青蒿素对乳腺癌MT40细胞的生长抑制作用及CD71表达的影响和后遗效应!

目的探讨不同浓度的青蒿素对乳腺癌MT40细胞的生长抑制作用和CD71表达的影响及后遗效应。方法将处于对数生长期的MT40细胞分为20、40、60、80μmol/L青蒿素实验组及不加任何药物的阴性对照组、10μmol/L丝裂霉素的阳性对照组,采用流式细胞仪检测各组MT40细胞凋亡及细胞周期变化及CD71的表达,绘制各实验组后遗细胞生长曲线,计算细胞倍增时间,实验重复3次。结果 20、40、60、80μmol/L青蒿素实验组细胞凋亡率分别为(6.81±1.28)%、(10.55±3.49)%、(17.12±3.73)%、(19.50±3.70)%,阴性对照组为(1.15±0.21)%,阳性对照组为(2.45±0.53)%,青蒿素明显提高MT40细胞凋亡率(均P<0.05)。不同浓度青蒿素作用于MT40细胞后,G0/G1期细胞增加,G2/M及S期细胞减少(均P<0.05)。20、40、60、80μmol/L青蒿素实验组细胞CD71表达率分别为(57.42±3.45)%、(50.38±3.22)%、(47.23±2.35)%、(43.27±2.86)%,阴性对照组为(62.90±2.41)%,阳性对照组为(60.13±2.89)%,青蒿素抑制了MT40细胞CD71的表达(均P<0.05)。20、40、60、80μmol/L青蒿素实验组后遗细胞生长曲线峰值后移(F=11.86,P<0.01)。各组后遗细胞倍增时间,阴性对照组和阳性对照组均为0.59d,20、40、60、80μmol/L青蒿素组分别为0.61、0.65、0.71、0.78d。结论青蒿素对乳腺癌MT40细胞具有诱导细胞凋亡,阻滞细胞于G0/G1期,下调细胞CD71表达的作用,并具有使MT40细胞倍增时间延长的后遗效应。

IL-12重组质粒联合骨髓间充质干细胞对MCF-7人乳腺癌细胞侵袭及裸鼠移植瘤生长的影响分析

目的探讨IL-12重组质粒联合骨髓间充质干细胞(BMSC)对MCF-7人乳腺癌细胞侵袭及裸鼠移植瘤生长的影响。方法分离纯化培养BMSC原代细胞,制备BMSC条件培养基,分析BMSC条件培养基对MCF-7细胞株体外增殖和凋亡的影响;建立裸鼠MCF-7转移瘤模型,分为对照组、BMSC组、IL-12组以及联合组,各组每3 d进行一次瘤内注射,共注射3次,15 d后处死裸鼠,比较各组裸鼠肿瘤、脾脏重量。采用c^2检验、t检验以及方差分析进行统计学分析。结果 BMSC条件培养基能够抑制MCF-7细胞增殖,且随着作用时间的延长其抑制作用升高[24 h(13.42±1.93)﹪,48 h(16.83±1.77)﹪,72 h(20.21±2.01),F=6.271, P=0.000]。BMSC条件培养基处理MCF-7细胞,可有效促进MCF-7细胞凋亡,且随着作用时间的延长细胞凋亡率升高[24 h(10.82±2.18)﹪,48 h(18.73±2.95)﹪,72 h(28.15±3.52)﹪,F=9.215,P=0.000]。与对照组裸鼠肿瘤体积[1 d(124.12±9.28)mm^3,3 d(582.41±17.28) mm^3, 7 d(983.42±42.10) mm^3,15 d(793.46±109.38) mm^3]比较,BMSC组[1 d(132.61±12.41) mm^3,3d(378.46±23.08) mm^3,7 d(542.61±58.49)mm^3,15 d(329.48±47.51) mm^3]、IL-12组[1 d(119.85±13.10) mm^3,3 d(322.75±26.49) mm^3,7 d(518.37±67.54)mm^3,15 d(302.17±68.53) mm^3]以及联合组[1 d(123.41±8.94)mm^3,3 d(217.85±24.03)mm^3,7 d(318.29±47.32) mm^3,15 d(189.27±37.58)mm^3]裸鼠肿瘤体积生长速度均减慢,差异具有统计学意义(F_(1d)=0.827,F_(3d)=37.583、F_(7d)=31.472、F_(15d)=15.372,P <0.001);处死各组裸鼠后裸鼠肿瘤质量比较,BMSC组[(529.42±98.74) mg]、IL-12组[(544.01±117.85)mg]以及联合组[(327.55±78.56) mg]均低于对照组[(877.42±120.11)mg],且联合组裸鼠肿瘤质量最低,差异具有统计学意义(F=10.821,P <0.001);而裸鼠脾指数BMSC组(7.58±1.21)、IL-12组(7.63±1.09)以及联合组(10.03±1.52)均高于对照组(5.37±0.89),联合组裸鼠脾质量最高,差异具有统计学意义(F=13.411,P <0.001)。结论 BMSC在体内外均具有抑制MCF-7肿瘤增殖作用,联合使用pc DNA6/IL-12对裸鼠MCF-7转移瘤抑制具有着明显的协同作用。

