钙激活氯离子通道对大鼠肺动脉张力的调节作用

目的:研究钙激活氯离子通道及其通道阻断剂尼氟灭酸(niflumic acid,NFA)i、ndaryloxyacetic acid(IAA-94)在苯福林(phenylephrine,PE)引起的肺动脉收缩中的作用。方法:常规离体血管灌流法检测肺动脉环张力;采用钙荧光探针(Fura-2/AM)负载急性酶分离法(胶原酶Ⅰ型和木瓜蛋白酶)获得的大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs),观察NFA和IAA-94对PE诱导的PASMCs胞浆游离钙离子浓度([Ca2+]i)的影响,用荧光分光光度计法检测[Ca2+]i。结果:钙激活氯离子通道阻断剂NFA和IAA-94可以舒张PE引起的肺动脉环收缩;NFA和IAA-94对KCl引起的血管收缩无影响;PE可以引起[Ca2+]i升高,NFA和IAA-94对PE诱导[Ca2+]i升高无影响。结论:钙激活氯离子通道在生理状态下与血管活性药(PE)引起的肺动脉张力变化有关,这为研究其在低氧肺血管收缩中的作用提供了新的线索。

Cox-2抑制剂对人肺腺癌A549细胞VEGF和Angs基因表达的影响

目的 :探讨环氧化酶 -2 (Cox 2 )抑制剂Nimesulide(NIM )对人肺腺癌A 5 49细胞血管内皮生长因子 (VEGF)及血管生成素(Angs)基因表达的影响及意义。方法 :不同浓度 ( 2 5、5 0、10 0、2 0 0 μmol/L)NIM处理人肺腺癌A 5 49细胞 2 4、48、72h后 ,放射免疫法测定细胞培养上清液PGE2 水平 ,半定量RT PCR检测NIM处理人肺腺癌A 5 49细胞后48h其VEGF及Ang 1、Ang 2mRNA的表达水平。结果 :NIM处理A 5 49细胞后 ,细胞培养上清液PGE2 水平下降 ,呈浓度和时间依赖性 ;NIM处理A 5 49细胞后 48h ,VEGF、Ang 2mRNA水平下降 ,呈浓度依赖性 ;Ang 1mRNA水平则无显著改变。结论 :NIM可抑制Cox 2活性及下调VEGF、Ang 2基因表达 ,该作用可能是Cox

地塞米松对哮喘小鼠肺组织Muc5ac mRNA和蛋白表达的影响

目的 :研究糖皮质激素对小鼠支气管哮喘 (简称哮喘 )模型肺组织粘蛋白基因Muc5acmRNA和蛋白表达的影响 ,探讨其对哮喘时气道粘液过度分泌的作用。方法 :1 8只清洁级BALB/c小鼠被随机分为对照组、哮喘组和地塞米松组 ,每组 6只。后 2组制作哮喘模型 ,地塞米松组用地塞米松治疗。采用RT PCR和免疫组化法分别检测肺组织中Muc5acmRNA和Muc5ac蛋白的表达。结果 :哮喘组肺组织Muc5acmRNA(0 .5 341± 0 .0 30 3)和蛋白 (0 .1 90 6± 0 .0 0 0 8)表达均较对照组 (分别为 0 .1 994± 0 .0 1 2 8和 0 .1 1 94± 0 .0 0 0 7)明显增加 (P均 <0 .0 1 ) ,地塞米松治疗后 2者均明显降低 (分别为 0 .2 72 9± 0 .0 345和 0 .1 4 5 6± 0 .0 0 0 3)。结论 :地塞米松可下调Muc5acmRNA和蛋白表达 。

