和络舒肝胶囊对大鼠慢性肝损伤的保护作用及分子机制研究

探讨中药制剂和络舒肝胶囊的抗慢性肝损伤作用及作用机制。采用四氯化碳皮下注射 8周制作大鼠慢性肝损伤模型 ,用生理盐水配制的和络舒肝混悬液灌胃 ,2粒 / (只·次 ) ,每天 1次 ,连续 8周。观察肝组织病理变化 ,检测血清 AL T、AST、AKP、γ- GT值 ,放免法检测透明质酸 (HA)、层粘蛋白 (L N)、 型前胶原肽 (P P)和 型胶原水平 ,免疫组化检测肝组织转化生长因子 β1(TGFβ1)表达 ,RT- PCR检测肝组织 Smad3m RNA水平。结果 ,和络舒肝能减轻慢性肝损伤的组织病理改变 ,显著降低肝损伤大鼠血清 AL T、AST、AKP值及肝纤维化指标水平 ,P<0 .0 5或 P<0 .0 1。四氯化碳诱导的慢性肝损伤中 TGFβ1表达增加 ,使用和络舒肝胶囊可抑制肝组织中 TGFβ1蛋白表达。正常组、和络舒肝组以及模型组 Smad3m RNA表达亦明显不同 ,其转录水平呈现依次增高趋势。和络舒肝胶囊对大鼠慢性肝损伤具有保护作用 ,其作用机制可能与影响 TGFβ1蛋白表达水平有关 ,而且可能是通过抑制信号转导分子 Smad3m

肝纤维化大鼠星状细胞Smad3、Smad7基因表达差异的研究

通过检测肝纤维化大鼠原代肝星状细胞 (HSC)的 Sm ad3和 Smad7编码基因的表达 ,探讨 HSC活化及转化机制。皮下注射四氯化碳 (CCl4)制备大鼠肝纤维化模型 ,于注射 CCl4后 1、 4、 8周分批分离 HSC并计算 HSC平均得率 ;RT- PCR检测其 Sm ad3、Smad7m RNA的表达变化。结果显示 :1CCl4注射后第 1、 4、 8周大鼠 HSC平均得率分别为 :(3.34± 0 .36 )× 10 7/只、 (4 .2 1± 0 .6 4)× 10 7/只、 (5 .88± 0 .79)× 10 7/只 ,均高于正常大鼠 HSC平均得率(2 .2 3± 0 .19)× 10 7/只 ,组间比较有显著性差异 ,P<0 .0 5。 2与正常对照组相比 ,注射 CCl4后 1、 4、 8周大鼠 HSC中 Sm ad3m RNA表达增加 ,P<0 .0 5。注射 CCl4后 1周 Sm ad7m RNA较正常明显升高 ,P<0 .0 5 ,到第 4周和第 8周表达水平则持续下降 ,P<0 .0 1。提示 Sm ad3和 Smad7在肝纤维化发生、发展中对 HSC的活化及转化起不同的介导作用。

大鼠胰星状细胞体外分离培养的实验研究

目的 体外分离培养胰星状细胞 (PSC) 以建立合适的体外模型, 为进一步研究胰纤维化的分子发生机制打下实验基础。方法 采用改良Apte MV酶消化法体外分离培养PSC, 胶质原纤维酸性蛋白 (GFAP) 免疫组化染色和荧光倒置显微镜观察自发绿色荧光对原代培养的 PSC加以鉴定。结果 PSC与肝星状细胞 (HSC) 具有相似的特征, 细胞呈梭形或星形, 细胞骨架蛋白 GFAP染色阳性, 由于胞质内含维生素 A脂滴, 在荧光倒置显微镜下于 328nm波长处可见自发绿色荧光。结论 改良酶消化法可用于体外分离培养 PSC, PSC分离培养的成功为进一步研究PSC活化与抑制信号通路的分子机制提供了体外模型。

