好氧同时硝化-反硝化菌的分离鉴定及系统发育分析

从土壤中分离到一株好氧同时硝化-反硝化菌,编号为SDN,该菌株革兰氏染色呈阳性,球状或杆状,菌落颜色橙红色.该菌株以硝酸钠为氮源时能进行好氧反硝化作用;以乙酸钠和硫酸铵分别为碳源和氮源能进行异养硝化作用,能以乙酰胺为唯一碳源和氮源进行生长.部分长度的16SrDNA序列分析表明,分离菌株SDN与Rhodococcusruber的16SrDNA序列具有99%相似性.并用PHYLIPS程序将该菌株与报道的相关微生物进行了系统发育分析.

土壤宏基因组的提取及基于免培养技术分析细菌16S rDNA

采用CTAB-SDS-冻融法和玻璃粉吸附法提取土壤宏基因组(metagenome),经琼脂糖凝胶电泳后用回收试剂盒对其进行纯化。以细菌16SrDNA通用引物从宏基因组中扩增出V8和V9两个高变区,回收纯化后与克隆载体pMD18-T连接,转化大肠杆菌DH5α,随机挑取一个阳性克隆菌进行序列测定,经BLAST分析表明该序列所代表的是一个不动杆菌属(Acinetobacter)细菌。本研究结果为分析土壤微生物种群结构和直接从土壤中分离功能基因奠定了基础。

珙桐枝皮中的生物碱甙成分研究

从珙桐枝皮甲醇提取物的水溶性部分得到3个配糖体化合物,经核磁共振和质谱等光谱分析鉴定为1个喹啉类生物碱甙-pumiloside(1)和2个吲哚类生物碱甙-vincosamide(2),strictosidinic acid(3),其中pumiloside是抗肿瘤物质喜树碱的一种生物合成前体,这3个化合物均为首次从该植物中分得。

分离工程教改实践的体会

本文介绍了采用与专业实验相结合、引导学生参加教师的科研实验研究和引入课程论文这三种实践教学方式在分离工程教学中的实践体会。

甲醇对土壤甲烷氧化的影响及其微生物学机理

对设施栽培土壤甲烷氧化及其微生物学机理进行了研究,结果表明,不同土壤对甲烷的氧化能力各异,这可能与土壤的理化性质有关。土壤微生物是甲烷氧化的主要生物类群,不同碳源对甲烷氧化的影响各异,纤维素对甲烷氧化的抑制作用最小,高浓度的甲醇则对甲烷氧化具有强烈的抑制作用,而适当浓度的甲醇可极大地促进土壤甲烷的氧化。在甲烷释放极少的设施栽培土壤中,兼性营养甲烷氧化菌可能在甲烷氧化中占据主导地位。

耐受重金属微生物资源的筛选与分子鉴定

从77种芽孢杆菌中筛选出的杀虫细菌苏云金杆菌4AF1,其耐受重金属的最低抑制浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)分别为:Cu2+ 124.0 mM、Co2+ 277.2 mM、Zn2+51.1mM、Ni+ 109.4 mM.复合污染下,Co2+对4 AF1菌的毒性被激活,Ni+的毒性受抑制.从混合土壤样品及泉州洛江水样中筛选到5个耐受细菌和3个耐受真菌.16S rDNA高变区序列的PCR扩增与测定结果表明,耐受菌1为气单胞杆菌属细菌,耐受菌3为假单胞杆菌属细菌.

苏云金杆菌entomocidus亚种几丁质酶基因的克隆与生物信息学分析

从苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis,B t)entom oc idus亚种HD109菌株中克隆了几丁质酶基因chiA74-HD109,其序列全长为2 031 bp,编码676个氨基酸,GenBank登录号为AY455290。其编码产物与蜡状芽孢杆菌几丁质酶CHiB(AB041932)的相似性达97.9%,与B t kenyae亚种LB IT-82菌株几丁质酶chiA74(AF424979)的相似性达98.4%,与B t pak istan i亚种几丁质酶(U89796)的相似性为83.0%,与B t kurstak i亚种几丁质酶kchi(AY189740)的相似性达97.8%,与B t israe lensis亚种几丁质酶(AF526379)的相似性达96.6%,与B t几丁质酶(AY074882)的相似性达98.4%,与B t sotto亚种几丁质酶(AY129671)的相似性为97.3%。功能结构域分析显示其编码区包含信号肽、催化区、Ⅲ型粘蛋白同源区及几丁质结合区4个部分。

