生长分化因子5真核表达质粒转染小鼠骨髓基质干细胞体外诱导向软骨细胞分化

背景:生长分化因子5是软骨与骨组织形成、发育的重要调解因子,在诱导软骨形成,促进骨、软骨、肌健韧带损伤修复方面发挥重要作用。目的:小鼠骨髓基质干细胞体外转染真核表达质粒pcDNA3.1(+)/生长分化因子5,检测与软骨形成分化相关的细胞外基质及蛋白多糖的表达。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2008-03/12在武汉协和医院中心实验室完成。材料:雄性昆明种小鼠20只,由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供。生长分化因子5真核表达质粒pcDNA3.1(+)/生长分化因子5为自备。方法:全骨髓贴壁法体外分离培养小鼠骨髓基质干细胞,取传至第3代细胞接种到6孔板,在细胞生长到90%融合时开始转染。设立3组:转染组采用LipofectamineTM2000进行脂质体介导pcDNA3.1(+)/生长分化因子5重组质粒瞬时转染;空质粒组转染空质粒pcDNA3.1(+);空白对照组只加入等量脂质体,其余步骤相同。主要观察指标:转染后72h通过RT-PCR及免疫细胞化学检测生长分化因子5基因与蛋白的表达鉴定转染是否成功,同法检测软骨基质Ⅱ型胶原的表达,转染后14d阿尔辛蓝染色检测蛋白聚糖的表达。结果:转染组有一大小为219bp的特异性扩增条带,骨髓基质干细胞胞浆内呈棕色阳性染色;而空质粒组、空白对照组均未发生生长分化因子5基因转录,无特异性扩增条带,且细胞胞浆未见明显染色。转染组可检测到Ⅱ型胶原基因的表达,基因大小225bp,Ⅱ型胶原细胞胞浆中可见棕黄色染色;空质粒组、空白对照组均未检测到Ⅱ型胶原基因的表达,SP染色均无明显染色。阿尔辛蓝染色后转染组细胞呈蓝染,空质粒组、空白对照组均未见明显异染性着色。结论:pcDNA3.1(+)/生长分化因子5转染骨髓基质干细胞能显著增加Ⅱ型胶原及蛋白聚糖的表达,促进骨髓基质干细胞向软骨细胞方向分化。

侧前路钛板内固定在胸腰椎陈旧性骨折中的应用体会

探讨Z-plateTM前路钢板内固定系统在胸腰椎陈旧性骨折内固定术中的作用及价值,其具有操作简单、并发症少、生物相容性好、复位固定满意、植骨融合率高等特点。

新型冠状病毒肺炎疫情下创伤骨科限期手术的管理与应对策略

新型冠状病毒肺炎(Corona Virus Disease 2019,COVID-19)是一种新型呼吸道传染病,其病原体为新型冠状病毒(SARS-CoV-2)。COVID-19感染蔓延迅速,给人类生命健康带来巨大威胁。在疫情期间,为了保障非新冠创伤骨科限期手术患者的救治质量,提高骨折预后水平,避免在救治过程中出现患者之间、患者与医务人员之间、医务人员之间的交叉感染风险,根据医院及科室自身特点制定了COVID-19疫情期间创伤骨科限期手术患者的管理路径和避免交叉感染的防护措施。本文主要从疫情期间武汉市东西湖区人民医院创伤骨科门、急诊患者接诊流程、入院后管理以及医护和陪护的防护等方面进行总结和概述,希望为各级医院开展创伤骨科限期手术处理提供科学参考。

重组人红细胞生成素与β-七叶皂甙钠治疗大鼠脊髓损伤的实验研究

目的:观察重组人红细胞生成素(rHu-EPO)和β-七叶皂甙钠治疗大鼠脊髓损伤后功能恢复、损伤段神经细胞凋亡情况。方法:30只SD大鼠根据损伤及治疗情况分为4组:空白组、损伤组、治疗A组和治疗B组,观察药物治疗前后大鼠的神经功能行为、红细胞、血红蛋白的变化。损伤后12d处死动物,损伤段脊髓标本做组织学切片,HE染色;做免疫组化检测凋亡因子(包括bcl-2,bax,fas);TUNEL标记凋亡细胞;比较各组间差别。结果:治疗A、B组在用药后,红细胞、血红蛋白数值明显高于治疗前,且与损伤组比较,神经功能有显著提高(P<0.05)。凋亡指标检测:fas、bax、TUNEL显示,损伤组的凋亡阳性细胞明显多于治疗组;bcl-2显示,治疗组的阳性表达明显多于损伤组(P<0.05)。结论:rHu-EPO能抑制脊髓神经细胞凋亡,对损伤脊髓的神经功能具有保护作用,联合应用rHu-EPO和β-七叶皂甙钠效果更明显。

