雷帕霉素对人肝癌裸鼠原位移植瘤生长的抑制作用

目的探讨雷帕霉素对人肝癌裸鼠原位移植瘤生长的影响及其机制。方法建立人肝癌棵鼠肝原位移植瘤模型32只,随机分为空白对照组、FK506组、雷帕霉素常规剂量组和高剂量组。用药两周后观察肿瘤体积的变化,免疫组织化学法检测肝癌组织中增殖细胞核抗原(PCNA)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)的表达。结果对照组、FK506组、雷帕霉素常规剂量组、高剂量组平均肿瘤体积分别为:(310．15±40．16)、(605．59±116．23)、(99．19±15．27)、(151．61±27．81) mm3。与对照组相比,雷帕常规剂量组及高剂量组肿瘤体积明显缩小,PCNA、VEGF的表达均显著下调(P<0．01);FKS06组肿瘤体积与对照组相比明显增大,差异有统计学意义(P<0．01),PC- NA、VEGF的表达与对照组相比差异无统计学意义(P>0．01)。结论雷帕霉素具有显著抑制肝癌生长的作用,其机制可能是抑制了肝癌细胞的恶性增殖及VEGF的产生。

RNA干扰在猪内皮细胞抵御补体介导的细胞毒中的作用

目的 评价RNA干扰(RNAi)是否能有效抵御补体介导的对猪内皮细胞的细胞毒作用。方法 将小分子干扰RNA(SiRNA)转染猪内皮细胞系PED,检测PED转染前后α1,3 半乳糖转移酶(α1,3 GT)mRNA及α- 半乳糖糖链(αGal)抗原表位的表达,并评价RNAi对补体介导的细胞毒的影响。结果 SiRNA 1/PED的α1,3 GT基因异构体(isoform)表达量与空转组(Mock)相比减少了70%(isoform1,69%;isoform2,72%)(P<0 05),但SiRNA 2/PED的α1,3 GT表达量与错配组及空转组相比差异无统计学意义(P>0. 05),流式细胞学检查显示,SiRNA 1/PED的αGal平均荧光强度(52 9)明显小于错配组(493 9,P<0 01)及空转组(505 7,P<0. 01)。标准4h51Cr释放实验中SiRNA 1/PED的细胞溶解率较空转组分别减少了70%(20%正常人血清组)和60%(40%正常人血清组)(P<0. 05)。结论 PED在转染SiRNA- 1后发生了基因沉默,猪内皮细胞可以成为RNAi作用的靶细胞。本研究为更深层次探讨RNAi在异种移植中的作用奠定了基础。

转录因子诱骗性寡核苷酸转染猪血管内皮细胞抑制人补体介导的异种细胞毒作用

目的探讨转录因子SP，诱骗性寡核苷酸（decoyODNs）转染的猪血管内皮细胞对人血清补体介导的异种细胞毒作用的影响。方法将培养的永生化猪血管内皮细胞系细胞株SV40-PED分为3组。转染组：SV-40PED转染了SP，decoyODNs；错配组：S驴4D—PED转染了错配的decoyODNs；空转染组：SV-40PED仅用转染试剂oligofectamine作用。转染后26h，采用细胞爬片免疫荧光技术、蛋白印迹法、逆转录聚合酶链反应及乳酸脱氢酶释放试验进行检测，分别观察各组SV40-PED胞膜a半乳糖残基（regal）、蛋白质和α1，3-半乳糖基转移酶（α1，3-GT）mRNA等表达的变化，以及转染了SP，decoyODNs的SV-40PED对人血清补体介导的细胞毒作用的影响。结果转染组SV-40-PED胞膜α—G1的荧光表达明显减弱，部分胞膜可见点状荧光缺损，而空转染组和错配组仍可见明亮的绿色荧光。转染组蛋白表达水平均有不同程度的下降，相对吸光度（A值）仅为未转染组的52．6％。转染组α1，3GT基因异构体1和2mRNA的相对表达量分别为0．42±0．20和0．27±0．12，空转染组分别为0．72±0．17和0．50±0．19，两组比较，差异有统计学意义（P〈0.05）；错配组与空转染组相比，差异无统计学意义（P〉0.05）。体积分数为20％和40％的人血清对空转染组和错配组SV40-PED均有不同程度的杀伤，而对转染组SV-40-PED的杀伤明显减弱（P〈0.，05）。结论经SP，decoyODNs转染的猪血管内皮细胞可以抑制人血清补体介导的异种细胞毒作用。