微小RNA-196a-1在胃癌组织的表达及其临床意义

目的探讨微小RNA（miRNA，miR）-196a-1在胃癌组织中的表达及其临床意义。方法采用反转录．聚合酶链反应（RT-PCR）检测miR-196a-1在胃癌组织和胃癌细胞株中的表达水平，并分析其与临床病理特征关系。结果RT-PCR结果显示，miR-196a-1在胃癌组织标本的表达量较对照组增加4倍，差异有统计学意义（P〈0．05）；相对于正常胃黏膜上皮细胞株GES-1，胃癌细胞株SGC-7901、AGS、MKN28中的miR-196a-1均高表达，相对表达量分别为：SGC-7901：4．24±0．15（P〈0．05），MKN28：3．17±0．11（P〈0．05），AGS：3．32±0．07（P〈0．05）。胃癌组织miR-196a-1的高表达与患者的肿瘤TNM分期（P〈0．05）、淋巴结转移（P〈0．05）、组织分化程度（P〈0．05）有关，与患者的年龄、性别无关（P〉0．05）。结论miR-196a-1在胃癌组织和胃癌细胞中表达均上调，与胃癌的发生发展明显相关。

微小RNA-362-5p通过靶向调控CYLD对胃癌细胞株SGC-7901生物学行为的影响

目的探讨微小RNA（miRNA，miR）-362-5p对人胃癌细胞株SGC-7901增殖、凋亡的影响及其调控机制。方法通过实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）检测人胃癌细胞株和正常胃黏膜细胞中miR-362-5p的表达；采用脂质体瞬时转染技术转染miR-362-5p抑制物；噻唑蓝（MTT）法检测miR-3626p对胃癌细胞株SGC-7901增殖能力的影响；流式细胞术检测miR-3626p对胃癌细胞周期和凋亡的影响；利用Targetscan信息学预测软件预测miR-362-5p靶向调控Cylindrom．atosis（CYLD）基因，构建携带CYLD野生型及突变型3’非翻译区（3’UTR）野生型和突变型荧光素酶报告载体，并利用双荧光素酶活性分析检测；Westernblot检测miR-362-5p对CYLD蛋白表达的调控作用。结果miR-3626p在胃癌细胞株SGC-7901、AGS、MKN28的表达水平分别为6．274-0．70、4．63±0．35、5．53±0．45，明显高于胃黏膜细胞（P=0．006、0．003、0．003）。转染miR-362-5p抑制物后，胃癌细胞SGC-7901中miR-362-5p表达水平下降[miR-362-5p-IN组（0．41±0．07），miR-362-5pNC组（0．84±0．07），P=0．022]。下调miR-362-5p后显著抑制胃癌细胞SGC-7901的增殖[48h（吸光度值）：miR-362-5p-IN组：0．28±0．02，miR-3626pNC组：0．45±0．04，P=0．028；72h（吸光度值）：miR-362-5p-IN组：0．33±0．02，miR-362-5pNC组：0．61±0．04，P=0．003]；下调miR-362-5p后流式细胞术结果显示胃癌细胞G1／G0期比例增加[miR-362-5p-IN组：（78．04±3．74）％，miR-362-5pNC组：（67．86±3．35）％，P=0．017]，凋亡增加[miR-362-5p-IN组：（33．29±4．86）％，miR-3626pNC组：（18．20±0．80）％，P=0．040]。双荧光素酶报告基因实验验证CYLD是miR-362-5p的潜在靶基因。Westernblot法检测结果显示CYLD蛋白水平与miR-362-5p表达呈负相关。结论miR-362-5p可通过靶向负调控CYLD蛋白，促进胃癌细胞的增殖，抑制细胞凋亡，进而促进胃癌的发生发展。