miR-26a在血管钙化中的作用机制

目的探讨血管钙化过程中miR-26a表达差异及其作用机制。方法通过体内和体外实验构建血管钙化模型,利用分子生物学、病理生物学及细胞生物学检测方法,验证血管钙化过程中miR-26a表达差异及可能作用机制。结果与模型组和mimic NC组相比较,miR-26a mimic组碱性磷酸酶活性显著降低(P<0.05)。而inhibitor NC组和miR-26a inhibitor组碱性磷酸酶无显著变化(P>0.05)。与mimic NC组比较,miR-26a mimic组miR-26a、骨保护素(OPG)表达水平显著升高(P<0.05),而骨桥蛋白(OPN)、骨形态发生蛋白(BMP)-2和胶原蛋白(Collagen)Ⅱ表达水平显著降低(P<0.05)。与inhibitor NC组比较,miR-26a inhibitor组miR-26a、OPG、OPN、BMP-2和CollagenⅡ表达水平无显著差异(P>0.05)。结论miR-26a在血管钙化中的作用机制可能与OPG/核因子κB受体激活剂(RANK)/细胞核因子κB受体活化因子配体(RANKL)信号通路有关。

MiRNA-26a通过调控结缔组织生长因子缓解血管平滑肌细胞的钙化

目的探究miRNA-26a调控结缔组织生长因子对血管平滑肌细胞钙化的作用。方法将细胞分为对照组、模型组、模型+AR234960组、AR234960+miR-26a mimic组和miR-26a mimic组。对照组细胞正常培养基培养,模型组VSMC细胞诱导钙化,模型+AR234960组的VSMC细胞诱导钙化后加入AR234960激动剂干预,AR234960+miR-26a mimic组的VSMC细胞诱导钙化后用AR234960激动剂和miR-26a mimic处理,miR-26a mimic组的VSMC细胞诱导钙化后转染miR-26a mimic。茜素红染色测定各组细胞钙化沉积;试剂盒检测各组细胞碱性磷酸酶(ALP)活性;荧光定量PCR和Westernblot检测各组细胞miR-26a、OPG、OPN、BMP-2、Collagen II基因和蛋白表达情况。双荧光素酶基因验证miR-26a与CTGF的结合。结果平滑肌A7r5细胞钙化后,miR-26a的表达随着钙化时间的增加而降低(P<0.05),而CTGF的表达随钙化时间的增加而增加(P<0.05)。茜素红染色结果显示,AR234960能够增加细胞的钙化程度,而miR-26a mimic能够减轻细胞钙化。与对照组相比,模型组ALP活性、OPN、BMP-2、Collagen IImRNA和蛋白的表达显著升高(P<0.05),OPG mRNA和蛋白的表达显著降低(P<0.05);与模型组相比,模型+AR234960组上述指标均无显著差异(P>0.05),而miR-26a mimic组ALP活性、OPN、BMP-2、Collagen IImRNA和蛋白的表达显著降低(P<0.05),OPG mRNA和蛋白的表达显著升高(P<0.05);与miR-26a mimic组相比,AR234960+miR-26a mimic组ALP活性、OPN、BMP-2、Collagen IImRNA和蛋白的表达显著升高(P<0.05),OPG mRNA和蛋白的表达显著降低(P<0.05)。双荧光素酶基因检测结果显示,miR-26a-inhibitor组CTGF 3'-UTR野生型中相对荧光素酶活性较miR-26a-mimic组显著升高(P<0.05)。结论miRNA-26a能够有效降低细胞中ALP活性及OPN、BMP-2、Collagen II的表达,同时增加钙化细胞中OPG水平,为miRNA-26a通过调控CTGF水平进而对缓解血管平滑肌细胞钙化提供了理论依据。

CTGF通过调控OPG/RANK/RANKL信号通路在血管钙化中的作用

目的探究结缔组织生长因子(CTGF)在主动脉血管钙化过程中的作用和机制。方法体外培养大鼠胸大动脉平滑肌细胞(A7r5)进行血管钙化模型构建,通过茜素红染色结果确定最佳钙化时间。细胞转染CTGF-siRNA质粒,采用RT-PCR和Western blot检测细胞中CTGF的表达量。为确定CTGF对细胞钙化的作用,将细胞随机分为7组。采用茜素红染色观察CTGF对A7r5细胞钙化的影响,采用ELISA法检测A7r5细胞中碱性磷酸酶(ALP)的活性变化,采用RT-PCR测定A7r5细胞中OPG、RANK和RANKL的表达情况。结果A7r5的最佳钙化时间为48 h。与对照组相比,CTGF-siRNA组细胞中CTGF的表达量降低,说明细胞成功转染CTGF-siRNA质粒。与模型组比较,CTGF-siRNA组A7r5细胞中的钙化结节表达量减少,ALP的活性降低(P<0.05),OPG、RANK和RANKL的表达也下调(P<0.05)。结论沉默CTGF能够减少高磷高钙所诱导的A7r5细胞钙化和降低ALP的活性,调控OPG/RANK/RANKL信号通路,从而在主动脉血管钙化中的发挥作用。

