黄连解毒汤含药血清通过TLR4/NF-κB信号通路抑制脂多糖诱导的BV2小胶质细胞神经炎症反应

目的探讨黄连解毒汤含药血清对神经炎症反应的保护机制。方法利用LPS诱导BV2小胶质细胞活化,建立体外神经炎症模型;以实时荧光定量PCR检测黄连解毒汤含药血清对LPS刺激后BV2小胶质细胞TLR4、MyD88、NF-κB p65和IκBa mRNA表达的影响;蛋白质免疫印迹法检测BV2小胶质细胞TLR4、MyD88、NF-κB p65、p-NF-κB p65、IκBa和p-IκBa蛋白的表达;酶联免疫吸附实验检测炎症因子IL-1β和IL-6的释放情况。结果LPS诱导BV2小胶质细胞过量表达TLR4、MyD88、IκBa和NF-κB p65 mRNA,黄连解毒汤含药血清能有效抑制上述信号分子mRNA的表达;过度活化的BV2小胶质细胞TLR4、MyD88、p-NF-κB p65和IκBa蛋白表达增加,NF-κB p65和p-IκBa蛋白表达降低,黄连解毒汤含药血清的预处理可逆转这一现象;BV2小胶质细胞在LPS诱导下分泌释放炎症因子IL-1β和IL-6的水平显著增加,黄连解毒汤含药血清预处理后上述炎症因子的分泌明显减少。结论黄连解毒汤含药血清可能通过TLR4/NF-κB信号通路调控神经炎症反应。

脂多糖通过TLR4-MyD88信号通路诱导BV2小胶质细胞激活模型的建立

目的探讨不同活化程度的BV2小胶质细胞与炎性介质之间的关系及可能的细胞信号转导途径,建立高效稳定的BV2小胶质细胞激活模型。方法体外常规培养BV2小胶质细胞,CCK-8法绘制细胞生长曲线;采用不同浓度的脂多糖(LPS)(0.25、0.5、1、2、4μg/mL)诱导BV2小胶质细胞24 h,倒置相差显微镜下观察细胞形态变化;应用CCK-8法和Griess法分别检测细胞活性和一氧化氮(NO)水平;应用蛋白质印迹法(Western blot)和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分别检测Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)蛋白和mRNA的表达。同时选取浓度为1μg/mL的LPS诱导BV2小胶质细胞24 h,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)浓度。结果 CCK-8法和Griess法结果显示:BV2小胶质细胞传代培养后第2~3天处于对数生长期;LPS能明显降低BV2小胶质细胞存活率及提高NO释放量(均P<0.05),且在实验剂量范围内呈现剂量-效应关系。Western blot和qRT-PCR结果显示:TLR4、MyD88 mRNA及蛋白的表达随着LPS浓度增加呈现先升高后降低的趋势,且均在LPS为1μg/mL时达到峰值(均P<0.05)。ELISA结果显示:LPS(1μg/mL)显著提高TNF-α和IL-1β浓度,与对照组比较差异有统计学意义(均P<0.05)。结论 LPS可能通过TLR4-MyD88信号通路诱导BV2小胶质细胞活化,进而上调其炎性介质的水平;1μg/mL LPS是建立高效稳定BV2小胶质细胞激活模型的最佳浓度。

潜阳安神汤对偏头痛伴焦虑、抑郁状态患者临床疗效及炎性细胞因子影响动态研究

目的:观察潜阳安神汤对偏头痛伴焦虑、抑郁状态患者临床疗效及炎性细胞因子影响。方法:80例偏头痛伴焦虑、抑郁患者随机分为对照组(口服盐酸氟桂利嗪胶囊,40例),观察组(对照组基础上口服潜阳安神汤,40例),观察两组患者治疗前及疗程结束后偏头痛综合评分、血清炎症因子TNF-α(Tumor Necrosis Factor)、IL-6(Interleukin-6)、CGRP(calcitonin gene related peptide)及血清5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)、焦虑(self-rating anxiety scale,SAS)、抑郁(self-rating depression scale,SDS)评分差异,并于治疗结束后1月、3月对所有患者进行追踪随访。结果:①与治疗前比较两组患者治疗结束后偏头痛综合评分明显下降,且观察组明显优于对照组(P<0.05),差异具有统计学意义。②疗程结束后两组患者TNF-α、IL-6、CGRP水平较治疗前明显下降,5-HT增加,且观察组优于对照组(P<0.05),差异具有统计学意义。③两组患者治疗结束后SAS、SDS评分与本组治疗前比明显下降,且观察组优于对照组(P<0.05),差异具有统计学意义。④治疗结束后1月、3月动态随访两组患者偏头痛综合评分、TNF-α、IL-6、CGRP、5-HT、SAS、SDS指标改善程度观察组仍优于对照组(P<0.05),差异具有统计学意义。结论:潜阳安神汤能够有效改善偏头痛患者临床症状,机体炎症反应,焦虑抑郁状态,促进患者康复。