利用生物信息学手段获得两个对硫磷水解酶

以黄杆菌(Flavobacterium)对硫磷水解酶(parathionhydrolase)的序列(AAA24930.1)对芽孢杆菌的基因组进行BLASTP,从Bacillushalodurans中发现两个对硫磷水解酶类似蛋白PTEa和PTEb,长度分别为679和331个氨基酸。利用conserveddomainsearch和motifscan软件分析的结果证实它们具有对硫磷水解酶的结构特征。PTEa和PTEb的对硫磷水解酶上游标志区分别是"GVCACHEHL"和"GFTYSHEHI",与标准的"G-x-T-L-x-H-E-H-[LIV]"大致吻合。PTEb的对硫磷水解酶下游标志区"AVARAHHETKAPIHSH"也与典型的"A-x-A-x-A-x(4)-G-x-P-[LIVM]-x(2)-H"基本一致,而PTEa中缺乏明显的下游标志区。PTEb序列对枯草杆菌基因组TBLASTN的结果表明枯草杆菌也可能存在对硫磷水解酶类似蛋白。

用生物信息学软件分析风信子HPI1基因及其产物蛋白

利用生物信息学方法对风信子HPI1基因及其产物蛋白进行序列、结构分析和功能预测。所研究的HPI1基因与许多植物的花器官决定基因具有较高的相似性 ,推测它们可能为同源基因 ,具有相似的生物学功能 ,即可预测HPI1基因与花器官的形成有关。

珙桐叶中喹啉类生物碱甙——pumiloside结构鉴定

首次从珙桐叶甲醇提取物的水溶性部分得到一配糖体化合物-喹啉类生物碱甙(pumiloside),它是抗肿瘤物质喜树碱的生物合成前体。本文对其结构进行鉴定。

1,3-丙二醇氧化还原酶结构与功能关系的探讨

用生物信息学方法对来源于klebsiella pneumonide的1,3-丙二醇氧化还原酶(即1,3-丙二醇氧化还原酶,PDOR)进行高级结构模建,并搜索其功能位点,以所得三维结构为对象,定位其铁信号结合位点、辅酶NADP大致位置以及可能的底物结合部位;在此基础上模拟PDOR活性部位,探讨该酶的构效关系。

设施栽培土壤氧化亚氮排放及其影响因子的研究

采用塑料温室及露地栽培试验方法,研究了土壤氧化亚氮排放规律及其影响因子。结果表明,设施栽培土壤氧化亚氮释放通量比露地蔬菜栽培土壤高1.41倍;施有机肥(酵素菌肥)的土壤中氧化亚氮的释放通量高于施化肥的处理,且分别比对照高2.08和0.74倍;不同形态的氮肥对氧化亚氮释放影响各异,其中长效尿素对氧化亚氮释放的促进作用最微弱;38℃下氧化亚氮的释放量高于15℃时氧化亚氮的释放量;pH为7.3时,土壤释放氧化亚氮的能力最强;不同碳源实验证实,葡萄糖对氧化亚氮释放的促进作用最强。

克雷伯杆菌生产1,3-丙二醇关键酶发酵条件研究

研究了克雷伯杆菌生产1,3-丙二醇关键酶(甘油脱氢酶、1,3-丙二醇氧化还原酶、甘油脱水酶)的发酵条件。研究各种碳源、无机氮源、有机氮源及无机盐对产酶的影响,应用均匀设计、神经网络和遗传算法优化发酵培养基组成,结果为(gL-1):甘油30、KCl 1.6、NH4Cl 6.7、CaCl2 0.28、酵母浸膏2.8。在温度37 C、初始pH 7.0、摇床转速200rmin-1和接种量5%条件下,发酵24h,无细胞抽提液中甘油脱氢酶、1,3-丙二醇氧化还原酶和甘油脱水酶活力(U·mg-1)分别为9.16、18.72、0.48,发酵34h,发酵液中1,3-丙二醇(1,3-PD)最大浓度为7.96gL-1。代谢过程中关键酶酶活与1,3-PD峰值出现时间不一致,且提早于1,3-PD峰值的出现。此外,结果表明优化后的培养基去除了多种微量元素,克雷伯杆菌生产1,3-丙二醇关键酶可以在微氧条件下进行。

克雷伯杆菌甘油脱氢酶的分离纯化及性质

在有氧条件下,利用Q Sepharose Fast Flow离子交换层析和Blue Sepharose CL 6B亲和层析提纯克雷伯杆菌胞内甘油脱氢酶.酶的纯化倍数和回收率分别为 32.61 倍和 5.83%.通过SDS PAGE电泳测得该酶亚基的相对分子质量约为 34 000.该酶最适表观反应温度和最适反应pH值分别为60 ℃和11.在30 ℃以下及pH值10~12时,该酶具有良好的稳定性.在45 ℃和pH值11条件下,该酶以甘油和NAD+为底物的米氏常数Km分别为 0.75 mmol/L和 0.12 mmol/L.甘油脱氢酶对甘油的生理反应活性最大,对其它醇类如 1,2 丙二醇、乙二醇也有氧化能力.NH4+和Na+对酶有显著激活作用.巯基保护剂可明显地提高酶的活力.