单术者制作大鼠腹腔异位心脏移植模型操作技巧

目的探讨单术者建立大鼠腹腔异位心脏移植模型的制作流程及注意事项,为初学者提供详细的操作经验。方法选用雄性供体(Wistar)、受体(SD)大鼠68对,术前供、受体同时麻醉,受体备8/0线行腹主动脉、下腔静脉血管阻断,阻断背侧分支血管。供体左、右上腔静脉分别与肺门环扎,断升主动脉后灌注停跳液,游离肺动脉,穿横窦断肺动脉,冲洗心房,分离供体心脏。受体腹腔血管适当切口,6点与12点处褥式缝合,动脉连续缝合,静脉单针缝合,排气,再灌注。记录操作时间,行HE染色、检测CD_3、IL-1β及外周血CD_4^+T、CD_8^+T细胞。结果单术者行68例手术,手术时间(58.8±4.5)min,动、静脉吻合时间分别为(7.6±2.2)min和(13.5±4.2)min,供心总缺血时间(31.8±4.5)min,成功率为88.2%,术后第3、5天排斥反应较重,心肌组织间CD_3、IL-1β高表达,术后第1天起外周血CD_4^+T、CD_8^+T细胞逐渐增多。结论通过充分准备与熟练操作,单术者可实施成功率稳定的大鼠腹腔异位心脏移植模型。

参附注射液对心肌缺血再灌注损伤模型大鼠的保护作用

目的探讨参附注射液(SFI)对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)模型大鼠的保护作用。方法 60只健康SD大鼠随机均分为假手术组,缺血再灌注模型组以及SFI处理低、中、高剂量组(分别5、10、20 ml/kg)。建立大鼠MIRI模型,记录心电图中T波及S-T段电压变化,测定各组肌酸激酶(CK)、CK同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)和基质金属蛋白酶(MMP)-9的活性和肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6的浓度,并观察心肌组织病理学改变,分析SFI对MIRI的保护作用。结果与假手术组比较,模型组心电图中的ST段和T波均出现了不同程度的偏移,且心室脏器系数、心肌梗死区重量以及梗死百分比增大(P<0.05);SFI处理后,心电图中的ST段和T波偏移较小,心室脏器系数、心肌梗死区的重量和百分比明显降低,且高剂量组改善最明显(P<0.05)。与假手术组相比,模型组大鼠心肌酶谱CK-MB、CK、LDH、MMP-9活性及TNF-α、IL-6浓度明显升高(P<0.05),与模型组相比,给药后SFI处理组以上指标均明显下降,且随着剂量增加下降越明显(P<0.05)。结论 SFI对大鼠MIRI有明显的保护作用,可能与改善CK-MB、CK、LDH、MMP-9活性及TNF-α、IL-6浓度有关,且使用高剂量的SFI对大鼠MIRI保护作用更显著。

Hybrid手术在复杂Stanford B型夹层中的临床应用

目的探讨Hybrid手术治疗累及主动脉弓部分支血管的Stanford B型主动脉夹层的临床效果及并发症。方法回顾分析2014年1月—2016年1月武汉市中心医院收治87例行Hybrid手术治疗复杂Stanford B型主动脉夹层的患者,观察其术后疗效及并发症发生情况。累及Z0区9例,行头臂干(brachiocephalic trunk,BCT)-左颈总动脉(left common carotid artery,LCCA)+BCT-左锁骨下动脉(left subclavian artery,LSA)+胸主动脉腔内修复术(thoracic endovascular aortic repair,TEVAR)术;累及Z1区23例,行BCT-LCCA-LSA+TEVAR术;累及Z2、3区55例,行LCCA-LSA+TEVAR术;颈部血管旁路选用8 mm Gore-Tex人工血管,TEVAR选用美敦力或先健覆膜血管支架。结果无病例死亡,术后即刻造影无病例内漏,61例术毕苏醒拔管,26例术后次日顺利脱机拔管;术后出现肾衰3例,脑梗1例;随访6～48个月,出现内漏1例,无截瘫发生,恢复良好。结论Hybrid手术治疗复杂Stanford B型主动脉夹层患者,具有微创、安全、有效的临床疗效,具有低风险、低并发症发生率的策略优势;根据患者的夹层解剖学范围以及患者的综合条件,选择个性化的Hybrid手术策略是手术成功的关键。

