基因IV型HEV ORF3真核表达质粒的构建与鉴定

目的构建基因IV型HEV ORF3的真核表达载体。方法从患者血清中提取HEV RNA,利用RT-PCR技术扩增HEV ORF3基因,EcoRⅠ/BamHⅠ双酶切后连接到经同样酶切的pEGFPC2真核表达载体,转化DH5α菌株感受态细胞,获得阳性重组质粒pEGFPC2-ORF3。将重组质粒用脂质体法转染HepG2细胞,Western blot分析鉴定EGFP-ORF3融合蛋白的表达。结果真核表达质粒转染HepG2细胞,Western blot在39.8kD左右有一条强的棕色条带。结论成功构建pEGFPC2-ORF3真核表达质粒,在HepG2细胞表达融合蛋白,为进一步研究该蛋白生物学功能奠定了基础。