Caspase-3抑制剂Z-DEVD-FMK对大鼠脊髓损伤后细胞凋亡的影响

目的:观察Caspase-3抑制剂Z-DEVD-FMK对大鼠脊髓损伤后细胞凋亡的影响。方法:将36只SD大鼠以改良Allen法制作大鼠急性脊髓损伤(SCI)模型(脊髓中度损伤),分为对照组(单纯损伤A组18只,按时间段又分为A1,A2,A3),治疗组(应用Z-DEVD-FMK治疗B组18只,按时间段又分为B1,B2,B3)。损伤后6h,3d,8d对脊髓损伤区进行组织学HE染色,细胞凋亡TUNEL标记,Fas凋亡因子检测,免疫组化检测Caspase-3的表达变化,同时采用BBB评分方法和斜板试验观察神经功能恢复情况。结果:对照组和治疗组均见TUNEL阳性的凋亡细胞和Cas-pase-3表达。Z-DEVD-FMK治疗组神经细胞的凋亡数减少,Caspase-3表达降低,神经功能增强,两组相比差异有显著性(P<0.05)。结论:Caspase-3抑制剂Z-DEVD-FMK能减少继发性脊髓损伤细胞凋亡和促进神经功能的恢复。

去甲斑蝥素对食管癌细胞株Eca-109中hTERT的表达和PTPRO基因启动子甲基化影响的实验研究

目的探索去甲斑蝥素(NCTD)诱导食管癌细胞Eca-109对人端粒酶逆转录酶(hT ERT)表达和受体O型蛋白酪氨酸磷酸酶(PTPRO)基因启动子甲基化的影响。方法 MTT比色法检测不同浓度(0、1、2、4、8、16μg/ml)NCTD及不同作用时间(12、24 h)对食管癌细胞Eca-109增殖的影响;TUNEL法配合激光共聚焦扫描显微镜检测NCTD+Eca-109组(实验组)和Eca-109组(对照组)细胞凋亡情况;甲基化特异性PCR(MSP)检测实验组和对照组中PTPRO基因启动子的甲基化状态,Western blotting检测实验组和对照组hT ERT蛋白的表达。结果 MTT检测显示,NCTD可抑制Eca-109细胞增殖,呈时间和浓度依赖性,不同作用时间和浓度的细胞增殖抑制率的差异有统计学意义(P<0.05);TUNEL法结合激光共聚焦扫描显微镜观察显示,实验组细胞内部结构发生剧烈的变化,较对照组细胞核染色质致密浓染,核形缩小;MSP检测显示,对照组PTPRO基因启动子发生明显甲基化;Western blotting检测显示,实验组hT ERT蛋白表达较对照组明显降低(P<0.05)。结论NCTD对食管癌细胞Eca-109有细胞毒性,能够抑制细胞生长,其机制可能与下调hT ERT蛋白表达和PTPRO基因启动子去甲基化有关。

全膝关节置换患者围术期疼痛控制

人工全膝关节置换术后患者通常都会经历明显的术后疼痛,这种疼痛限制了患者的早期康复。有效的镇痛方法可以缓解患者的术后疼痛,使患者能积极主动进行早期功能锻炼。近年来,出现越来越多的多模式疼痛控制方案,这些新的疼痛控制方案可能包括如下一种或多种模式：口服消炎止痛药;连续硬膜外麻醉;单次剂量脊髓和（或）硬膜外吗啡注射;局麻药,吗啡和（或）类固醇混合物关节囊周围注射;外周神经阻滞。通过局部麻醉和多模式疼痛控制方案,在尽可能避免不必要的使用麻醉剂情况下,达到无痛性全膝关节置换。本文主要就今年来出现的多模式的术后镇痛方案予以综述。

