破骨样细胞中骨保护素和NF-κB配体受体的表达及其意义

目的探讨破骨样细胞中骨保护素(OPG)和NF-κB配体受体(RANKL)表达情况。方法单独培养骨髓单核细胞前体,用巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)和维生素D诱导其转化为破骨样细胞,在0、5、10、15 d用光镜观察和TRAP染色(抗酒石酸染色)评估破骨样细胞的转化程度,用RT-PCR检测OPG和RANKL的表达情况;然后构建主动脉中膜平滑肌细胞(SMC)与骨髓单核细胞前体共培养的模型,用维生素C和β-磷酸甘油诱导SMC转化为成骨样细胞,并在0、5、10、15 d用同样方法再次检测共培养中破骨样细胞转化的情况,以及两种细胞中OPG和RANKL的表达情况。结果不管是单独培养、还是共培养,破骨样细胞中始终没有OPG和RANKL的表达。结论破骨样细胞的转化可能主要受成骨样细胞分泌的OPG和RANKL调控,本身并没有分泌OPG和RANKL进行自身调节的机制存在。

核因子-κB受体的配体在动脉钙化中的作用及其意义

目的探讨核因子（NF-κB）受体的配体（RANKL）很可能具有促破骨样细胞分化的功能，却在很多研究中显示出促钙化作用的原因。方法在破骨样细胞前体的培养液中加入RANKL，用光镜观察和抗酒石酸染色（TRAP染色）检测其是否能促进破骨样细胞的分化；在体内和体外两方面，用同样方法观察在钙化过程中破骨样细胞的表达情况，同时用实时定量PCR（RT—PCR）法检测此过程中伴随的RANKL及其拮抗物骨保护素（OPG）的表达情况。结果单独培养时RANKL对破骨样细胞分化确实有明显的促进作用，然而无论在体内或体外，正常组和钙化早期组中都没有破骨样细胞的表达，此时检测的RANKL／OPG的比值均很低。只有在钙化晚期组中发现有少量的破骨样细胞表达，此时RANKL／0PG的比值较早期明显升高，动物模型中钙化组早晚期RANKL/OPG比值分别为0．36±0．08（F=363，1．68±0．08（F=36），对照组早晚期RANKL／OPG比值均为0（均P〈0．05）；细胞模型中钙化组早晚期RANKL／0PG比值分别为0．42±0．09（F=16），1．50±0．10（F=16），对照组中早晚期RANKL／OPG比值均为0（均P％0．05）。结论钙化过程的大部分阶段，动脉中RANKL／OPG的比值较低，致使RANKL促破骨样细胞分化的功能完全被OPG所抑制，很可能就是造成RANKL具有促破骨样细胞分化的功能却不能表现出抑钙化作用的主要原因。