲基化状态得到逆转,细胞中EDNRB mRNA表达恢复.4种浓度5-Aza-CdR处理的SGC-7901细胞后,细胞增殖受到抑制,且呈时间和剂量依赖性;并抑制SGC-7901细胞生长周期,其细胞周期阻滞于S期,5、10μmol/L5-Aza-CdR实验组细胞凋亡率显著高于对照组,且差异有统计学意义(7.13%±0.87%,13.34%±1.12% vs 3.69%±0.52%,P=0.032,P<0.001).结论:5-Aza-CdR能有效逆转人胃癌SGC-7901细胞EDNRB基因的异常甲基化,从而激活因高甲基化导致EDNRB基因沉默的再转录,诱导该基因的表达,抑制该细胞的生长.

磁性吉西他滨隐形纳米脂质体体内磁控靶向抑瘤作用研究

目的研究制备磁性吉西他滨隐形纳米脂质体(MGSL)的最佳条件并考察其理化性质以及体内靶向治疗裸鼠乳腺癌的效果。方法通过逆相蒸发法制备MGSL,采用扫描电镜和原子力显微镜对其形态进行观察;利用激光粒度分析仪测定MGSL粒径大小和粒度分布;通过反相高压液相色谱法检测药物的载药量和包封率;使用专业磁性测试仪进行体外磁响应性测定,并且对MGSL的稳定性进行了评价。另外以裸鼠作为实验对象,制成裸鼠乳腺癌皮下移植瘤模型,通过对该模型尾静脉注射MGSL,移植瘤表面定时给予三维立体梯度磁场作用,观察MGSL靶向治疗裸鼠乳腺癌的效果。结果MGSL为圆形或椭圆形,大小均匀一致,其平均粒径为206.6nm,粒度分布窄,大小均匀。MGSL载药量为(10.4±0.7)%,包封率为(81.7±5.1)%。另外以乳腺癌荷瘤裸鼠为模型,MGSL在肿瘤部位磁场的作用下可以显著抑制裸鼠乳腺癌皮下移植瘤的生长,肿瘤体积从第2天开始,与其它组别相比均有显著性差异(P<0.05),其肿瘤生长速度较其它各组明显降低。第11天处死动物后剥离瘤体称重,MGSL加磁场组瘤重明显低于其它各组(P<0.05),抑瘤率最高,可达87.3%。结论该法制备的MGSL符合纳米磁控靶向给药系统的条件,其在动物体内可以显示良好的抑瘤作用,可望成为一种有效的抗肿瘤物质。

MicroRNA在胃癌中的研究进展

MicroRNA(miRNA)是一类进化过程中高度保守的内源性非编码小RNA.他们具有高度保守性、时序性和组织特异性,通过参与基因表达调控,在肿瘤的发生发展过程中扮演着重要的角色.本文就miRNA在胃癌方面的研究进展作一综述.

内皮素B受体基因甲基化与肿瘤关系的研究进展

遗传学修饰的DNA甲基化在肿瘤的发生发展中起重要作用.内皮素受体B(endothelin receptor B,EDNRB)基因是候选的抑癌基因之一.甲基化引起EDNRB基因失活与某些肿瘤发生的关系日益受到人们的关注,可能成为某些肿瘤早期诊断的分子标志物,同时由于DNA甲基化具有可逆性,也可为某些肿瘤提供新的治疗靶点.

STAT3基因短发卡RNA表达质粒的构建及其对胃癌细胞生长和侵袭的抑制作用

目的构建信号传导及转录活化因子3(STAT3)基因短发夹RNA(shRNA)表达质粒,探讨STAT3抑制后对胃癌MKN-45细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法根据STAT3 mRNA编码序列,设计RNA干扰靶点,构建STAT3基因的特异性小RNA干扰质粒(psiRNA-H1/STAT3),使用脂质体转染MKN-45细胞,实验分为对照组、psiRNA-H1转染组和psiRNA-H1/STAT3转染组。通过RT-PCR和Western blot检测STAT3特异性小RNA干扰基因对胃癌细胞STAT3 mRNA和蛋白表达的影响;MTT比色法检测细胞的生长抑制率;采用流式细胞术检测转染后对MKN-45细胞凋亡的影响;采用Boyden小室侵袭实验检测转染后MKN-45细胞侵袭力的变化。结果成功转染重组体的MKN-45细胞中STAT3 mRNA和蛋白表达明显下降(P<0.05)。psiRNA-H1/STAT3转染组各时相均明显抑制MKN-45细胞生长,且MKN-45细胞凋亡率为34.26%,相比对照组(3.75%)和psiRNA-H1转染组(4.43%)明显升高(P<0.01)。另外,psiRNA-H1/STAT3转染组MKN-45细胞侵袭力较另外2组明显减弱(P<0.01)。结论成功构建了针对STAT3基因的shRNA表达载体,通过转染MKN-45细胞,在体外能有效抑制人胃癌细胞STAT3mRNA和蛋白表达,细胞增殖、侵袭能力减弱并且促进细胞凋亡,为STAT3基因靶向治疗提供一定的实验依据。