重组人红细胞生成素对大鼠脊髓损伤后神经细胞凋亡的保护作用

目的 观察大鼠脊髓损伤(SCI)后损伤段脊髓神经细胞凋亡机制和相关因子的表达,以及重组人红细胞生成素(rHu-EPO)对其的影响。方法 30只SD大鼠分为4组,建立SCI模型,观察rHu EPO对大鼠神经功能的影响;免疫组化法检测损伤脊髓神经细胞凋亡因子(Bcl 2、Bax、Fas)的表达;TUNEL标记凋亡细胞;比较各组间差别。结果 治疗组的神经功能较损伤组提高(P<0.05);损伤组的凋亡阳性细胞多于治疗组;治疗组Bcl 2阳性表达细胞多于损伤组(P<0.05)。结论 凋亡是 SCI后神经细胞死亡的一种重要方式;rHu-EPO能抑制脊髓神经细胞凋亡,对损伤脊髓的神经功能有保护作用。

CA125、Cyt-c和MGMT基因在卵巢癌患者血清中的表达及临床意义

目的:探讨糖类抗原125(carbohydrate antigen 125,CA125)联合细胞色素C(Cytochromes c,Cyt-c)和O^6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶(MGMT)在卵巢癌患者血清中的表达情况及临床意义。方法:对53例卵巢癌患者(卵巢癌组)、40例卵巢良性病变患者(卵巢良性病变组)、50例同期体检健康女性(对照组)采用电化学发光法检测血清CA125水平,ELISA法检测Cyt-c水平,甲基化特异PCR法检测MGMT基因启动子甲基化,流式细胞仪检测细胞线粒体膜势能。结果:卵巢癌患者血清中CA125和Cyt-c表达水平明显高于卵巢良性肿瘤组和健康对照组(P<0.05),CA125表达水平在卵巢良性肿瘤组和健康对照组,差异无统计学意义(P>0.05),Cyt-c差异有统计学意义(P<0.05)。MGMT基因启动子在卵巢癌组和卵巢良性肿瘤组中发生甲基化,甲基化率分别为75.3%和21.8%,健康对照组未发生甲基化。结论:联合检测血清CA125、Cyt-c和MGMT基因的表达水平有助于提高早期卵巢癌的诊断效能,对卵巢肿瘤的良恶性鉴别及对预后具有提示作用。

应用短刀头强力电凝行经口内镜食管下括约肌切开术治疗贲门失弛缓症的效果

目的分析应用回缩Dual刀头强力电凝行经口内镜食管下括约肌切开术(POEM)治疗贲门失弛缓症(AC)的安全性及有效性。方法分析2016年1月-2019年3月广州医科大学附属第一医院29例AC患者的临床资料,患者均接受POEM治疗,随访满24个月。记录手术操作时间、术中及术后并发症发生率和Eckardt评分。结果平均手术时间为(37.28±10.56)min。术中明显出血后电凝止血5例(17.2%),术中捻发感9例(31.0%),所有患者术中和术后均无严重并发症发生。随访24个月,28例患者术后Eckardt评分为(1.20±0.41)分,较术前的(7.50±1.83)分明显降低(P<0.05);另1例患者行第1次POEM术后12个月Eckardt评分为4分,行第2次POEM术后随访24个月Eckardt评分为1分。结论对AC患者行POEM,术中应用短刀头强力电凝,手术时间较短,可降低术中精细操控难度,具有较高的安全性和有效性,利于POEM术的开展。

感知教育在髋关节置换护理技能培训中的应用

目的分析在髋关节置换护理技能培训中应用感知教育对学生理论成绩与护理综合技能应用能力的影响。方法选取150名骨科实习护理学生作为本次研究对象,将其随机分为常规组与实验组,每组75名。常规组实施传统护理教学法,实验组实施感知教育教学法,对比两组护理学生理论成绩与综合技能考核成绩。结果实验组骨科实习护理学生理论成绩与综合技能成绩明显高于常规组,P<0.05。结论在髋关节置换护理技能培训中应用感知教育教学法具有明显效果,不仅能够提高护理学生对学习理论知识掌握度以及对于护理综合技能应用能力,同时还能提高整体教学效果。