XRCC 1基因在乳腺癌中表达的临床意义及其细胞与分子机制

目的:探讨乳腺癌中X线修复交叉互补蛋白1(X-ray repair cross complementing 1,XRCC1)的表达及其与临床病理特征的关系,同时分析XRCC1基因过表达对人乳腺癌MB-231细胞增殖和迁移的影响及其分子机制。方法 :采用实时荧光定量PCR法检测XRCC1 mRNA在人乳腺癌细胞系和组织中的表达水平。免疫组织化学法检测XRCC1蛋白在人乳腺癌组织中的表达情况,并统计分析乳腺癌组织中XRCC1表达与患者临床病理特征的关系。转染pcDNA3.1(+)-Flag-XRCC1重组质粒使乳腺癌MB-231细胞中XRCC1的表达上调,然后采用CCK-8法和软琼脂平板克隆形成实验检测细胞增殖活性的变化,FCM法检测细胞周期和凋亡的变化,Transwell小室法检测细胞侵袭和迁移能力的变化,蛋白质印迹法检测XRCC1过表达对细胞周期、凋亡和迁移相关蛋白表达的影响。结果 :与正常乳腺上皮细胞相比,XRCC1 mRNA在大多数乳腺癌细胞系中表达水平明显下调(P值均<0.001)。与正常乳腺上皮和配对癌旁组织相比,XRCC1 mRNA和蛋白在人乳腺癌组织中均表达下调(P值均<0.001);同时XRCC1 mRNA的表达水平与乳腺癌患者预后呈正相关性(γ2=0.052,P=0.046),而XRCC1蛋白表达与肿瘤直径、淋巴结转移、组织学分级及TNM分期具有相关性(P值均<0.05)。过表达XRCC1基因后,乳腺癌MB-231细胞的增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力均受到明显抑制(P值均<0.01),而且细胞周期被明显阻滞于G1期(P <0.001),细胞凋亡率则明显升高(P <0.001)。XRCC1过表达能促进细胞周期相关蛋白p21、p27、Bax和剪切型caspase 3,以及迁移相关蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达,同时明显下调细胞周期蛋白依赖性激酶4/6(cyclin-dependent kinase 4/6,CDK4/6)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、Bcl-2、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(vimentin)的表达(P值均<0.001)。结论 :XRCC1在乳腺癌细胞系和组织中表达下调,其表达水平与乳腺癌患者预后呈正相关性。恢复XRCC1基因表达能抑制细胞生长、迁移和侵袭,并诱导细胞凋亡。因此,XRCC1可能作为一个潜在的抑癌基因,参与乳腺癌的发生与发展进程。

COL4A1在肝癌中的表达及其对肝癌细胞迁移、侵袭能力的影响

目的探讨血清Ⅳ型胶原蛋白基因α1(COL4A1)在肝癌组织中的表达,分析敲低COL4A1表达对肝癌细胞迁移及侵袭能力的影响。方法采用Western blot法检测COL4A1在68例肝癌及配对癌旁组织的表达水平;运用siRNA技术敲低肝癌细胞COL4A1表达,采用CCK-8试验检测其对肝癌细胞增殖能力的影响,采用Transwell试验检测其对肝癌细胞迁移和侵袭能力的影响。结果生物信息学分析提示COL4A1mRNA在肝癌中高表达(P<0.01);COL4A1在肝癌组织表达水平明显高于癌旁组织(P<0.05),敲低COL4A1表达明显降低肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力(P<0.05)。结论 COL4A1在肝癌组织中高表达,并促进肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭。