大鼠肢体缺血再灌注过程中血及骨骼肌的相应指标变化

目的:观察大鼠肢体缺血再灌注(LIR)过程中血及骨骼肌的相应氧化损伤变化。方法:实验采用大鼠肢体缺血再灌注损伤模型,将Wistar大鼠随机分7组,即:对照组、单纯缺血组、再灌注0.5、2、4、6、10h组,分别测定各组动物血浆乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸磷酸激酶(CK)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)的含量;观察骨骼肌组织湿干重比值(W/D)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、髓过氧化物酶(MPO)的变化和骨骼肌在光镜下的形态学改变。结果:大鼠LIR后血浆胞浆酶LDH和CK、脂质过氧化物MDA持续性升高,4h左右达到高峰,此后逐渐下降;血浆SOD在LIR后持续性下降,4h左右达到低谷;腓肠肌组织SOD和MDA的变化趋势与血浆一致;W/D和MPO亦在LIR后明显增加,4h后开始下降;再灌注4h光镜下可见骨骼肌纤维水肿变形,横纹紊乱、消失,肌间隙增宽,间质水肿,纤维蛋白渗出,有大量炎性细胞浸润,间质血管扩张,充血出血明显。结论:大鼠LIR后发生骨骼肌损伤与机体活性氧产生增多及清除酶活性下降有关,且以再灌注4h左右为重。

牛磺酸对大鼠肢体缺血/再灌注后肺组织损伤的保护作用

目的 :观察大鼠肢体缺血再灌注 (LIR)后肺组织形态学的变化及牛磺酸对其影响。方法 :Wistar大鼠随机分为 3组 ,对照组 (control)、缺血 /再灌注组 (LIR)、牛磺酸 +缺血 /再灌注组 (Tau +LIR) ,各组动物通过大体、光镜和透射电镜观察肺组织形态学变化 ,并测定肺系数和肺通透指数及肺组织活性氧和MDA含量。结果 :大鼠LIR后肺组织出现以肺泡毛细血管膜通透性增加为特征的组织细胞损伤 ,光镜下显示毛细血管扩张充血、血管周围间隙增大、肺泡腔中有大量蛋白渗出物 ,电镜下可见肺泡上皮细胞之间、毛细血管内皮之间的紧密连接松解 ;肺系数和肺通透指数升高 ;肺组织活性氧及MDA含量增加。提前给予外源性牛磺酸可使肺组织损伤变化减轻。结论 :牛磺酸对大鼠LIR后肺损伤有保护作用 ,其保护机理之一与其抗氧化 。

牛磺酸对肢体缺血/再灌注后肝损伤大鼠TNF-α、NF-κB表达的影响

目的:探讨给予牛磺酸预处理对肢体缺血/再灌注(limb ischemia-reperfusion,LI/R)后大鼠肝脏损伤及TNFα、NF-κB表达的影响及意义。方法:采用Wistar大鼠建立LI/R损伤模型,随机分为4组(n=10):对照(C)组,缺血/再灌注(I/R)组,牛磺酸(T)组和牛磺酸+缺血/再灌注(TR)组。比色法测定动物血浆ALT、AST、MDA,肝组织MDA、MPO、DNA裂解率和钙含量,放免法检测血浆及肝组织TNF-α水平;HE染色观察肝脏组织形态改变;免疫组化法观察NF-κB蛋白表达。结果:与C组比较,I/R和TR组各损伤性指标、TNF-α水平均升高,NF-κB蛋白表达增高(P<0.01);但TR组上述各项指标较I/R组显著降低。结论:牛磺酸预处理可减轻大鼠LI/R所致肝脏损伤,降低TNF-α、NF-κB表达。

