miR-499通过Drp1介导线粒体自噬保护缺氧/复氧心肌细胞

目的探究miR-499对心肌缺血/再灌注损伤的保护作用,并从线粒体自噬方面探究其可能机制。方法缺血/再灌注(I/R)诱导心肌细胞H9c2(2-1),建立缺氧/复氧(H/R)心肌细胞模型,使用miR-499 mimics和(或)P110处理细胞。将细胞分为BC组、I/R组、I/R+mi组、I/R+NC组、I/R+mi+P110组、I/R+NC+P110组。使用CCK8法检测细胞增殖,流式细胞术检测ROS、线粒体膜电位和细胞凋亡,试剂盒检测MDA、SOD、ATP含量,qRT-PCR和Western blot检测线粒体融合、分裂、自噬相关基因Fis1、Mfn1、Parkin、LC3-Ⅱ、p62和Drp1的mRNA和蛋白表达水平,透射电镜观察线粒体自噬。结果miR-499 mimics和/或P110可使I/R诱导的心肌细胞增殖抑制率和凋亡率下降;线粒体膜电位下降、线粒体自噬减少、ATP含量上升;Fis1、Parkin、LC3-Ⅱ和Drp1的基因和蛋白表达水平下降,Mfn1和p62的基因和蛋白表达水平上升;细胞内ROS和MDA含量减少,SOD含量增加。结论miR-499可通过降低Drp1介导的线粒体自噬减少氧化应激的发生,从而保护I/R诱导的心肌细胞。

miR-499通过抑制calcineurin抑制缺血/再灌注心肌细胞的凋亡

目的 探讨miR-499对钙调磷酸酶(calcineurin,CaN)的调控作用以及在缺血/再灌注(ischemia/repefusion,I/R)损伤心肌细胞中的作用机制。方法 将大鼠心肌细胞H9c2分成6组:对照组、I/R组、I/R+mimics组(转染miR-499 mimics后构建I/R细胞模型)、I/R+NC组(转染miR-NC后构建I/R细胞模型)、I/R+mimics+CsA组(转染miR-499 mimics后加入CaN抑制剂CsA处理,最后构建I/R细胞模型)和I/R+NC+CsA组(转染miR-NC后加入CsA处理,最后构建I/R细胞模型)。CCK-8检测各组细胞增殖能力,Hochest33258染色观察各组细胞形态的变化,TUNEL检测各组细胞凋亡情况,qRT-PCR检测各组细胞中miR-499、CaN和凋亡相关(Bcl-2、Bax、Caspase-3)基因的表达,Western blot检测各组细胞中CaN和凋亡相关(Bcl-2、Bax、Caspase-3)蛋白的表达。结果 与对照组相比,I/R组细胞增殖能力显著降低(P<0.01),细胞致密浓染,呈亮蓝色,凋亡细胞增多,细胞中miR-499、Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平显著降低(P<0.01),CaN、Bax和Caspase-3 mRNA和蛋白水平显著升高(P<0.01);与I/R+NC组相比,I/R+mimics组和I/R+NC+CsA组细胞增殖能力均显著升高(P<0.01),致密浓染的细胞核均有所减少,凋亡细胞减少,细胞中miR-499、Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平显著升高(P<0.05),CaN、Bax和Caspase-3 mRNA和蛋白水平显著降低(P<0.05);与I/R+NC+CsA组相比,I/R+mimics+CsA组上述作用更加显著。结论 miR-499能够抑制CaN的表达,抑制I/R损伤心肌细胞的凋亡,减轻心肌细胞损伤。