基质金属蛋白酶2的G等位基因表达与心脏瓣膜置换术后并发症发生的相关性研究

目的探讨基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的G等位基因与心脏瓣膜置换术后并发症的相关性.方法选取武汉中心医院行心脏瓣膜置换术患者187例,术后均口服华法林行抗凝治疗,观察随访患者并发症发生,同时采用基因测序方法检测MMP-2基因型.结果随访期间,并发症发生率为28.88%;有并发症患者MMP-2基因GG+GC基因型比例为62.96%,明显高于无并发症患者(P<0.05);GG+GC基因型患者国际标准化比值(INR)值为(2.87±0.45),明显高于CC基因型患者(P<0.05);有并发症患者年龄和INR值分别为(57.01±6.79)岁和(2.70±0.65)岁,明显高于无并发症患者(P<0.05);Logistic回归分析结果显示:INR值、年龄、MMP-2基因GG+GC型是心脏瓣膜置换术后并发症的危险因素(OR=3.751、3.013和2.440,P<0.05).结论MMP-2的G等位基因是心脏瓣膜置换术后并发症发生的危险因素.

78例累及主动脉弓的主动脉疾病患者弓部处理方式及早期随访结果

目的:总结累及主动脉弓的主动脉疾病的手术方法及早期治疗效果。方法:对78例累及主动脉弓的主动脉疾病患者采用多种手术方式,观察其围手术期病死率、严重并发症发生率等指标,并随访6个月,观察其内漏发生概率和假腔内血栓化程度等指标。结果:全组患者围手术期共有7例死亡,均为急性Stanford A型主动脉夹层,其中6例是全弓置换手术。18例患者术后出现各种类型神经系统并发症。35例患者术后出现肌酐水平升高,9例患者术后出现少尿或者无尿,需要进行床边血液透析滤过。22例患者术后出现急性呼吸窘迫综合征(ARDS)。6例患者术后出现应激性溃疡并消化道出血。术后6个月复查时,主动脉夹层植入支架的56例患者,除2例术后出现内漏以外,其余患者支架段主动脉假腔内均形成血栓,其中48例整个胸降主动脉均血栓化。全部存活的主动脉夹层患者中,有49例夹层累及腹主动脉及其远端,6个月复查时仅有9例患者远端血管假腔完全血栓化并趋向闭合,其余40例均存在远端真假腔共存的情况。结论:针对主动脉弓部病变的患者,目前有多种手术方式可供选择,而每种手术方式各有优势与不足。临床上应该根据患者的病变类型、身体状况和经济条件等综合考虑,选择合适的治疗方案。

主动脉腔内修复中左锁骨下动脉处理方式及近期随访结果

目的探讨主动脉腔内修复术中,左锁骨下动脉的处理方式及近期随访的结果。方法 2014年6月至2016年12月,对65例行主动脉腔内修复需要扩大近端锚定区的患者进行了部分覆盖左锁骨下动脉(部分覆盖组,15例)、支架开窗(开窗组,18例)和左锁骨下动脉转流(转流组,32例)3种处理方式。观察术后内漏的发生率,左上肢的血压降低幅度,左上肢缺血症状和神经系统并发症发生率等。结果 65例患者均顺利完成手术,围术期无患者死亡。转流组术后支架内漏发生率明显低于其他两组(P<0.05)。所有患者术后左上肢血压均下降,但转流组的血压下降的幅度要明显低于其他两组(P<0.05)。没有患者出现左上肢缺血症状;转流组声嘶发生率明显高于其他两组(P<0.05)。结论左锁骨下动脉的3种处理方式均可以达到扩大腔内修复近端锚定区的作用,但转流手术可以为左锁骨下动脉提供更好的前向血流。

杂交手术治疗复杂B型主动脉夹层5年随访结果分析

目的分析杂交手术治疗复杂B型主动脉夹层5年临床效果。方法回顾性分析2014—2017年华中科技大学同济医学院附属武汉中心医院应用杂交手术治疗复杂B型主动脉夹层47例患者的临床资料,其中男42例、女5例,平均年龄(54.9±11.2)岁。21例行左颈总动脉-左锁骨下动脉旁路人工血管转流术(转流组),26例行左锁骨下动脉-左颈总动脉转位术(转位组)。结果所有患者均成功接受杂交手术。两组动脉阻断时间、术中出血量差异无统计学意义(P>0.05)。随访期间全组共12例(25.5%)出现并发症,其中内漏5例(10.6%)、声音嘶哑5例(10.6%)、脑卒中/头晕2例(4.3%),无左上肢乏力、截瘫、夹层逆撕;46例(97.9%)左锁骨下动脉通畅。47例患者5年生存率100.0%。结论杂交手术治疗复杂B型主动脉夹层中远期临床效果满意,重建的左锁骨下动脉5年通畅率高,术后主要并发症为内漏和声音嘶哑。