抑制NF-κB对人肺癌裸鼠移植瘤生长及血管生成的影响

目的探讨核因子κB(NFκB)抑制剂吡咯烷二硫氨基甲酸(PDTC)对肺癌裸鼠移植瘤生长及血管生成的影响。方法人肺癌A549细胞接种于裸鼠皮下,建立肺癌裸鼠移植瘤模型,分为对照组和PDTC组,比较移植瘤重量,计算抑瘤率;RTPCR检测移植瘤环氧化酶2(COX2)基因表达,免疫组织化学法检测血管内皮生长因子(VEGF)和FⅧ蛋白表达,并计数微血管密度(MVD)。结果PDTC组移植瘤重量显著低于对照组(P<0.01),抑瘤率为41.03%;COX2、VEGF表达及MVD计数均显著低于对照组(P<0.01,P<0.01,P<0.05)。结论PDTC可抑制肺癌裸鼠移植瘤的生长,该作用可能与其抑制COX2、VEGF表达,从而抑制血管生成有关。

环氧化酶-2在肺癌血管生成中的作用及机制

目的 探讨环氧化酶-2 (COX- 2) 在肺癌血管生成中的作用及可能机制。方法 应用免疫组织化学法研究79例人肺癌组织COX 2、血管内皮生长因子(VEGF) 的表达; 建立裸鼠肺癌细胞株A549 移植瘤模型, 观察选择性COX- 2抑制剂尼米舒利(NIM) 对肿瘤生长的影响, 并用RT-PCR及免疫组织化学法检测裸鼠移植瘤组织的VEGF基因及蛋白表达。结果 在人肺癌组织中COX -2表达的阳性率为65. 8%, VEGF阳性率为72 .2%, COX -2 与VEGF显著相关(P<0 .01)。在裸鼠移植瘤体内实验中, NIM可有效抑制肿瘤的生长; 与对照组相比, NIM处理组肿瘤组织中VEGF mRNA及蛋白的表达均明显下调(均P<0. 01)。结论 COX -2与肺癌血管生成密切相关, 其作用机制可能是上调促血管生成因子VEGF的表达。关键词 肺癌; 环氧化酶2;

内皮素对大鼠肺动脉平滑肌细胞膜钾通道的影响

目的 观察内皮素 (ET 1)对大鼠肺动脉平滑肌细胞 (PASMCs)膜电压门控钾通道 (KV)的作用。方法 用全细胞膜片钳记录方法研究ET 1对膜电位 (Em)、膜电容 (Cm)、电压门控钾电流 (IKV)的影响。结果 ET 1可引起PASMCs去极化 ,并抑制IKV,抑制IKV 时间明显早于其对Em 变化的影响 ,ET 1对IKV 的影响呈可逆性和浓度依赖性 ,在有钙的环境中 ,ET 1对IKV 峰电流的抑制率明显高于无钙时。结论 ET 1可浓度依赖性的抑制IKV ,使常氧大鼠PASMCs去极化 ,且ET 1对IKV 的抑制作用早于对Em 的影响 ,这些作用不完全依赖于钙的参与 ,但钙可加强ET 1对IKV 的抑制作用。

大鼠肺动脉平滑肌细胞膜钙激活氯通道与细胞质钙的关系及意义

目的观察大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)膜钙激活氯通道(ClCa)与细胞质钙的关系及意义。方法大鼠PASMCs获取采用急性酶分离法。荧光光度法检测细胞质内游离钙离子浓度([Ca2+]i);全细胞膜片钳技术测定PASMCs钙激活氯电流(ICl(Ca));等长张力测定法观察ClCa阻滞剂尼氟灭酸(NFA)和Indaryloxyacetic acid(IAA-94)对大鼠肺动脉张力的影响。结果环匹阿尼酸(CPA)和苯福林(PE)均可引起[Ca2+]i升高;升高的[Ca2+]i可以引出ICl(Ca);NFA和IAA-94可以舒张CPA、PE引起的肺动脉环收缩。结论生理条件下大鼠PASMCs的ClCa是钙依赖性的;细胞外Ca2+内流及细胞质内Ca2+释放均可激活该通道,其参与了血管活性药诱导的肺动脉收缩。

BQ123对大鼠肺动脉平滑肌细胞电压门控钾通道表达的影响

目的:探讨内皮素-1受体拮抗剂BQ123对大鼠肺动脉平滑肌细胞电压门控钾通道亚型基因表达的影响。方法:根据常氧(PO2152mmHg)及慢性低氧(PO240±5mmHg)的不同培养条件,将肺动脉平滑肌细胞分为常氧组和慢性低氧组,并用BQ123分别处理上述两组细胞,采用半定量RT-PCR技术检测大鼠肺动脉平滑肌细胞Kv2·1、Kv9·3基因表达的变化。结果:经过慢性低氧,大鼠肺动脉平滑肌细胞Kv2·1、Kv9·3的mRNA表达水平明显低于常氧组(P<0·01,n=5),BQ123对常氧组Kv2·1的mRNA表达无影响(P>0·05,n=5),但可明显增加慢性低氧组Kv2·1的表达(P<0·01,n=5)。无论在常氧还是慢性低氧时,BQ123对Kv9·3的mRNA表达均无影响(P>0·05,n=5)。结论:慢性低氧可降低大鼠肺动脉平滑肌细胞电压门控钾通道的表达,内皮素-1受体拮抗剂BQ123可能通过抑制PASMCs的增殖,改变了细胞内信号转导通路中某些因子的表达,从而间接促进Kv的表达。

支气管哮喘小鼠肺组织SOCS-3mRNA和Muc5ac蛋白的表达及其关系的研究

目的探讨支气管哮喘(以下简称哮喘)小鼠肺组织细胞因子信号抑制因子-3(SOCS-3)mRNA和粘蛋白基因Muc5ac蛋白的表达及其二者的相关性。方法制作小鼠哮喘模型,应用RT-PCR法测定哮喘组及对照组肺组织SOCS-3mRNA的表达,应用免疫组织化学法测定两组气道粘蛋白基因Muc5ac蛋白的表达。结果小鼠哮喘组肺组织SOCS-3mRNA的表达较正常组明显升高,两组分别为(0.9045±0.0144)和(0.5010±0.0206),差异显著(P<0.01);小鼠哮喘组气道粘蛋白基因Muc5ac蛋白的表达较对照组明显增高,两组分别为(0.1930±0.0047)和(0.1186±0.0061),差异显著(P<0.01);哮喘组小鼠肺组织SOCS-3mRNA与气道Muc5ac蛋白呈显著的直线正相关(P<0.01)。结论哮喘时肺组织SOCS-3mRNA表达升高可能与气道Muc5ac蛋白的表达升高有关,从而促进了气道黏液过度分泌。

内皮素对慢性低氧大鼠肺动脉平滑肌细胞膜钾通道活性的影响

目的 观察内皮素(ET 1)对慢性低氧大鼠肺动脉平滑肌细胞 (PASMCs)膜电压门控钾通道 (KV)活性的影响。方法 将 12只Wistar大鼠随机分为对照组和慢性低氧组,每组 6只。用全细胞膜片钳记录方法研究ET 1对两组大鼠PASMCs膜电位 (Em )、膜电容 (Cm )及电压门控钾电流 (IKV)的影响。结果 ET 1可引起两组大鼠PASMCs去极化,且对两组大鼠IKV均有明显的浓度依赖性抑制作用。在慢性低氧组,高浓度ET 1对IKV的抑制作用强于对照组。结论 低氧并未改变ET 1引起PASMCs去极化及浓度依赖性抑制IKV的特性,且慢性低氧可能改变了PASMCs对ET 1的敏感性,内皮素和低氧对PASMCsIKV的抑制作用有协同性。