破骨样细胞中骨保护素和NF-κB配体受体的表达及其意义

目的探讨破骨样细胞中骨保护素(OPG)和NF-κB配体受体(RANKL)表达情况。方法单独培养骨髓单核细胞前体,用巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)和维生素D诱导其转化为破骨样细胞,在0、5、10、15 d用光镜观察和TRAP染色(抗酒石酸染色)评估破骨样细胞的转化程度,用RT-PCR检测OPG和RANKL的表达情况;然后构建主动脉中膜平滑肌细胞(SMC)与骨髓单核细胞前体共培养的模型,用维生素C和β-磷酸甘油诱导SMC转化为成骨样细胞,并在0、5、10、15 d用同样方法再次检测共培养中破骨样细胞转化的情况,以及两种细胞中OPG和RANKL的表达情况。结果不管是单独培养、还是共培养,破骨样细胞中始终没有OPG和RANKL的表达。结论破骨样细胞的转化可能主要受成骨样细胞分泌的OPG和RANKL调控,本身并没有分泌OPG和RANKL进行自身调节的机制存在。

常见 α肾上腺素受体阻滞剂治疗老年BPH引起体位性低血压及跌倒的风险

目的 对常见的三种α肾上腺素受体阻滞剂坦索罗辛、特拉唑嗪和多沙唑嗪治疗老年良性前列腺增生（BPH）过程中引起体位性低血压及跌倒的风险性进行比较.方法 选取2015年1月~2016年12月我院综合科老年BPH患者,分为坦索罗辛组（124例）,特拉唑嗪组（165例）和多沙唑嗪组（103例）,分别于睡前口服坦索罗辛缓释胶囊0.2 mg,盐酸特拉唑嗪2 mg,和甲磺酸多沙唑嗪缓释片4 mg.随访1~2年,观察治疗后血压的变化、体位性低血压的发生率,以及跌倒的发生率.另选取不愿服用α受体阻滞剂进行治疗的老年BPH患者56名作为对照组.结果 三种α肾上腺素受体阻滞剂均有一定的降血压作用,以特拉唑嗪组最强,坦索罗辛组最弱;三种α肾上腺素受体阻滞剂均有轻度的致体位性低血压和跌倒的风险,特拉唑嗪最强,坦索罗辛最弱.经适当护理教育后,3组体位性低血压和跌倒的发生率均明显降低.结论 常见的治疗BPH的三种α肾上腺素受体阻滞剂中,坦索罗辛引起体位性低血压及跌倒的风险性最低,而特拉唑嗪最高;合理的护理可以明显减低其发生率.

瑞舒伐他汀对动脉中膜钙化的作用及其对OPG/RANKL系统的影响

目的:探讨瑞舒伐他汀对动脉中膜钙化的抑制作用及其机制。方法:首先构建动物钙化模型,分为正常对照组、钙化组、小剂量瑞舒伐他汀组、中剂量瑞舒伐他汀组和大剂量瑞舒伐他汀组。钙化组使用华法林对大鼠灌胃诱导钙化,3个瑞舒伐他汀组在使用华法林灌胃的同时分别再加入5、10和15mg·kg-1·d-1的瑞舒伐他汀;动脉钙化的程度使用Von Kossa染色、钙离子含量、碱性磷酸酶(ALP)活性与骨钙素的WesternBlot检测结果来判断,此过程中骨保护素(OPG)与NF-κB配体的受体(RANKL)的表达用实时定量PCR来检测。结果:加入瑞舒伐他汀后,细胞钙化的程度有所减轻,且随着瑞舒伐他汀浓度的增加,钙化被抑制的程度也越明显,同时细胞中OPG/RANKL的比值上升也越明显。结论:瑞舒伐他汀具有抑制动脉钙化的作用,其机制可能与其提高OPG/RANKL的比值有关。

