抗酸染色联合PAS染色和六胺银染色在感染性疾病病理学实验教学中的应用

为配合医学整合课程体系改革,结合临床病理诊断常用的感染性疾病的辅助诊断方法,将抗酸染色、高碘酸-Schiff(periodic acid-Schiff,PAS)染色和六胺银染色阳性病例切片引入病理学感染性疾病章节的实验教学,显示出病变组织致病微生物。通过对不同班级进行问卷调研,绝大多数同学认可特殊染色在感染性疾病章节中的应用,认为不仅丰富了课堂内容,学习了结核杆菌和真菌在病变组织中的形态学特征及其导致的组织病理变化,而且加深了对感染性疾病理论知识的理解,深刻认识到病理学研究内容除了疾病的病理变化之外,还要探讨疾病发生的病因以及好发部位。同时,这些增加的特殊染色切片改变了本章节实验教学切片普通光学显微镜下色彩的单调性——单一的“红-蓝”色调,丰富了镜下色彩,提高了学生的学习兴趣,活跃了课堂气氛。

新冠疫情下医学免疫学居家实验教学探索与实践

疫情期间根据教育部停课不停学的要求,我中心开展了“双向琼脂糖凝胶免疫扩散实验”和“酶联免疫吸附实验”的居家实验课教学,将实验材料寄至学生家中,让学生自主完成实验,形成教师线上指导,学生自主探究的学习方式,以培养学生独立操作技能、科学思维和创新能力。本实验取得了良好教学效果,保障了教学进度和教学质量,为居家免疫学实验的规模化、常态化开展提供了参考和依据。

医学实验教学动物尸体二维码信息管理系统建立的设想

实验动物是医科院校开展实验教学工作的重要载体。本文系统阐述了建立实验动物尸体二维码信息管理系统的必要性,针对实验教学动物使用的特点,设计了一种依托微信小程序的实验动物尸体二维码信息管理系统。通过参与人员的无缝对接,对实验教学动物的尸体从产出、收集、转运、冻存及处理等过程实施动态监管,以期切实推动实验教学管理工作的规范化,杜绝实验动物尸体乱抛现象的发生,维护校园生物安全。

生理学教学中提高翻转课堂教学法教学效果的探索

目的:探索生理学教学中提高翻转课堂教学法教学效果的可行性方式。方法:依据问卷调查和形成性评价结果发现翻转课堂教学法中的问题,针对问题改变教学实施方式或方案。结果及结论:监督课前预习环节增加学生的自主学习行为,提高教学考核成绩;小课教学模式增加学生自主学习行为和学生满意度,但不影响课堂教学成绩考核。

IL-6对小鼠胚胎心肌细胞增殖能力的影响及发育依赖性变化

目的白细胞介素6(interleukin 6,IL-6)是心肌细胞损伤后心脏微环境中重要的细胞因子,可以提高心肌细胞自身的增殖能力从而促进心脏修复。本研究旨在探索IL-6对小鼠胚胎心肌细胞增殖能力的影响及其发育依赖性变化。方法用酶解法获得胚胎发育早期(early embryonic developmental stage,EDS)和发育晚期(late embryonic developmental stage,LDS)的单个心肌细胞,心肌细胞分别在20%DMEM培养液中培养24 h,然后再分别加入10 ng/mL和50 ng/mL IL-6处理24 h;用免疫荧光技术定位α-actinin^(+)心肌细胞并统计BrdU^(+)α-actinin^(+)细胞核数目/α-actinin^(+)细胞核百分比和BrdU^(+)α-actinin^(+)单核心肌细胞数目/α-actinin^(+)单核心肌细胞数目百分比,研究IL-6对心肌细胞增殖能力的影响;利用Western blot技术检测关键信号通路中关键蛋白的磷酸化水平。结果10 ng/mL IL-6不改变EDS心肌增殖能力,但对LDS心肌细胞增殖能力有显著促进作用;50 ng/mL IL-6显著抑制EDS BrdU^(+)α-actinin^(+)单核心肌细胞比例,增加LDS BrdU^(+)α-actinin^(+)细胞核和BrdU^(+)α-actinin^(+)单核心肌细胞比例。10 ng/mL IL-6和50 ng/mL IL-6抑制EDS心肌细胞Akt的磷酸化、对STAT3和ERK的磷酸化水平无显著影响;但在LDS,10 ng/mL IL-6和50 ng/mL IL-6抑制心肌细胞的Akt的磷酸化,增加STAT3的磷酸化,对ERK的磷酸化水平无显著影响。检测这3个蛋白质的基础磷酸化状态发现:STAT3、Akt和ERK的总蛋白量和磷酸化水平均呈发育依赖性下降。结论IL-6影响胚胎心肌细胞的自我更新能力,且具有发育依赖性和浓度依赖性。这可能与胚胎发育不同时期的关键蛋白及其磷酸化水平存在差异,因而IL-6在不同发育阶段靶向不同的信号通路有关。这些发现为细胞替代疗法的研究在心肌微环境层面提供了重要线索。