一种用于研究骨骼肌缺血/再灌注损伤的细胞模型

目的:复制L-6TG大鼠肌母细胞缺血/再灌注损伤的细胞模型。方法:将培养的L-6TG大鼠肌母细胞随机分为2组:①正常对照组(C组),②缺血/再灌注组(I/R组),观测了培养上清中乳酸脱氢酶(LDH)、细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、黄嘌呤氧化酶(XOD)、Ca2+含量的变化;采用MTT法检测线粒体的功能;在光镜下观察细胞的形态学改变。结果:与对照组相比,L-6TG大鼠肌母细胞IR4h后培养上清中LDH、细胞内XOD、Ca2+含量明显增加,细胞内SOD及线粒体呼吸功能明显降低,细胞严重受损,明显圆缩,并有脱落现象。结论:应用模拟缺血液和再灌液可成功复制L-6TG大鼠肌母细胞缺血/再灌注损伤的细胞模型。

家兔血清蛋白质组双向凝胶电泳技术的建立

背景:家兔血清是基础研究中常用的实验样品,双向凝胶电泳是蛋白质组学中最经典的蛋白分离技术,因此建立稳定的家兔血清蛋白质组双向凝胶电泳技术体系非常重要。目的:建立家兔血清蛋白分离的双向凝胶电泳技术体系。设计、时间及地点:单一样本观察,实验于2008-06/07在武警医学院天津市职业与环境危害生物标志物重点实验室完成。材料:健康家兔6只,由唐山市职业技术学院动物中心提供。方法:去除高丰度蛋白前后的健康家兔血清样品,分别加入水化上样液使样品中的蛋白充分裂解,还原烷基化后上样,被动水化14h。等电聚焦电泳后进行SDS-PAGE电泳。凝胶银染后用PDQuest7.4软件进行分析。主要观察指标:①高丰度蛋白去除效率。②2-DE图谱。结果:双向电泳图谱清晰,分辨率高,重复性好。未去除高丰度蛋白的血清2-DE图效果优于去除高丰度蛋白后的血清2-DE图。结论:成功建立家兔血清蛋白质双向凝胶电泳技术,将为进一步开展疾病的血清蛋白质组学研究奠定基础。

模拟缺血再灌注对L-6TG大鼠肌母细胞凋亡的影响

目的探讨模拟缺血再灌注后L-6TG大鼠肌母细胞凋亡的发生机制。方法将培养的L-6TG大鼠肌母细胞随机分为对照组(C组)和模拟缺血再灌注组(IR组)。C组用模拟再灌注液培养,IR组用模拟缺血液培养4h后换再灌注液培养4h。观测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、黄嘌呤氧化酶(XOD)及Ca2+含量的变化;采用MTT法检测线粒体功能;利用流式细胞仪和细胞DNA电泳检测细胞凋亡情况;采用免疫组织化学法检测bcl-2及caspase-3蛋白表达情况,并结合自动图像分析系统对其结果进行半定量分析。结果IR组大鼠肌母细胞模拟缺血再灌注4h后细胞内XOD、Ca2+含量及凋亡百分率明显高于C组(287.88±8.47vs42±3.94U/gprot,1.547±0.017vs7.23±0.28lnMCF,7.23%±0.28%vs0.69%±0.07%,P<0.01),而细胞内SOD及线粒体呼吸功能明显低于C组(43.19±3.64vs248.52±11.26NU/mgprot,9.15%±0.49%vs100%,P<0.01),DNA电泳出现典型的梯状条带,bcl-2及caspase-3蛋白的表达均明显高于C组。结论模拟缺血再灌注后L-6TG大鼠肌母细胞发生凋亡,其机制可能与氧化损伤、钙稳态失衡、线粒体损伤及caspase-3表达增强有关。