铝碳酸镁对反流性食管炎大鼠食道粘膜的保护机制研究

目的 观察铝碳酸镁对急性反流性食道炎的防治作用 ,并探讨其作用机制。方法 采用十二指肠结扎复制反流性食管炎模型 ,治疗组予以铝碳酸镁 5 0 0 mg/(kg· d)灌胃 ,观察大鼠食管粘膜组织学表现 ,测定粘膜血流量 ,收集胃内潴留物测定 p H值及总胆酸浓度。并进行免疫组织化学检测。结果 光镜下模型组大鼠食管粘膜充血水肿 ,有的形成典型的溃疡结构。治疗组大鼠部分食管粘膜下层出现炎性细胞浸润 ,局部表层粘膜上皮脱落形成糜烂灶。电镜下治疗组大鼠血管炎症反应较模型组轻。模型组大鼠粘膜血流量较治疗组明显降低 (P<0 .0 5 ) ,胃潴留液量、粘膜损伤指数、总胆酸含量均较治疗组升高 (P<0 .0 1)。免疫组织化学显示模型组大鼠食管粘膜下层及肌层间质中小血管的内皮细胞上细胞间粘附分子 - 1(ICAM- 1)、L-选择素 (L- selectin)、肿瘤坏死因子 α(TNF- α)呈较强表达 ,而在治疗组大鼠仅呈弱表达 ,对照组大鼠食管表达为阴性。结论 铝碳酸镁通过与胆酸结合 ,改善局部粘膜血流状态及调节胃内 p

肝炎平抗大鼠肝纤维化酶组织化学的实验研究

目的 进一步研究肝炎平在肝纤维化中的保护作用。方法 动物随机分为 5组 :正常组 (n =8) ,依肝炎平作用时间不同分设A、B、C组 (均n =15 ) ,D组为模型组 (n =15 )。肝炎平灌胃 1ml/(10 0g·次 ) ,1次 /d。模型组皮下注射CCl40 3ml/10 0 g体重 ,2次 /周 ,共用 9周。 结果 HE染色及电镜观察显示 :模型组肝脏失去正常结构 ,部分假小叶形成 ,而肝炎平组肝细胞脂肪变性和肝纤维化明显减少。模型组总胶原纤维面积 (84 0 2 3± 81 6 5 )μm2 及面积百分数 (7 0 0± 0 90 ) %明显增加 ,肝炎平组 (B组 )胶原纤维面积 (14 8 73± 4 5 89) μm2 及面积百分数(1 16± 0 33) % ,较模型组明显减少。模型组单胺氧化酶 (MAO)、酸性磷酸酶 (ACP)活性明显增加 ,琥珀酸脱氢酶 (SDH)活性明显下降。肝炎平组较模型组MAO、ACP活性明显下降 ,SDH活性明显增加。结论 肝炎平能减少氧自由基的释放 ,提高肝细胞的新陈代谢及免疫机能状态 ,有抗纤维化作用 ,是一种可应用于临床的安全、有效的药物。

应力纤维、纽蛋白和粘着斑激酶对大鼠肝纤维化作用机制的研究

目的 观察应力纤维 (stressfiber)、纽蛋白 (vinculin)和粘着斑激酶 (FAK)在实验性大鼠肝纤维化形成过程中的变化 ,探讨肌动蛋白在肝纤维化形成中的作用机制。方法 雄性SD大鼠 4 0只 ,随机分为模型组 (n =30 )和对照组 (n =10 ) ,模型组给予 6 0 %四氯化碳 (CCl4) 0 1ml/ 10 0g皮下注射 ,分别于造模后 1、 4、 8周取肝组织 ,RT PCR检测vinculin和FAK的mRNA表达 ,免疫组织化学检测vinculin的表达 ,免疫荧光检测束状肌动蛋白 (F actin)的表达 ,并和对照组比较。结果 Vinculin和FAK的mRNA、vinculin的表达较对照组明显增强。免疫荧光显示模型组F actin的表达亦较对照组增强 (P <0 0 1)。结论 肌动蛋白对肝星状细胞 (HSC)激活和肝纤维化形成具有重要的作用。