重组人红细胞生成素对大鼠脊髓损伤后神经细胞及其因子凋亡的影响(英文)

背景:在脊髓损伤中,除了创伤造成的直接损伤外,脊髓局部还将发生一系列的继发性病理改变。有研究显示重组人红细胞生成素能抑制细胞凋亡和炎症反应,具有神经保护作用。目的:通过观察大鼠脊髓损伤段神经细胞凋亡及相关因子的表达,探讨重组人红细胞生成素对脊髓损伤的保护作用。设计:随机对照实验。单位:华中科技大学同济医学院附属协和医院骨外科实验室和同济医学院病理科。对象:实验于2003-09/2004-05在华中科技大学同济医学院附属协和医院骨外科实验室和同济医学院病理科进行。雌性成年SD 大鼠30只,随机分成4组,①空白组6只,只暴露脊髓,不损伤。②损伤组8只,脊髓损伤,不用药物。③治疗A 组8只,脊髓损伤,仅用重组人红细胞生成素。④治疗B组8只,脊髓损伤,联合应用重组人红细胞生成素和β-七叶皂甙钠。方法:①动物模型制作:24只大鼠应用改良的Allen 方法致脊髓中度损伤。②给药:治疗A 组于术后1,3,5,8,11d 应用重组人红细胞生成素300U /(kg·d)。治疗B 组应用重组人红细胞生成素剂量时间同治疗A组,β-七叶皂甙钠0.1m g/kg,1次/d,连用11d。空白组及损伤组尾静脉推注等容量生理盐水。③神经功能判断:在造模后1和12d 分别由同一个实验者进行功能评分记录。行为观察:参照改良的Gale 神经功能行为分析法评估,0分为严重障碍,6分为正常。斜板试验:观察大鼠抓握能力决定斜板角度的大小,反映神经功能恢复情况。④组织学检查:大鼠术后12d 处死。取损伤段脊髓标本切片做苏木精-伊红染色。⑤神经细胞凋亡因子bcl-2,bax,fas检测:取标本做免疫组织化学染色,计数显微镜高倍视野内染色呈棕色的阳性细胞,计算阳性率。⑥凋亡神经细胞检测:采用原位末端标记法计算凋亡指数(凋亡细胞核数/总细胞核数)。各指标检测结果进行组内和组间比较。主要观察指标:①神经功能行为学评分及斜板实验结果。②损伤段脊髓组织学观察结果。③神经细胞凋亡因子检测结果。④凋亡神经细胞检测结果。结果:①神经功能行为学评分及斜板实验结果:1和12d 空白组无显著差异。损伤组12d 斜板角度显著大于1d 时(P <0.05)。治疗A 和B 组12d 行为评分及斜板角度值均显著大于1d 时(P <0.05),且显著大于损伤组P <0.05)。②损伤段脊髓组织学观察结果:损伤组损伤段变细,脊髓内有大部分坏死和大量胶质细胞增生;治疗A,B 组大多数神经组织正常,治疗B 组组织结构优于A 组。③神经细胞凋亡因子检测结果:损伤组bax,fas凋亡阳性细胞明显多于治疗A,B 组犤损伤组(25.75±3.37)%和(41.37±2.83)%,治疗A 组(19.87±3.56)和(26.00±3.29)%,治疗B 组(12.00±2.97)和(17.50±2.20)%,P <0.05犦;bcl-2显著低于治疗A ,B 组犤(9.75±1.83)%,(14.63±2.83)%,(21.63±5.34)%,P <0.05犦。④凋亡神经细胞检测结果:损伤组细胞凋亡指数明显高于治疗A ,B 组(50.75±5.39,34.75±3.01,24.00±3.46,P <0.05)。结论:细胞凋亡是脊髓损伤后神经元死亡的一种重要方式。重组人红细胞生成素能抑制脊髓神经细胞凋亡,对损伤脊髓的神经功能具有保护作用。