好氧反硝化菌的分离鉴定及特性研究

从土壤中分离到1株能以硝酸钠为氮源进行好氧反硝化作用的细菌,命名为Rhodococcussp.DN,分离菌株革兰氏染色为阳性,球状或杆状,菌落颜色为橙红色。该细菌能以乙酰胺为惟一碳源和氮源,能进行氨化和硝化作用并产生亚硝酸。部分长度的16S rDNA序列分析表明,所分离的细菌与Rhodococcus ruber的16S rDNA序列具有99%相似性。

珙桐叶中的黄酮甙成分

从珙桐 (DavidioinvolucrataBaill.)叶甲醇提取物的水溶性部分得到 6个黄酮及配糖体成分。经核磁共振谱、质谱和化学鉴定它们是 :山奈酚 (1 ) ,3 O β D 吡喃葡萄糖基 山奈酚甙 (2 ) ,3 O β D 吡喃半乳糖基 山奈酚甙 (3 ) ,槲皮素 (4 ) ,3 O β D 吡喃阿拉伯糖基 槲皮素甙 (5 ) ,3 O β D 吡喃半乳糖基 槲皮素甙 (6) ;均为已知化合物且是首次从珙桐植物中分离得到。

克雷伯杆菌有氧发酵利用甘油生产3-羟基丙醛的研究

克雷伯杆菌在含有盐酸氨基脲和甘油的磷酸盐缓冲液培养基中有氧发酵,可实现3-羟基丙醛(3-HPA)的转化。考察了影响3-HPA积累和稳定性的一些主要因素,如菌种培养时间、接种量、甘油浓度、盐酸氨基脲、培养温度和pH值。优化后的培养条件为:菌种培养时间24 h、接种量2.16 g／L、甘油30 g／L、盐酸氨基脲26.8 g／L、28℃和PH值7.2。在优化条件下培养27 h,发酵液中3-HPA质量浓度达到15.48 g／L,总得率和转化率分别为0.60 g／g和75％。3-HPA低温条件下比较稳定,pH值对其稳定性影响不大。

均匀设计法优化微波辅助提取牛蒡菊糖工艺

对从牛蒡中提取菊糖的工艺条件进行了研究.在提取过程中,通过单因素法分析了几个主要因素———料液质量比、微波提取功率和提取时间、水提取温度和提取时间对提取率的影响.在单因素的基础上,通过均匀设计法对微波辅助提取牛蒡菊糖的工艺条件进行了优化,得到的最佳提取工艺条件为:料液质量比1∶35、微波提取280 s、95℃热水提取15 m in,提取率可达93.6%.

绞股蓝多糖提取工艺的研究

对从绞股蓝中提取水溶性多糖的工艺条件进行了研究。在提取过程中,通过单因素法分析了三个主要因素:料液比、浸提温度及提取时间对提取率的影响。在单因素的基础上,通过正交实验设计方法对热水浸提和碱提绞股蓝多糖的工艺条件进行了优化,实验表明,水提多糖最佳提取工艺条件为料液比1∶16,80℃下浸提1h一次;当浸提液浓缩2～6倍时,可得到多糖的最高沉降率。碱提绞股蓝多糖最佳提取工艺条件为选择料液比1∶16,提取时间6h,NaOH浓度0.5mol/L。

从扇贝壳制取活性氧化钙及其抑菌效果初探

将扇贝壳粉碎、过筛,经高温(1100℃)二次灼烧,制作出活性氧化钙。用钙指示剂测定其纯度平均为97%,所制得的活性氧化钙白色度(>92%)高于普通生石灰,而且活性氧化钙遇湿发热温度(40℃)明显小于普通生石灰(60℃)。以NaClO及普通生石灰作对照,用活性氧化钙对黄瓜、单环刺缢做抑菌试验,48h后,0.5%活性氧化钙悬液对鲜黄瓜的抑菌率为94.4%、对新鲜的单环刺缢的抑菌率为97.5%,明显高于0.5%生石灰悬液(91.7%、81.5%)的抑菌效果。结果表明,活性氧化钙比普通氧化钙有更好的稳定性及更为明显的抑菌效果。