鼻肠管在术后早期炎性肠梗阻治疗中的作用

目的比较鼻肠管和鼻胃管在炎性肠梗阻中的治疗作用。方法将2007年9月至2010年9月之间收治的58例腹部术后早期炎性肠梗阻病人，随机分成鼻肠管组和鼻胃管组予以治疗，观察各项临床治愈指标，并对结果进行比较分析。结果所有病人均治愈，鼻肠管组的各项临床治愈指标均优于鼻胃管组，差异均有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）。结论在炎性肠梗阻的治疗中，鼻肠管的作用比鼻胃管好。

腹股沟滑动性疝的手术处理

目的总结腹股沟滑动性疝的处理方法和经验。方法回顾性分析2009年7月至2012年5月收治的46例腹股沟滑动性疝患者的临床资料。结果46例手术均成功完成，术中未损伤滑出的脏器，术后无感染、浆液肿、阴囊肿大。随访1～15个月，无复发病例。结论术中警惕滑疝的可能，合理选择手术方式，术中仔细轻柔的操作，腹股沟滑动性疝可安全地完成手术。

重型血友病甲患者行腹腔镜胆囊切除加胆总管探查术一例

患者男，45岁。因“反复发作右上腹痛3个月伴皮肤黄染1周”于2009年5月14日入院。在外院行抗炎支持对症等治疗效果不佳，既往有血友病甲史（FⅧ缺乏）30年。体格检查：皮肤巩膜中度黄染，右上腹压痛，未及反跳痛，未及包块，肠鸣音可。全身多处关节肿大变形。

磁性吉西他滨隐形纳米脂质体的制备及其体外抑瘤实验

目的研究制备磁性吉西他滨隐形纳米脂质体（MGSL）的最佳条件并考察其理化性质以及在体外的抑瘤效应。方法通过逆相蒸发法制备MGSL，采用扫描电镜和原子力显微镜对其形态进行观察；利用激光粒度分析仪测定MGSL粒径大小和粒度分布；通过高效液相色谱法（HPLC）检测药物的载药量和包封率；使用专业磁性测试仪进行体外磁响应性测定。观察MGSL诱导的乳腺癌MCF-7细胞凋亡过程中的细胞形态学改变，MTT法获得MGSL作用乳腺癌细胞生长抑制率，流式细胞术分析MGSL引起的细胞凋亡率和细胞周期分布。结果MGSL为圆形或椭圆形，大小均匀-致，其平均粒径为206．6纳米，粒度分布窄，大小均匀。MGSL载药量为（10．4±0．7）％，包封率为（81．7±5．1）％。在体外，MTT实验结果与MGSL及游离的吉西他滨相对照，MGSL对人乳腺癌细胞有明显的杀伤作用，而且该作用随浓度升高有上升趋势；作用2h时在相同的浓度下较裸药组的抑瘤作用低（P〈O．05），但作用48h后两组的抑制率无差别（P〈0．05）；另外MGSL比磁性吉西他滨纳米脂质体（MGL）的抑制率略低，但无统计学差异（P〉0．05）；乳腺癌细胞周期分布结果显示，MGSL是主要作用于s期的细胞周期药物；另外流式细胞术也证实了MGSL还有促乳腺癌细胞凋亡的作用，其诱导凋亡率达到51．62％。结论本法制备的MGSL符合作为纳米磁靶向给药系统的条件，其在体外显示了较好的抑瘤效应，可望成为一种有效的抗肿瘤物质。

胶质细胞源性营养因子及内皮素B受体基因共转染神经干细胞实验研究

目的探讨神经干细胞转染的新方法,并观察转染后目的基因的表达情况。方法原代培养神经干细胞,运用jetPEI转染试剂将目的基因胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)和内皮素B受体基因(EDNRB基因)共转染至神经干细胞内,免疫荧光显微镜观察、流式细胞仪检测绿色荧光蛋白(GFP)表达情况,测定转染效率,RT-PCR检测目的基因表达情况。结果成功培养出可用于基因转染的神经干细胞,转染后24h即可在免疫荧光显微镜下观察到GFP表达,流式细胞仪显示24、48和72h转染效率分别为15.36%、24.67%和25.73%。RT-PCR显示目的基因在神经干细胞内成功表达。结论运用jetPEI成功将目的基因转染至神经干细胞内,为相关神经变性疾病的基因治疗打下了实验基础。