碳酸乙烯酯对聚己内酯/冰乙酸电纺纤维的影响

在聚己内酯(PCL)/冰乙酸(GAC)溶液体系中加入低毒低挥发性溶剂碳酸乙烯酯(EC),采用静电纺丝法成功制备纳米纤维,采用扫描电子显微镜研究了不同EC浓度对制得的纤维形貌和直径的影响。结果表明,当溶液中PCL质量分数为20%,EC体积分数从0%变化到9%时,纳米纤维数量增加,平均直径逐渐变小;当EC体积分数从9%变化到15%时,微米纤维或珠串状纤维数量开始增加,平均直径逐渐变大。对比研究了EC体积分数为9%的溶液与未加EC的溶液的纺丝稳定性,同时对比研究了由这两种溶剂分别制备的纳米纤维膜和微米纤维膜的结构和性能。结果表明,PCL/GAC/EC溶液体系黏度可在24h内保持稳定,满足连续电纺要求;X射线衍射测试结果表明两种纤维膜结晶构型一致,只是结晶度和晶粒大小有所区别;傅里叶变换红外光谱分析结果表明EC对PCL的化学结构没有影响;与微米纤维膜相比,纳米纤维膜的比表面积提高了362.6%,平均孔直径有所减小,接触角有所增大;纳米纤维膜的拉伸断裂应力稍大但断裂应变明显小于微米纤维膜。

CDMP-1促进成人骨髓间充质干细胞成软骨分化的研究

目的探讨软骨源性形态发生蛋白1(CDMP-1)诱导成人骨髓间充质干细胞(BMSCs)向软骨细胞分化的可行性及最佳诱导浓度。方法分离培养BMSCs,免疫荧光法检测BMSCs表面CD34,CD45,CD105表达。采用含0、10、50、100 ng/ml CDMP-1的软骨诱导液诱导培养BMSCs 21 d,倒置显微镜观察细胞形态变化;RT-PCR检测不同浓度CDMP-1组细胞Ⅱ型胶原和Aggrecan表达;免疫组化检测Ⅱ型胶原表达;番红O和阿利新蓝染色检测蛋白多糖表达。结果成人BMSCs呈梭形漩涡状生长,CD44、CD105表达阳性,CD34呈阴性表达。CDMP-1诱导7 d后细胞形态逐渐由长梭形向多边形、多角形转化。不同浓度CDMP-1诱导21 d,Ⅱ型胶原表达量各组间差异均具有统计学意义(P<0.05);Aggrecan的表达CM组和10 ng组之间差异无统计学意义(P>0.05),其他各组间差异均具有统计学意义(P<0.05)。免疫组化检测Ⅱ型胶原表达阳性,阿利新蓝和番红O染色均为阳性。结论含100 ng/ml CDMP-1软骨诱导液能有效促进成人BMSCs向软骨表型分化。

PFNA-Ⅱ内固定术与人工股骨头置换治疗高龄老年人不稳定型转子间骨折的疗效比较

目的:分析70岁以上高龄老年人不稳定型股骨转子间骨折的特点,比较采用PFNA-Ⅱ内固定术与人工股骨头置换术两种治疗方法的疗效。方法:统计2011-09-2013-03期间治疗的70岁以上不稳定型股骨转子间骨折患者56例,分别采用PFNA-Ⅱ内固定术及人工股骨头置换术,统计手术效果、术后并发症、术后远期效果等多方面数据,进行分析比较。结果:两组患者平均82.5岁。其中50例患者并发不同的内科疾病,平均每例患病2.4种?两组病例术后均取得很好疗效,随访12个月,两组功能评定优良率分别为93.8%和83.3%(30/32及20/24),远期Harris评分分别为(80.5±3.7)分和(81.1±2.9)分,二者差异无统计学意义(P>0.05)。结论:高龄老年人不稳定型转子间骨折的发病率高、合并症多。髓内固定系统力矩短,更符合生理负重力线,较髓外固定方式的稳定性更好,采用闭合复位的损伤和出血少,骨折端血供不受影响?对绝大多数不稳定型骨折者采取PFNA-Ⅱ内固定术有良好疗效,而人工股骨头置换是治疗严重骨质疏松者、需早期患肢完全承重患者及内固定失败者的一种很好的选择。

