慢性乙型肝炎患者肝组织及外周血单核细胞内IFN-α／β受体的表达及其临床意义

目的慢性乙型肝炎患者肝组织的炎症程度是影响干扰素应答率的独立因素,本研究的目的系从干扰素受体的角度来探讨其机制,此外了解外周血单核细胞干扰素受体与慢性乙型肝炎感染的关系。方法采用链霉抗生物素蛋白-过氧化物酶连接法,检测15健康对照、16例慢性乙型肝炎患者外周血单核细胞及另外21例慢性乙型肝炎患者肝组织内的干扰素受体的表达并进行定量分析。结果15例健康对照、16例慢性乙型肝炎患者外周血单核细胞干扰素受体的表达量分别为(21.4060±4.7658)、(23.8365±3.3329)(P=0.374);另外21例慢性乙型肝炎患者根据肝脏病理的炎症程度分为3组G1(5.6913±1.8422)、G2(7.4706±5.3572)、G3(25.1307±7.0700)(P=0.000)。结论慢性乙型肝炎患者肝组织内干扰素受体的表达量与肝组织的病理炎症程度相关,可能是其对干扰素应答率高的原因,而外周血单核细胞干扰素受体的表达与HBV感染无关。

细菌耐药机制研究进展

由于广谱抗生素在临床上的广泛应用以及细菌间耐药基因的传导，细菌对常用抗菌药物的耐药已经发展成为一个威胁人类健康的重要问题。有关细菌耐药的发生机制尚不十分明了，每种细菌都有其特殊而复杂的耐药发生机制。本文主要从生物化学的角度按灭活酶和钝化酶的产生、抗菌药物渗透障碍、主动外排耐药机制、药物作用靶位的改变、代谢途径或代谢状态改变五个方面对近年来这方面的进展做一综述。

三种常见HBV抗原肽-HLA-A*0201复合物四聚体的构建及初步检测应用

目的体外构建三种常见HBV抗原肽-HLA-A*0201复合物四聚体,并初步用该三种四聚体对抗原肽特异性的细胞毒性T细胞(CTL)进行了初步检测。方法原核高效表达的HLA-A*0201-BSP和β2m蛋白,分别和三种HBV抗原肽(HBVCore18-27,Env335-343,Pol575-583)体外复性折叠成可溶性的HLA-A*0201抗原肽复合物单体,经BirA酶作用并通过凝胶过滤层析法纯化复合物单体,分别将复合物单体与藻红蛋白标记的链霉亲和素按一定比例耦合构建成相应的三种抗原肽四聚体。最后进行流式细胞仪检测。结果Dot-ELISA和ELISA检测显示获得了三种具有天然构象的生物素化的HBV抗原肽-HLA-A*0201复合物单体。构建的三种四聚体均可以检测到相应特异性的CTL,在自限性感染患者体内针对乙肝核心抗原(core18-27)的CTL细胞频数(0.18%)高于针对聚合酶抗原(pol575-583)(0.08%)和包膜抗原(env335-343)(0.06%)。结论成功构建了三种具有完整构象的生物素化HBV抗原肽-HLA-A*0201复合物单体,所构建的三种四聚体都可以检测到抗原特异性的CTL。

ELISA检测土拨鼠肝炎病毒核心抗体方法的建立

目的建立检测土拨鼠肝炎病毒(WHV)核心抗体的ELISA方法,应用于WHV感染的中国旱獭动物模型的研究。方法原核表达重组WHcAg,氯化铯密度梯度离心获得非变性的纯化蛋白;用该纯化蛋白免疫Balb/c小鼠制备多克隆抗体;建立竞争抑制ELISA方法用于检测旱獭血清中的抗-WHc。结果纯化后的蛋白浓度达0.86mg/mL,纯度达89.48%;免疫小鼠后获得抗血清,ELISA间接法显示其多克隆抗体效价达1∶640000,Western blot分析显示该抗体能特异识别WHcAg;建立的竞争抑制ELISA方法对旱獭血清中可能存在的抗-WHc进行检测,诊断特异性及敏感性均较好,重复测定的批内变异系数和批间变异系数均小于10%。结论成功地建立检测旱獭血清中抗-WHc的竞争抑制ELISA方法。该方法具有稳定、简便、特异、敏感的特点,适用于大量旱獭血清抗-WHc的筛查工作,为进一步研究中国旱獭这一新型乙型肝炎病毒动物模型奠定了基础。