夫西地酸生产菌复合诱变育种及发酵培养基的优化研究

利用常压室温等离子体射流诱变和紫外照射对夫西地酸生产菌株进行复合诱变,得到3株产量明显提高的突变菌株,3株菌的平均发酵效价较出发菌株提高14%;然后,采用均匀设计实验对其中发酵效价提高最多的AU-37菌株的发酵培养基碳、氮源进行了优化,得到适合该菌株的发酵培养基优化配方为:糊精1.86%、花生饼粉2.5%、蛋白胨0.3%、氯化铵0.5%、七水合硫酸镁0.3%、硫酸钾0.6%、碳酸钙1%、pH值7.2,在优化的发酵培养基中,AU-37菌株摇瓶发酵效价较出发菌株提高33.8%,为工业化生产奠定了基础。

普那霉素发酵工艺研究

以RP59500为试验菌株,在15 L发酵罐内,研究了普那霉素的发酵工艺。通过单因素条件试验确定了其生物合成的最适温度、接种量。优化了其发酵培养基,并进行了发酵中间补料试验,确定了最佳补料工艺。试验结果表明:以3%淀粉、1.7%蔗糖、1%黄豆粉、1.5%酵母粉、0.5%葡萄糖、0.01%KH2PO4、0.2%MgSO4、0.2%泡敌和0.4%CaCO3的发酵培养基配方,以接种量4.0%,26℃下发酵,在发酵21 h时补加氨基酸,普那霉素的发酵效价达3 000 U/mL。

棘白霉素B母核在低级醇-丙酮体系中的纯化研究

棘白霉素B母核(ECBN)结晶纯化是提取步骤中最为重要的一个步骤,通过实验,摸索出了ECBN的最佳结晶条件,乙醇/丙酮为最优纯化体系,当混合液中乙醇含量为4%~5%,混合液用量为浓缩液的10~14倍体积时,棘白霉素B母核有很好的纯化效果和较高的收率。

四羟基环孢菌素衍生物转化菌株发酵条件优化

目的对四羟基环孢菌素衍生物([γ-HyMeLeu4]CyA)转化菌Nonomuraea dietziae的发酵条件进行优化。方法采用均匀设计对发酵培养基进行优化,考察糊精、黄豆饼粉、葡萄糖、酵母粉和蛋白胨对发酵单位的影响,同时对底物环孢菌素A的添加时间、添加量和发酵培养时间进行了摸索。结果得到了最优培养基配方为:糊精1.2%、葡萄糖3.0%、酵母粉0.9%、蛋白胨0.5%、黄豆饼粉1.5%;底物添加最佳时间是36h,添加量是400μg/mL,最佳放瓶时间是96h。在优化后的培养条件下,[γ-HyMeLeu4]CyA的产量提高了63%左右。结论优化后的发酵条件更适合转化菌的生长,有利于目的产物产量的提高,该发酵条件的优化为[γ-HyMeLeu4]CyA的工业化生产奠定了基础。

夫西地酸发酵培养基优化

为了筛选夫西地酸高产培养基配方,提高夫西地酸发酵水平,以F17D2744为试验菌株,通过均匀设计方法,对不同碳氮源及微量元素等的配比实验,确定了最佳发酵培养基配方。试验结果表明:以蔗糖4.3%、糊精2%、酵母粉1%、蛋白胨3%、生物氮素0.59%、MgSO40.2%,KH2PO40.15%为发酵培养基配方,最终发酵效价较初始配方的发酵效价提高了234%。

产黄青霉原生质体融合及融合子初步分析

目的以青霉素工业生产菌株产黄青霉为研究对象,对丝状真菌原生质体融合及其融合子进行了初步的研究。方法通过紫外线诱变和基因转化筛选出具有不同遗传标记的2株亲本菌株,对供体亲本菌株原生质体热灭活后进行原生质体融合,并对融合子进行了分离及传代分离。结果在选择性培养基上筛选到5株融合子,融合率为2.97×10-5,融合子分离和传代分离后产生亲本菌株分离子和异核体。结论 5株融合子均为异核体,在自然条件下融合子很难形成杂合二倍体和重组子。

新型混合模式层析技术在单克隆抗体精细纯化中的应用

单克隆抗体(简称单抗)产品纯化工艺中需引入高效的精细纯化步骤,并对每步工艺去除各种杂质的能力进行深入研究。精细纯化可去除特定杂质,对产品的最终质量至关重要。工业上主要采用离子交换、疏水层析等技术,而新型的混合模式层析技术在单抗的精细纯化中正得到越来越广泛的应用。本文对适合工业化生产的疏水性电荷诱导层析、多模式阴离子交换层析、羟基磷灰石层析等几种新型混合模式层析技术的作用机制、层析条件中的关键影响因素及其去除杂质的能力作一综述。

棘白菌素B母核关键杂质的制备与鉴定

采用制备液相色谱技术对棘白菌素B母核粗品中的关键杂质进行分离纯化,并通过质谱和核磁共振波谱分析鉴定杂质结构。制备的2个棘白菌素B母核杂质(化合物M和N)与棘白菌素B母核具有相同的主体结构,分别为母核F位和E位氨基酸残基的去甲基产物,为阿尼芬净的杂质研究和质量控制提供了技术支持。