周期蛋白D1在香烟提取物促进支气管哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖中的作用

目的观察支气管哮喘大鼠气道平滑肌细胞(ASMCs)周期蛋白D1(cyclinD1)的表达变化,探讨cyclinD1在香烟提取物(CSE)促进哮喘大鼠ASMCs增殖中所起的作用。方法 16只SD大鼠随机分为对照组(n=8)和哮喘组(n=8)。原代培养大鼠ASMCs,分为对照组(A组)、对照+CSE组(B组)、哮喘组(C组)、哮喘+CSE组(D组)、哮喘+CSE+pcDNA3.1组(E组)和哮喘+CSE+pcDNA3.1-ascyclinD1组(F组)。检测ASMCs增殖及cyclinD1 mR-NA、蛋白表达情况。结果 ASMCs增殖水平及cyclinD1 mRNA、蛋白表达水平比较,A组与C组,C组与D组,D组与F组间均有统计学差异(P均<0.01)。结论正常与哮喘大鼠ASMCs在CSE干预后增殖明显加快,cyclinD1表达明显增加。CSE可能是通过cyclinD1参与调控哮喘大鼠ASMCs的增殖。

环氧化酶-2抑制剂联合依托泊苷对肺癌细胞增殖凋亡的影响

目的探讨环氧化酶2(COX2)抑制剂尼米舒利(NIM)与化疗药依托泊苷(VP16)联用对肺癌细胞增殖和凋亡的影响。方法培养人肺癌细胞A549:①NIM(25μmol/L)与VP16(2～32μg/mL)联合,MTT试验观察干预48h后细胞增殖变化及增殖抑制率;②分为对照组、NIM组(25μmol/L)、VP16组(8μg/mL)和NIM+VP16组,观察12h、24h及48h后A549细胞生长情况,描记生长曲线;流式细胞术检测干预48h后细胞凋亡率。结果①VP16能抑制肺癌A549细胞的增殖,且呈量效关系(r=-0.908,P<0.01),NIM与VP16联用后,抑增殖作用增强,二者有相加或协同作用;②NIM及VP16均可抑制A549细胞的生长,诱导凋亡,二者联用后作用增强。结论NIM与VP16联用可增强对肺癌细胞增殖的抑制和凋亡的诱导,二者具有协同抗肿瘤作用。

P38蛋白激酶和核因子κB对大鼠肺泡巨噬细胞一氧化氮合酶表达的调控

目的 探讨P38蛋白激酶和核因子κB (NF κB) 在脂多糖(LPS) 诱导肺泡巨噬细胞诱生型一氧化氮合酶(iNOS) 表达过程中的调控作用。方法 分离培养大鼠肺泡巨噬细胞, 设正常对照组, LPS刺激组, P38 蛋白激酶抑制剂SB203580干预组(SB203580+ LPS组)。分别采用免疫组织化学、RT- PCR、Western blot 及Griess 方法检测NF- κB、iNOS mRNA、核蛋白P38的表达以及培养上清NO含量。结果 LPS刺激组核蛋白P38、胞核NF κB染色阳性细胞百分比、iNOS -mRNA的表达以及培养上清NO含量均较正常对照组显著升高(P<0. 01); 加入SB203580干预后上述指标均显著降低, 与LPS刺激组相比差异均具有极显著性意义(P<0 .01)。核蛋白P38 的表达与胞核NF κB染色阳性细胞百分比、iNOS mRNA以及培养上清NO含量均呈显著正相关(r= 0. 862, 0 .569, 0. 715, 均P<0. 01), 胞核NF κB染色阳性细胞百分比与iNOS mRNA 的表达以及NO 的产生亦呈显著正相关(r= 0 .653,0 .597, 均P<0 .01)。结论 LPS刺激肺泡巨噬细胞P38 活化可上调胞核NF-κB、iNOS- mRNA和NO的表达; NF-κB可能是P38信号途径下游的重要位点之一。

杯状细胞和黏蛋白基因异常与支气管哮喘研究进展

气道杯状细胞 (GC)增生以及黏蛋白 (MUC)基因表达异常造成了支气管哮喘 (哮喘 )周围气道的黏液栓塞 ,目前认为其机制分别与TH2 细胞因子 (IL 4、IL 5、IL 9和IL 13)和GC脱颗粒的调节有着非常重要的关系 ,深入研究这些机制将为哮喘黏液过度分泌的控制开辟新的治疗途经。