CD8^+CD28^-NRP-1^+T细胞在肾移植手术后患者外周血中的比例变化及意义

用流式细胞仪分别检测不同功能状态下肾移植术后患者体内的CD8^+CD28^-NRP-1^+Ts细胞和CD8^+CD28^-Foxp3^+Ts细胞,通过比较两类细胞的阳性表达率初步探讨它们之间的表达关系和意义。选取正常健康人10例,移植肾功能稳定的长期存活者24例,慢性移植物肾病者20例,急性排斥者15例,取受试者外周静脉血,分离单个核细胞,利用流式细胞仪检测CD8^+CD28^-NRP-1^+Ts细胞和CD8^+CD28^-Foxp3^+Ts细胞在CD8^+CD28^-T细胞群中的比例。结果表明组间比较得出,CD8^+CD28^-NRP-1^+Ts细胞和CD8^+CD28^-Foxp3^+Ts细胞比例在四组之间均有统计学差异(P<0.05)。其中在长期存活组表达量最高,其CD8^+CD28^-NRP-1^+Ts细胞和CD8^+CD28^-Foxp3^+Ts的比例分别为16.15%±1.49%和11.90%±2.73%,其次为正常健康人(13.83%±2.38%、9.44%±2.03%),然后为慢性移植物肾病组(8.03%±2.67%、5.26%±0.65%),而急排组最低(3.34%±1.73%、2.36%±1.14%),并且四组间这两种细胞呈同一变化趋势且前者的变化幅度大于后者。组内比较显示,CD8^+CD28^-NRP-1^+Ts细胞比例均高于CD8^+CD28^-Foxp3^+Ts细胞(P<0.05)。CD8^+CD28 NRP-1^+Ts细胞可以从整体水平上反映肾移植术后患者的免疫状态,它比CD8^+CD28^-Foxp3^+Ts细胞更能全面的反映术后患者的预后情况。

抗HBsAg-Fab重组体在小鼠肝脏的表达

目的:研究人抗HBsAg-Fab重组体在小鼠体内的表达分泌．方法:将所构建的pXXUF1-HBs-Fab质粒以 5、10、20和40μg的剂量分别利用尾静脉液压法转染C57BL／6小鼠,建立实验1-4组;同时设立pXXUF1质粒转染对照组和空白组．转染 3 d后采集血清和肝、肾、脾等组织标本,运用RT-PCR,ELISA和免疫组织化学染色等方法从基因和蛋白水平分析基因工程抗体人抗 HBsAg-Fab在体内的表达能力．结果:尾静脉液压注射pXXUF1-HBs-Fab组小鼠血清中证实了人源性Fab蛋白的分泌性表达,各实验组血清中表达量分别为201．3± 13．7、213．1±13．5、513．6±12．8和954．1± 12．7μg／L,并具有与HBsAg特异性结合的活性,蛋白表达与注射质粒剂量有正相关(r= 0．912,P<0．01);对照组和空白组血清中则未测到目的蛋白．实验组肝、肾、脾组织RT-PCR 检测可见肝组织中有Fd重链及κ轻链的mRNA 表达;免疫组织化学检测显示肝细胞胞质中有棕黄色阳性颗粒,且部分肾小球毛细血管腔内壁和肾脏集合管壁可见附着的Fab蛋白, 肾实质细胞及脾脏均未见Fd重链及κ轻链的 mRNA和目的蛋白表达;对照组和空白组均未检測到目的蛋白．结论:pXXUF1-HBs-Fab成功于小鼠肝脏分泌表达人抗HBsAg-Fab重组体,其表达水平与质粒DNA注射剂量存在正相关关系,并可通过肾小球滤过代谢．

孕早期水平雌孕激素对小鼠体内调节性T细胞的影响

目的探讨孕早期的雌、孕激素对小鼠调节性T细胞在体内的影响及其相关性。方法建立去势C57BL/6小鼠模型,2周后分别皮下注射雌激素、孕激素及雌孕激素联合重建小鼠性激素水平,模拟妊娠早期小鼠激素水平。维持2周后,用流式细胞术和免疫组化检测给药后小鼠外周血、脾脏、髂窝淋巴结、胸腺中调节性T细胞比例变化情况。结果实验结果显示,雌鼠去势后,单独的雌激素干预可明显提高脾脏、髂窝淋巴结、外周血CD+4CD+25Foxp3+调节性T细胞在CD+4T细胞中的比例,分别为(8.56±1.85)%,(7.63±1.68)%,(6.13±1.32)%;与溶剂组比较差异有显著性(P<0.05)。但胸腺中调节性T细胞比例与溶剂组差异无显著性(P>0.05)。单独妊娠早期水平的孕激素与溶剂组比较,调节性T细胞比例有所升高,但差异无显著性(P>0.05)。而联合应用雌、孕激素对调节性T细胞的影响与单独应用雌激素的结果类似,两者差异无显著性。不同性别组给予相同干预药物,调节性T细胞的变化比例,雌雄两组差异无显著性(P>0.05)。免疫组化也得到了类似的结果。结论单独应用相当于孕早期水平的雌激素可明显提高小鼠外周血,脾脏,髂窝淋巴结CD+4CD+25Foxp3+调节性T细胞比例,而孕激素对外周调节性T细胞没有影响,两种激素对中枢淋巴器官的调节性T细胞均没有影响。小鼠T淋巴细胞中雌孕激素的受体分布及其功能与性别遗传没有相关性。