HMGB1/RAGE轴在肿瘤炎症中的作用及其治疗药物罂粟碱的研究进展

高迁移率族蛋白1(high mobility group box 1,HMGB1)在肿瘤中的作用复杂多样,它结合不同的受体发挥不同生物学功能。其中晚期糖基化终产物受体(receptor for advanced glycationend products,RAGE)定位于细胞膜,与释放至胞外的HMGB1相结合。已知HMGB1/RAGE轴在肿瘤的发展中起到重要作用,而肿瘤的发展及其耐药强弱与炎症密切相关。本文主要综述了HMGB1/RAGE轴在胰腺癌、结直肠癌和肝癌炎症中起到促炎促瘤作用的分子机制,总结了针对肿瘤炎症中HMGB1/RAGE轴的治疗药物罂粟碱及其衍生物的研究进展,旨在为探究肿瘤炎症中分子作用机制提供新思路,为针对HMGB1/RAGE轴治疗药物的研究提供新的理论依据。

IL-6促进小鼠胚胎干细胞多能性并以发育依赖的方式调控心肌分化

白细胞介素6(interleukin 6,IL-6)是心脏微环境的重要组成部分。在不同模型中,IL-6通过促进心肌细胞再生帮助心脏修复。胚胎干细胞是心脏修复中心肌再生的良好来源。本研究旨在探讨IL-6对小鼠胚胎干细胞(mouse embryonic stem cells,mESCs)及其心肌分化的影响。IL-6处理mESCs两天,用CCK-8法检测mESCs增殖情况,用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)检测干性和胚层分化基因mRNA表达水平,用Western blot检测干细胞相关信号通路的磷酸化水平,用siRNA干扰STAT3磷酸化功能。通过检测搏动拟胚体(embryoid bodies,EBs)比例和qPCR检测心脏前体细胞标记物和心肌细胞离子通道mRNA表达水平来评估mESCs的分化能力。从胚胎干细胞分化第1天(EB0)开始使用IL-6中和抗体阻断内源性IL-6的作用,分别在EB7、EB10和EB15检测心肌细胞分化;在EB15用免疫组织化学染色法示踪心肌细胞,并用Western blot检测干细胞相关信号通路的磷酸化情况。在EB4、EB7、EB10和EB15时给予短期IL-6抗体处理,观察发育后期搏动EBs比例。结果显示,外源性IL-6促进mESCs增殖和多能性的维持,表现为上调癌基因c-fos、c-jun和干性标志物oct4、nanog mRNA表达水平,下调胚层分化标记物branchyury、FLK-1、pecam、ncam和sox17 mRNA表达水平,提高ERK1/2和STAT3磷酸化水平;针对JAK/STAT3的siRNA可部分减弱IL-6对细胞增殖和c-fos、c-jun mRNA表达水平的作用。在分化过程中,IL-6中和抗体的长期作用可减小搏动EBs比例,下调ISL1、GATA4、α-MHC、cTnT、kir2.1和cav1.2 mRNA水平,降低EBs和单个细胞的心肌αactinin荧光强度,下调STAT3磷酸化水平。此外,从EB4开始的短期(2 d)IL-6抗体处理显著降低发育后期搏动EBs的比例,而从EB10开始的短期IL-6抗体处理显著提高EB16搏动EBs的比例。以上结果提示,外源性IL-6促进mESCs增殖,有利于干细胞干性维持;内源性IL-6对mESCs心肌分化的影响呈发育依赖性。这些发现为细胞替代疗法的微环境研究提供了重要依据,也为理解心脏疾病的病理生理学提供了新的视角。

心脏成纤维细胞旁分泌能力影响小鼠胚胎干细胞的命运

本研究旨在探讨心脏成纤维细胞旁分泌能力对小鼠胚胎干细胞的影响。新生小鼠和成年小鼠成纤维细胞的条件培养基(ConM-NCF、ConM-ACF)分别稀释50倍(1:50)或5倍(1:5),通过RT-real time PCR技术、ELISA、细胞增殖检测以及计数心肌分化过程中跳动拟胚体(embryoid body, EB)的比例,观察这些条件培养基对小鼠胚胎干细胞的影响。结果显示,成纤维细胞细胞因子的分泌能力在发育过程中发生显著变化,其中白细胞介素6 (interleukin 6, IL6)随发育成熟显著增加。ConM-NCF抑制干细胞的增殖,但高、低浓度对干性基因表达的作用不同。Con M-ACF 1:50促进干细胞增殖并上调干性基因,但Con M-ACF1:5作用相反。ConM-NCF和ConM-ACF都能抑制干细胞的心肌细胞分化能力,但又各有特点:ConM-NCF 1:50抑制早期心肌分化但不影响晚期心肌细胞标记物的表达;ConM-ACF 1:50抑制早期心肌分化比ConM-NCF 1:50更显著,阻碍心肌成熟并上调分化晚期的心肌细胞标记物表达水平。此外,IL6中和抗体抑制ConM-ACF 1:50对干细胞的促增殖作用,但不影响ConMNCF 1:50的作用。干细胞分化过程中长期应用IL6中和抗体,抑制早期心肌细胞分化,但对晚期分化不产生影响。以上结果提示,心脏成纤维细胞分泌的细胞因子种类和浓度都对小鼠胚胎干细胞的增殖、干性基因表达和心肌分化有重要意义,其中ConM-ACF分泌的IL6是干细胞干性维持和心肌细胞分化的有利因素。