铝碳酸镁对反流性食管炎食道粘膜保护机制的实验研究

目的 观察铝碳酸镁对急性反流性食道炎的防治作用 ,并探讨其作用机制。方法 采用十二指肠结扎复制反流性食管炎模型 ,光镜下和电镜下观察大鼠食管粘膜组织学表现 ,并计算粘膜损伤指数 ,激光多普勒血流计测定粘膜血流量 ,收集胃内潴留物测定PH值及总胆酸浓度。结果 光镜下模型组大鼠食管粘膜充血水肿 ,表面明显的炎性渗出 ,严重者出现粘膜细胞的变性坏死脱落 ,形成典型的溃疡结构。治疗组大鼠部分食管粘膜下层出现炎性细胞浸润 ,局部表层粘膜上皮脱落形成糜烂灶。电镜下治疗组大鼠血管炎症反应较模型组轻 ,上皮细胞连接与对照组相比尚正常。模型组大鼠粘膜血流量较治疗组明显降低 ,其差异具有显著意义 (P <0 0 5 ) ,模型组大鼠胃潴留液量及PH值、粘膜损伤指数、总胆酸含量均较治疗组升高 ,两组相比差异具有显著意义 (P<0 0 5 )。结论 除十二指肠反流的内容物内胆酸升高外 ,局部粘膜血流量降低、胃潴留液PH值改变亦参与了反流性食管炎的形成。铝碳酸镁通过与胆酸结合 ,改善局部粘膜血流状态及调节胃内PH值而发挥其粘膜保护作用。

非酒精性脂肪肝对免疫检查点抑制剂治疗肝细胞癌疗效的影响及机制研究进展

近年来,非酒精性脂肪肝合并肝细胞癌的患者数量逐渐上升,免疫治疗在晚期肝细胞癌的治疗中扮演着越来越重要的角色。既往研究发现非酒精性脂肪肝可以影响肝细胞癌免疫治疗的疗效,但机制不清,可能与这些因素相关:非酒精性脂肪肝中CD8^(+)PD-1^(+)T细胞增多导致肝脏细胞增殖能力缺陷;锌指蛋白64激活CSF1抑制抗肿瘤免疫;PCSK9下调LDLR水平抑制肿瘤微环境中CD8^(+)T细胞免疫应答;免疫应答的缺失导致肝损伤等。研究发现联合使用仑伐替尼、PKCa抑制剂、PCSK9蛋白的抑制、铁死亡诱导剂、HIF2a小分子抑制剂可以改善非酒精性脂肪肝相关肝细胞癌免疫检查点抑制剂的疗效。本文就非酒精性脂肪肝对肝脏免疫微环境和肝细胞癌免疫检查点抑制剂疗效的影响和机制,以及如何改善非酒精性脂肪肝相关肝细胞癌免疫检查点抑制剂疗效的研究进行综述。

肾上腺素受体和乙酰胆碱受体在血吸虫性肝纤维化肝脏组织中的表达研究

目的研究α1A-肾上腺素受体(α1A-AR)和M1型乙酰胆碱受体(mAChRM1)在日本血吸虫性肝纤维化小鼠肝脏组织中的表达情况,初步探讨神经递质受体在肝纤维化发生机制中的作用。方法清洁级昆明小鼠30只随机分为正常组(N组,10只)、模型组(M组,20只),模型组小鼠用腹部敷贴尾蚴法感染日本血吸虫制备肝纤维化模型。应用免疫组织化学、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹(Western blot)等方法检测肝脏组织中α1A-AR和mAChRM1表达变化。结果模型组肝脏组织中α1A-AR和mAChRM1表达较正常组明显增加,其差异具有显著性统计学意义(P<0.05)。结论神经递质受体表达上调在血吸虫性肝纤维化发生发展中起一定作用。