蛋白激酶C活化对L-6TG大鼠肌母细胞缺血/再灌注损伤中细胞凋亡的影响

目的:蛋白激酶C(PKC)活化对L-6TG大鼠肌母细胞缺血/再灌注损伤过程中细胞凋亡的影响。方法:将培养的L-6TG大鼠肌母细胞随机分为3组:①正常对照组(C组);②缺血/再灌注组(I/R组);③PMA+缺血/再灌注组(PMA组)。观测了细胞内SOD、XOD、Ca2+含量的变化;采用MTT法检测线粒体的功能;利用流式细胞仪和细胞DNA电泳结果检测细胞凋亡情况;采用免疫组织化学的方法检测caspase-3的蛋白表达情况,结合自动图像分析系统对其结果进行定量分析。结果:蛋白激酶C活化可显著降低L-6TG大鼠肌母细胞I/R 4 h后细胞内XOD、Ca2+含量及凋亡细胞百分率,增加细胞内SOD活性及线粒体呼吸功能,DNA电泳无梯状条带出现,caspase-3的表达明显下调。结论:蛋白激酶C活化可明显减轻L-6TG大鼠肌母细胞缺血再灌注损伤后的细胞凋亡的发生,其机制可能与减轻氧化损伤、调节细胞内钙稳态、减轻线粒体损伤、减少caspase-3表达有关。

家兔肠系膜上动脉闭塞性休克前后的血清比较蛋白质组学初步研究

目的:探讨家兔肠系膜上动脉闭塞性(SMAO)休克前后血清蛋白质组学变化及其在SMAO休克发生中的作用。方法:应用家兔肠系膜上动脉夹闭法复制家兔SMAO休克模型,在此基础上通过双向电泳分离家兔SMAO休克前后血清中的蛋白,找出凝胶上的差异蛋白点,用基质辅助激光解吸/电离串联飞行时间质谱技术进行鉴定,并通过生物信息学对差异蛋白的功能进行分析。结果:在家兔SMAO休克前后血清双向电泳图谱中发现19个差异蛋白点,其中11个蛋白质点在SMAO休克后血清中表达明显上调;8个蛋白质点在SMAO休克后血清中表达明显下调。从中选取4个差异最明显的点经基质辅助激光解吸/电离串联飞行和数据库搜索共鉴定出符合条件的2个差异蛋白点,为对氧磷酶和触珠蛋白,均在SMAO休克后血清中含量增高。结论:家兔SMAO休克前后血清蛋白质组会发生明显变化,对氧磷酶和触珠蛋白可能参与了SMAO休克后机体的代偿调节。

牛磺酸对肢体缺血再灌注后红细胞的保护作用

1目的 观察牛磺酸对红细胞 ( RBC)的保护作用。 2方法 实验用大鼠肢体缺血再灌注损伤动物模型 ,采用荧光偏振法 ,以 DPH( 1.6 -二苯 -1、3、5己三烯 )为探剂 ,测定红细胞膜的流动性 ;以硫代巴比妥酸法及邻苯三酚自氧化法分别测定血浆丙二醛( MDA)及红细胞超氧化物歧化酶 ( SOD)含量。 3结果 大鼠肢体缺血再灌注 2 h后 ,RBC膜流动性增强 ,再灌注 4h后 RBC膜流动性降低。而牛磺酸既能改善再灌注 2 h的膜流动性增强 ,又能改善再灌注 4h的膜流动性 ,并可抑制脂质过氧化 ,增加 SOD活性。 4结论 牛磺酸可保护 RBC膜免受缺血再灌注后自由基生成过多而引起的损伤。

牛磺酸对大鼠肢体缺血再灌注后肺损伤的影响

1目的 观察牛磺酸对肢体缺血再灌注 ( IR)后肺损伤的影响。 2方法 实验采用大鼠肢体缺血再灌注损伤模型 ,将 Wis-tar大鼠随机分 3组 ,即 :对照组 ( control、单纯缺血再灌组 ( IR)、牛磺酸 +缺血再灌组 ( Tau+IR) ,分别测定血浆及肺组织中与自由基有关物质的含量。3结果 口服牛磺酸可有效地减少胞浆酶的漏出 ,增加自由基清除酶的活性 ,抑制组织脂质过氧化的发生 ,减轻组织水肿及中性粒细胞的聚集。4结论 牛磺酸对大鼠肢体缺血再灌注后继发的肺损伤具有保护作用 。