他汀的抑动脉钙化作用及对骨保护素/NF-κB配体受体的影响

目的:探讨他汀类药物对动脉中膜钙化的抑制作用及其对骨保护素(OPG)/NF-κB配体的受体(RANKL)的影响。方法:构建大鼠的主动脉中膜平滑肌细胞(SMC)的钙化模型,随机分为钙化组、他汀组和对照组。钙化组使用β-磷酸甘油、维生素C对SMC来进行钙化诱导;他汀组在上述基础上加入阿托伐他汀。用Von Kossa染色,钙离子含量测定,碱性磷酸酶(ALP)活性检测,骨钙素的Western Blot检测来判定细胞钙化的程度,用实时定量PCR检测细胞钙化过程中伴随的OPG和RANKL的表达情况。结果:加入他汀类药物后使得细胞钙化的程度得到减轻,同时细胞表达的OPG/RANKL比值也得到明显上升(均P<0.05)。结论:他汀类药物具有抑制动脉钙化的作用,其机制可能与提高OPG/RANKL的比值有关。

阿托伐他汀对动脉中膜钙化及骨保护素/核因子-κB配体的受体的影响

目的 观察他汀类药物对动脉中膜钙化的作用及其对骨保护素（OPG）/核因子（NF）-κB配体的受体（RANKL）系统的影响.方法 分别构建钙化的细胞模型和动物模型,每组均分为钙化组、他汀组和对照组.钙化细胞模型中使用β-磷酸甘油、维生素C对大鼠主动脉中膜平滑肌细胞（SMC）进行诱导钙化,他汀组在加入以上物质的同时再加入阿托伐他汀;钙化动物模型中使用华法令对普通大鼠进行灌胃诱导钙化,他汀组使用华法令的同时再加入阿托伐他汀;用钙离子含量测定,碱性磷酸酶（ALP）活性检测,骨钙素的Western blot检测来判定和动脉和细胞钙化的程度,用实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）检测此过程中OPG、RANKL的表达.结果 加入他汀类药物后,动脉和细胞钙化的程度均有所减轻（钙离子含量、ALP活性、骨钙素在动物组中分别由（1.39±0.04） mg/g、72.46±14.78、1.05±0.05降到了（1.01±0.03） mg/g、48.39±9.27、0.56±0.04;在细胞组中分别由（120.66±7.63） μg/mg protein、98.02±9.56、0.95±0.03降到了（95.57±8.47） μg/mg protein、65.34±8.16、0.65±0.02,P＜0.05）,同时动脉和细胞中OPG/RANKL的比值也明显上升（P＜0.05）.结论 他汀类药物具有抑制动脉钙化的作用,其机制可能与其提高OPG/RANKL的比值有关.

核因子-κB受体的配体在动脉钙化中的作用及其意义

目的探讨核因子（NF-κB）受体的配体（RANKL）很可能具有促破骨样细胞分化的功能，却在很多研究中显示出促钙化作用的原因。方法在破骨样细胞前体的培养液中加入RANKL，用光镜观察和抗酒石酸染色（TRAP染色）检测其是否能促进破骨样细胞的分化；在体内和体外两方面，用同样方法观察在钙化过程中破骨样细胞的表达情况，同时用实时定量PCR（RT—PCR）法检测此过程中伴随的RANKL及其拮抗物骨保护素（OPG）的表达情况。结果单独培养时RANKL对破骨样细胞分化确实有明显的促进作用，然而无论在体内或体外，正常组和钙化早期组中都没有破骨样细胞的表达，此时检测的RANKL／OPG的比值均很低。只有在钙化晚期组中发现有少量的破骨样细胞表达，此时RANKL／0PG的比值较早期明显升高，动物模型中钙化组早晚期RANKL/OPG比值分别为0．36±0．08（F=363，1．68±0．08（F=36），对照组早晚期RANKL／OPG比值均为0（均P〈0．05）；细胞模型中钙化组早晚期RANKL／0PG比值分别为0．42±0．09（F=16），1．50±0．10（F=16），对照组中早晚期RANKL／OPG比值均为0（均P％0．05）。结论钙化过程的大部分阶段，动脉中RANKL／OPG的比值较低，致使RANKL促破骨样细胞分化的功能完全被OPG所抑制，很可能就是造成RANKL具有促破骨样细胞分化的功能却不能表现出抑钙化作用的主要原因。