Omi/HtrA2对人肝癌细胞系凋亡的调控作用研究

目的探讨丝氨酸蛋白激酶Omi/HtrA2在肝癌细胞中在促凋亡基因p53与抑凋亡基因XIAP之间调控机制的研究,并探讨其今后用于靶向治疗的可能性。方法用Western blotting的方法半定量测定4种不同的肝细胞株(L02、HepG2、Hep3B、Huh7)中p53、XIAP、Omi/HtrA2蛋白的表达量,以及使用Omi/HtrA2特异性抑制剂ucf-101后各自的表达量。结果在p53表达不同的细胞株中XIAP蛋白和Omi/HtrA2蛋白的表达也是不同的,p53可上调Omi/HtrA2蛋白表达,下调XIAP蛋白表达。使用ucf-101后,肝癌细胞中XIAP蛋白表达明显上调。结论Omi/HtrA2是p53与XIAP之间凋亡调控作用的信号因子之一,参与细胞凋亡的调控,有可能作为肿瘤细胞凋亡的治疗靶点。

肝炎平对日本血吸虫肝纤维化兔肝脏酶组织化学作用的研究

目的探讨肝炎平对血吸虫肝纤维化家兔酶组织化学的作用。方法将38只成年健康大耳白兔分为正常对照组(N)、模型组(M)及肝炎平治疗组(E)。M和E组采用腹贴法(日本血吸虫尾蚴180条/只,持续15分钟)感染血吸虫,六周后服用吡喹酮行杀虫治疗。此后,E组予以肝炎平治疗。于实验的第13周将全部动物麻醉后剖腹取肝组织。酶组织化学方法检测单胺氧化酶(MAO)、一氧化氮合酶(NOS)、琥珀酸脱氢酶(SDH)、乳酸脱氢酶(LDH)在肝组织的表达活性。结果肝炎平组中MAO为0.1966±0.04536,NOS为0.1166±0.01895,LDH为0.1355±0.04964,而模型组的MAO为0.5627±0.04849,NOS为0.1422±0.02520,LDH为0.5027±0.07783,与模型组相比,有显著性差异(P<0.05),肝炎平组的SDH吸光度为0.4197±0.10442,而模型组SDH的吸光度为0.2688±0.09435,与模型组相比有显著性差异(P<0.05)。结论肝炎平能减少肝组织中的单胺氧化酶、一氧化氮合酶、乳酸脱氢酶的活性,提高琥珀酸脱氢酶的活性。提示肝炎平具有抗血吸虫肝纤维化的作用。

核酸营养的抗衰老作用研究进展

食物核苷酸是一种条件型必需营养素,它的吸收和代谢对许多类型的细胞有着重要的意义,在某些情况下摄入核酸对生长发育、免疫系统的形成和正常功能维持等是有必要的,它能通过抗氧化、减少DNA损伤,促进细胞的更新代谢,影响内分泌-免疫网络,减轻与老化有关的脑形态病理变化与记忆的损伤等机制延缓衰老。核酸是抗衰老的重要物质之一,随增龄而愈重要,加强核酸营养对抗衰老有着重要的作用。

肝细胞癌组织XAF1表达及其临床意义的研究

目的:探讨XAF1在原发性肝细胞癌发生中的作用。方法:应用RT-PCR技术检测人胎肝细胞株LO2、人肝癌细胞株SMMC7721、HepG2和30例肝癌及其相应癌旁组织XAF1mRNA的水平,同时应用免疫组织化学方法及蛋白质印迹检测上述细胞株及组织中XAF1蛋白的表达。结果:人胎肝细胞株LO2检测到XAF1mR-NA和蛋白的表达,人肝癌细胞株SMMC7721、HepG2XAF1mRNA和蛋白的表达低。肝癌组织XAF1mRNA和蛋白表达较癌旁组织显著降低(mRNA:0.587±0.064,1.013±0.159,t=2.392,P=0.000;蛋白:43179±11412,95541±30153,t=3.532,P=0.000)。免疫组化染色显示,XAF1蛋白表达集中在肝细胞胞质和胞核中,表达下调的XAF1蛋白与原发性肝细胞癌患者病理分期有显著相关性。结论:XAF1mRNA及蛋白在肝癌组织及肝癌细胞系中表达水平降低,提示可能是促进肝细胞癌发生的一个重要因素。