基于网络搜索的心脑血管疾病关键词分析

目的探讨网络用户对心脑血管疾病关键词的关注度。方法利用百度指数，对网民进行＂心脑血管疾病＂关键词搜索的行为进行大数据分析。从关键词搜索数据的趋势分析、需求度分析、热门检索词分析、人群属性分析、相关兴趣点分析、地域分析等6个维度进行探讨。结果关键词整体搜索量呈现小幅度上涨趋势，其中移动端搜索趋势增长明显；春节期间整体搜索量显著下降；聚类显示＂症状＂一词最常与＂心脑血管疾病＂进行搭配使用；30~39岁组别占到总网络搜索量的约50%；关键词搜索人群中男性占70%，女性占30%；北京、上海、广州等经济发达地区搜索量明显靠前。结论需加强人群心脑血管疾病预防的宣传及教育，预防春节期间心脑血管疾病发生；提高男性对心脑血管疾病的认知；给予中老年人群更多样的心脑血管疾病信息获取方式，提升中老年人群心脑血管疾病预防和保健水平；应加速农村等不发达地区网络信息化建设及教育；考虑把网络宣传作为心脑血管疾病一级或初级预防的方法，同时应促进移动医疗在心脑血管疾病预防和保健领域的应用。关键词分析方法能对网络用户搜索行为进行有效分析，发现网络用户关注点，同时网络信息挖掘能对疾病预防进行指导。

机械牵张对缺血乳头肌动作电位的影响

目的 :研究机械牵张对模拟缺血状态下体外豚鼠乳头肌动作电位 (AP)的影响。方法 :建立模拟缺血条件下体外豚鼠乳头肌机械牵张模型 ,2 4只豚鼠随机分为正常对照组、单纯缺血组和缺血加链霉素组 ,每组 8只。利用细胞内标准玻璃微电极技术 ,记录并观察一定牵张力 ( 2 0 0mg强度 )作用下体外豚鼠乳头肌细胞AP各参数 [AP 0相最大升速率 (Vmax)、AP幅值 (APA)、AP复极达 2 0 %的时程 (APD2 0 )、AP复极达 5 0 %的时程(APD50 )和AP复极达 90 %的时程 (APD90 ) ]的变化。结果 :正常对照组牵张前后AP各参数无明显变化 (均P >0 .0 5 ) ;与正常对照组相比 ,单纯缺血组和缺血加链霉素组在牵张前上述参数均显著降低 (均P <0 .0 1) ;单纯缺血组 ,牵张使AP的Vmax和APA显著下降 ,APD2 0 、APD50 和APD90 明显缩短 (均P <0 .0 1) ;在缺血加链霉素组 ,牵张前后AP的上述指标无显著变化 (均P >0 .0 5 )。结论 :机械牵张易导致缺血心肌电生理参数变化 ,即缺血心肌对牵张反应的敏感性增加 ;

在职护士参与护理学继续教育动机的调查

目的调查在职护士参与护理学继续教育的内在动机。方法采用自制“护理学继续教育调查问卷”对武汉市某三甲医院的204名在职护士进行调查。结果发放问卷204份，收回有效问卷194份，回收有效率为95．10％。194名在职护士6大动机类型中，平均得分由高到低依次为职业发展（7．89±1．428）分、认知兴趣（6．75±3．136）分、利他服务（6．45±1．226）分、社交接触（6．14±2．265）分、社会刺激（5．93±2．587）分、外界期望（4．84±1．063）分。不同年龄、工龄、技术职称、月收入护士认知兴趣维度得分不同，差异均有统计学意义（F分别为17．245，5．368，10．551，23．147；P〈0．05）；不同婚姻状况、年龄、文化程度护士职业发展维度不同，差异均有统计学意义（F分别为12．358，4．386；P〈0．05）；不同婚姻状况、年龄护士社会刺激维度得分不同，差异均有统计学意义（F分别为8．937，7．314；P〈0．05）；不同年龄、工龄、技术职称、月收入护士利他服务维度得分不同，差异均有统计学意义（F分别为12．473，4．861，5．274，6．772；P〈0．05）；不同婚姻状况、年龄、工龄、文化程度、合同年限护士外界期望维度得分不同，差异均有统计学意义（F分别为4．013，9．324，3．357，8．927，5．887；P〈0．05）；不同婚姻状况护士社会接触维度得分不同，差异具有统计学意义（F=5．127，P〈0．05）。结论护士参与继续教育受其内在动机驱动，以职业发展与认知兴趣强度最高、最为普遍，外界期望影响较小。