目的:对比小鼠白蛋白(mouse albumin promoter,ALB)启动子调控下的增强型绿色荧光蛋白(en-hanced green fluorescent protein,EGFP)在不同细胞系中的转录活性。方法:以小鼠全血基因组DNA为模板,聚合酶链反应(polymerase chain reaction,...目的:对比小鼠白蛋白(mouse albumin promoter,ALB)启动子调控下的增强型绿色荧光蛋白(en-hanced green fluorescent protein,EGFP)在不同细胞系中的转录活性。方法:以小鼠全血基因组DNA为模板,聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增ALB启动子序列,克隆至pEGFP-1中,构建重组体pALB-EGFP;在Lipofectamine介导下将pALB-EGFP、pEGFP-N1转染人胎肝细胞L02、人宫颈癌细胞HeLa、人结肠癌细胞SW480、人胰腺癌细胞Bxpc-3;荧光显微镜和流式细胞仪对各转染细胞中EGFP的表达进行检测。结果:pALB-EGFP构建成功;L02转染pALB-EGFP72h后,ALB启动子可起始EGFP的表达,转录活性为人巨细胞病毒(cytomegalovir-us,CMV)启动子的1/4,其它转染细胞的ALB不能起始EGFP的转录;稳定筛选后,ALB的转录活性达到与CMV相当的水平。结论:构建的重组载体在肝脏来源细胞中具有较高的转录活性,为建立肝脏特异性表达目的基因的转基因小鼠模型奠定了基础。展开更多
文摘目的:对比小鼠白蛋白(mouse albumin promoter,ALB)启动子调控下的增强型绿色荧光蛋白(en-hanced green fluorescent protein,EGFP)在不同细胞系中的转录活性。方法:以小鼠全血基因组DNA为模板,聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增ALB启动子序列,克隆至pEGFP-1中,构建重组体pALB-EGFP;在Lipofectamine介导下将pALB-EGFP、pEGFP-N1转染人胎肝细胞L02、人宫颈癌细胞HeLa、人结肠癌细胞SW480、人胰腺癌细胞Bxpc-3;荧光显微镜和流式细胞仪对各转染细胞中EGFP的表达进行检测。结果:pALB-EGFP构建成功;L02转染pALB-EGFP72h后,ALB启动子可起始EGFP的表达,转录活性为人巨细胞病毒(cytomegalovir-us,CMV)启动子的1/4,其它转染细胞的ALB不能起始EGFP的转录;稳定筛选后,ALB的转录活性达到与CMV相当的水平。结论:构建的重组载体在肝脏来源细胞中具有较高的转录活性,为建立肝脏特异性表达目的基因的转基因小鼠模型奠定了基础。