肝泰对肝纤维化大鼠肝组织中神经递质受体作用的研究

目的研究肝泰对CCl4诱导的肝纤维化大鼠肝组织中神经递质受体的作用,探讨其抗肝纤维化的作用机制。方法将40只Wistar大鼠分为4组:正常对照组(N)10只、肝复乐胶囊对照组(G)10只、肝泰组(Z)10只及模型组(M)10只。采用光镜及电镜观察肝组织病理学改变;应用免疫组织化学法、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和West-ern-blot方法检测各组肝组织α1肾上腺素能受体(α1A-AR)、β2肾上腺素能受体(β2-AR)的表达。结果肝泰组、肝复乐胶囊对照组病理改变较模型组明显改善;免疫组织化学、RT-PCR、Western blot三种不同层次水平的研究结果均表明:肝泰组和肝复乐胶囊对照组α1A-AR及β2-AR的表达较模型组显著降低(P<0.05)。结论肝泰能通过抑制肝组织中α1A-AR及β2-AR的表达,从而调节神经递质在肝纤维化中的作用。

肝泰对高脂饮食诱导的大鼠脂肪肝保护作用的研究

目的探讨肝泰对实验性脂肪肝的保护作用及其可能机制。方法SD雄性大鼠53只,随机分为4组,即模型组(n=15)、肝泰组(n=15)、易善复对照组(n=15)?正常对照组(n=8)。利用高脂饮食建立大鼠脂肪肝模型,肝泰组给予肝泰(755mg/kg)干预,易善复对照组给予易善复(550mg/kg)干预,10周后处死所有大鼠。采用光镜及电镜观察肝脏组织学改变,检测大鼠血清总胆固醇(TC)?甘油三酯(TG)?高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-C)、肝组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)及免疫组化法检测肿瘤坏死因子(TNF-α)在肝组织中表达。结果病理所见:模型组出现重度水变性和脂肪变性及点、灶状坏死;肝泰组未见重度水变性和脂肪变性,可见极少数点状坏死。肝泰组肝组织TNF-α与模型组肝组织TNF-α比较,肝泰组TNF-α蛋白含量显著减少(P<0.05)。肝泰组血浆TC和肝匀浆GSH与模型组比较,肝泰组血浆TC较模型组显著减低,肝泰组GSH比模型组显著升高,均有显著性差异(P<0.05)。结论肝泰对实验大鼠脂肪肝有保护作用。

流式细胞术动态检测肝大部切除后再生相关因子的实验研究

为探讨肝细胞生长因子 (HGF)、转化生长因子 - α(TGF- α)、转化生长因子 - β(TGF- β)在肝再生中的作用及机制。应用流式细胞术 (FCM)动态检测再生肝组织 S期肝细胞百分含量及 HGF、TGF- α、TGF- β的变化。结果表明 :HGF、TGF- α浓度在肝大部分切除 6 h后达高峰 ,而 TGF- β2 4h后缓慢上升。提示 HGF、TGF- α、TGF- β分别通过不同的机制影响肝再生 ,HGF、 TGF- α为正性调节因子 ,TGF-

左旋硝基精氨酸甲基酯对大鼠食管静脉曲张影响的酶组化研究

目的：探讨一氧化氮（ＮＯ）在食管静脉曲张发生机制中的作用，初步观察使用一氧化氮合酶（ＮＯＳ）抑制剂治疗食管静脉曲张的可能性。方法：采用ＮＡＤＰＨ－ｄ黄递酶组化染色与图像分析方法，观察ＮＯＳ抑制剂左旋硝基精氨酸甲基酯（Ｌ－ＮＡＭＥ）灌胃给药对食管静脉曲张大鼠食管壁组织学改变及ＮＯＳ表达平均光密度值的影响。结果：模型组食管、粘膜下静脉壁及食管浆膜外静脉壁粘膜上皮ＮＯＳ表达较假手术组增多，给予Ｌ－ＮＡＭＥ后，食管壁ＮＯＳ表达显著下调（Ｐ＜０．０１），Ｌ－ＮＡＭＥ组１０只大鼠中７只食管浆膜外静脉和粘膜下静脉迂曲扩张情况较模型组减轻。结论：大鼠食管静脉曲张的发病机制中有ＮＯ的参与；Ｌ－ＮＡＭＥ对大鼠食管静脉曲张具有一定保护作用。

