血吸虫病性门静脉高压症兔肝脏微血管构筑变化的研究

目的:探讨血吸虫病门静脉高压症时肝脏微血管构筑的变化及其可能在全身高动力循环状态中的作用。方法:采用腹部敷贴法感染血吸虫尾蚴建立血吸虫病性肝纤维化模型,经插管检测心输出量(CO)、平均动脉压(MAP)、心率(HR)和肝静脉嵌塞压(WHVP),按公式计算心脏指数(CI)、外周血管阻力(SVR);通过血管铸型方法观察肝脏微血管构筑。结果:与正常兔比较,血吸虫病兔CO、CI明显增高,MAP和SVR显著降低,WHVP升高,两组间HR差异无统计学意义。肝脏微血管铸型观察,血吸虫病时肝内微血管形态和比例严重失常,肝窦显著膨大,门静脉主干增粗,肝内形成广泛的小吻合支,其间以门静脉终末支与肝静脉终末支、门静脉小分支直接引流入肝静脉多见。结论:血吸虫病性门静脉高压症兔存在肝内门-体分流病理改变,可能是形成全身高动力循环状态并维持门静脉高压的一个重要环节。

结缔组织生长因子在血吸虫病肝纤维化鼠肝窦内皮细胞中的表达及意义

目的:动态观察结缔组织生长因子(CTGF)蛋白在血吸虫病肝纤维化鼠肝窦内皮细胞表达水平的时相变化,探讨其与肝窦内皮细胞下基底膜形成的关系。方法:采用腹部敷贴法建立血吸虫病肝纤维化模型,HE、Masson染色和透射电镜观察其病理变化;免疫组化技术检测CTGF、Ⅳ型胶原(ColⅣ)和层粘连蛋白(LN)在小鼠肝脏组织中的表达和分布;并应用彩色图像分析仪进行定量分析。结果:与正常对照组比较,模型组鼠肝窦内皮细胞表达CTGF蛋白阳性或强阳性,肝窦壁LN、ColⅣ表达水平增高,且随着肝纤维化的发展,CTGF和LN、ColⅣ表达逐渐增强,肝窦内皮下基底膜逐渐增厚。图像定量分析两组平均吸光度值、平均灰度值和阳性面积比具有统计学差异;CTGF蛋白与LN、ColⅣ水平呈正相关。结论:血吸虫病肝纤维化时小鼠肝窦内皮细胞通过CTGF蛋白表达上调,调控细胞外基质产生,导致ColⅣ、LN分泌增加,参与肝窦内皮下基底膜形成,从而引起肝内微循环障碍。

RhoGTP酶对血吸虫病鼠肝窦毛细血管化的调控作用

目的探讨 RhoGTP 酶在肝窦内皮细胞转分化过程中的调控作用,及其对血吸虫病性鼠肝窦毛细血管化病变的影响和可能机制。方法采用腹部敷贴法感染血吸虫尾蚴建立血吸虫病性肝纤维化模型,于13周吡喹酮顿服杀虫,14周追加 hydroxyfasudil。13周时正常对照组(A 组,10只)与血吸虫病组(B 组,6只),16、19周和21周后(B 组)、杀虫实验对照组(C 组)、血吸虫病+hydroxyfasudil 组(D 组)、杀虫+hydroxyfasudil 组(E 组)各6只)剖腹取肝组织。分别作 HE、Masson染色和透射电镜观察;免疫组化检测:p-膜联蛋白、CTGF、CD31、Col和 LN;Western 印迹检测:p-膜联蛋白、CTGF、RhoA、Col和 LN 蛋白表达;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测:CTGF、RhoA、ROCK mRNA 水平。结果与 A 组相比,动态观察 B 组肝组织 RhoA、ROCK及 CTGF mRNA 表达水平明显上升,p-膜联蛋白、CTGF、RhoA、ColIV 和 LN 蛋白表达量也增高。给予干预措施后,与 C 组及其它组相比,E 组 CTGF mRNA 表达于16周显著下调,同时显示 CTGF、LN、ColIV 蛋白水平也降低。与 B 组相比,D 组、E 组 p-膜联蛋白降低,16周时最为显著,但 D 组于19周开始 p-膜联蛋白表达量渐恢复到原水平,其中 E 组明显低于 D 组。肝窦的超微结构观察,于21周时 C 组分别与 B、D 组相比,浸润的炎性细胞明显减少,Disse 腔内胶原纤维有所减少,但肝窦内皮细胞窗孔、肝窦内皮下基底膜差异无统计学意义。E 组与 C 组比较肝细胞器形态明显恢复,可见窗孔,未见基底膜。结论 RhoGTP酶在调控血吸虫病性鼠肝窦内皮细胞转分化过程中,通过上调 CTGF 和 p-膜联蛋白发挥作用,抑制RhoGTP 酶信号通路有可能为防治肝窦毛细血管化提供新的有效靶点。