一氧化氮在止血带休克发病学中的意义

目的 探讨一氧化氮 ( NO)在止血带休克发病学中的意义。 2方法 本实验采用了 Rosenthal法复制大鼠止血带休克( tourniquet shock,To S)模型 [1 ] ,观察一氧化氮合酶 ( NOS)抑制剂氨基胍 ( AG)及一氧化氮 ( NO)合成前体物质 L -精氨酸 ( L -Arg)对To S的影响。 3结果 To S时 ,平均动脉压 ( MAP)进行性降低 ,局部骨骼肌组织 NOS活性增强 ,血浆 NO含量增高 ;给予 AG后虽能增强动物血压松带后血压早期的回升 ,但晚期血压迅速下降 ,骨骼肌组织 W/D比值、组织髓过氧化物酶 ( MPO)的含量、血浆乳酸脱氢酶 ( L DH)、组织蛋白酶 D( CD)活性增高。而给予 L-Arg能减轻 To S晚期血压降低 ,并能减轻组织及血浆的上述损伤变化。 4结论 To

黄芪对肠系膜上动脉闭塞性休克过程中肺损伤的防治作用

探讨黄芪对脑系膜上动脉闭塞（SMAO）性休克时肺损伤的防治作用及其机制。方法复制家兔SMAO性休克模型，观察黄芪对入、出肺血及肺组织超氧化物歧化酶（SOD）、黄嘌呤氧化酶（XO）、丙二醛（MDA）及肺表面活性物质（PS）含量的影响，观察小肠及肺的病理变化。结果静脉给予黄芪注射液可使XO及MDA含量降低，且可防止SOD和PS减少，避免了休克及肺损伤的进行性加剧。结论SMAO休克过程中伴有肺损伤。黄芪通过抗脂质过氧化能减轻或在一定程度上防止休克肺的发生和发展。

缺血预处理对L-6TG大鼠肌母细胞缺血再灌注中细胞凋亡的影响

目的:探讨缺血预处理对L-6TG大鼠肌母细胞缺血再灌注中细胞凋亡的影响。方法:将培养的L-6TG大鼠肌母细胞随机分为3组:①正常对照组(C组),②缺血再灌注组(IR组),③缺血预处理组(IP组),观测了培养上清中LDH、细胞内SOD、XOD、Ca2+含量的变化;采用MTT法检测线粒体的功能;利用流式细胞仪和细胞DNA电泳结果检测细胞凋亡情况;采用免疫组织化学的方法检测bcl-2及Caspase-3的蛋白表达情况,结合自动图像分析系统对其结果进行定量分析;在光镜下观察细胞的形态学改变。结果:缺血预处理可显著降低L 6TG大鼠肌母细胞IR 4h后培养上清中LDH、细胞内XOD、Ca2+含量及凋亡细胞百分率,增加细胞内SOD活性及线粒体呼吸功能,DNA电泳无梯状条带出现,bcl-2及Caspase-3的表达明显下调,细胞损伤明显减轻。结论:缺血预处理可明显减轻L-6TG大鼠肌母细胞缺血再灌注后的细胞损伤和细胞凋亡,其机制可能与减轻氧化损伤、调节细胞内钙稳态、减轻线粒体损伤、减少Caspase-3表达有关。

超声造影剂制备的初步实验研究

①目的试制非离子型表面活性剂为包膜的超声造影剂,观察其基本的物理特征。方法以非离子型表面活性剂司班80和吐温80为材料,利用超声空化法,对超声造影剂的制备进行初步的实验研究。结果司班80与吐温80按5:1比例配制,产生的微气泡粒径均值为3.74μm,浓度达109/mL数量级。结论非离子型表面活性剂为材料制备的超声造影剂,微泡粒径和浓度均符合造影剂要求。