APOBEC3G体外抗乙型肝炎病毒的研究

目的探讨载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白3G(apolipoprotein B mRNA editing enzyme catalytic polypeptide like3G,APOBEC3G)(也称为CEM15)体外抗乙型肝炎病毒(HBV)的作用及其机制。方法脂质体转染pcDNA3.1 Human APOBEC3G-Myc-6Xhis、pcDAN3.1/His-C进入HepG2.2.15细胞,转染后,RT-PCR证实转染基因的表达,Western Blot证实蛋白的表达。通过ELISA方法检测细胞上清液中乙型肝炎表面抗原(HBsAg)及乙型肝炎e抗原(HBeAg),RT-PCR分析APOBEC3G对HBV mRNA转录的影响。结果APOBEC3G基因与蛋白在HepG2.2.15细胞都有表达,与空质粒转染组相比,pcDNA3.1 Human APOBEC3G-Myc-6Xhis转染组HBsAg含量下降70.38%,HBeAg含量下降62.88%,未转质粒细胞为空白对照组。结论APOBEC3G在体外可以抑制HBV复制,可以作为一种新型的抗病毒制剂治疗乙肝病毒感染。

肝泰胶囊对大鼠酒精性肝病的防治作用

目的:探讨肝泰胶囊对大鼠酒精性肝病(ALD)的防治作用及其可能的机制。方法:将40只SD雄性大鼠随机分为正常组10只,采用普通饲料喂养;模型组18只,高脂饲料喂养,同时灌喂酒精性混合液;预防组12只,高脂饲料喂养,同时给予肝泰胶囊和酒精混合液。实验时间为4个月。采用光镜、电镜观察大鼠肝组织病理学改变;M asson染色观察各组大鼠肝纤维化程度;采用放射免疫法测定血清透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ-)、Ⅳ型胶原(Ⅳ)的含量;用半自动生化仪检测丙氨酸转氨酶(ALT)、天门冬氨酸转氨酶(AST);分光光度仪检测丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、还原型谷胱甘肽(GSH)、γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT);免疫组化检测α-平滑肌蛋白(α-SMA)抗体的表达。结果:预防组与模型组比:①预防组大鼠肝组织肝纤维化程度明显改善;②肝组织胶原纤维面积明显减少;③血清透明质酸显著降低;④肝功能损伤明显减轻。结论:肝泰胶囊能显著改善酒精性肝病大鼠的肝损伤,提示该药对酒精性肝病有一定的防治作用。

川芎嗪治疗大鼠食管静脉曲张的实验研究

目的：本文旨在探讨川芎嗪（etramethylpyrazine,TMP)对大鼠实验性食管静脉曲张的影响及作用机制。方法：采取门静脉部分结扎联合左侧肾上腺静脉断流术复制大鼠食管静脉曲张模型，观察川芎嗪对门静脉压力（Ppv)、组织学改变的影响，并通过黄递酶组织染色法初步探讨川芎嗪治疗食管静脉曲张的机制。结果：食管静脉曲张大鼠的门脉压升高，粘下静脉（submucoal veins,SMV)及食管浆膜周静脉（Paraesophageal veins,PEV)迂曲、增多、扩张，覆盖粘膜变薄；食管静脉曲张大鼠粘膜下静脉壁、覆盖粘膜、食管浆膜周静脉壁一氧化氮合酶（nitric oxide synthase,NOS)表达增强；川芎嗪能有效改善上述指标。结论：川芎嗪对食管静脉曲张有保护作用；其保护作用可能涉及一氧化氮机制。