藻酸双酯钠对大鼠脑缺血再灌注后神经细胞保护作用的研究

目的探讨藻酸双酯钠(PSS)对脑缺血再灌注后神经细胞的保护作用.方法采用线栓法制作大脑中动脉阻断(MCAO)再灌注大鼠模型.PSS治疗组大鼠于再灌注即刻及再灌注24 h、48 h分别给予PSS(18.75 mg/kg)腹腔注射;对照组、假手术组和正常组均同时给予等量生理盐水腹腔注射.观察大鼠神经功能、脑梗死体积、组织学、超微结构和凋亡细胞数的改变.结果(1)PSS治疗组和对照组神经功能评分分别为(1.83±0.75)分和(2.83±0.75)分,脑梗死体积分别为(107.9±12.1)mm3和(150.3±30.5)mm3,两组比较差异有显著性(均P＜0.05);(2)PSS治疗组大鼠脑组织缺血损伤改变明显轻于对照组,神经细胞的组织学和超微结构接近正常;(3)PSS治疗组细胞凋亡数于再灌注后1 h和3 h与对照组相比,差异均无显著性(均P＞0.05),再灌注6 h、12 h、24h、48 h及72 h凋亡细胞数明显少于对照组(P＜0.05～0.01).结论PSS能明显减轻大鼠脑缺血再灌注后的神经功能障碍和神经细胞损害,缩小脑梗死体积,抑制神经细胞凋亡,从而对神经细胞具有保护作用.

神经节苷脂诱导人脂肪组织来源的基质细胞向神经细胞的分化

目的:探讨神经节苷脂诱导人脂肪组织来源的基质细胞向神经细胞分化的可能作用。方法:实验于2004-09/2005-09在华北煤炭医学院中心实验室完成。选取人体腹部皮下脂肪组织20mL,对脂肪组织提取物进行分离培养,分别采用对照组、神经诱导培养基组、神经诱导培养基加神经节苷脂100μmol/L和神经节苷脂100μmol/L组,对其进行诱导培养。采用倒置相差显微镜连续观察原代及传代后的细胞生长情况及形态变化。采用免疫组化法检测神经前体细胞的特异性标志神经巢蛋白,神经细胞的特异性标志神经元特异性烯醇化酶、微管联合蛋白2和神经胶质细胞的特异性标志胶质纤维酸性蛋白的表达。结果:①原代细胞情况:24h后大量细胞贴壁,呈宽大扁平的成纤维细胞形态,细胞核浆分界清楚,多为单核,随培养时间的延长,大部分细胞呈集落生长,并迅速增殖,集落大小不一,集落中的细胞呈典型的梭形细胞,集落之间互相靠近,一周后可达到80%融合,呈漩涡状排列。②传代细胞情况:呈圆形,悬浮状态,并很快贴壁,并分布均匀,与原代细胞相比,细胞形态更为单一,呈典型梭形。③神经细胞特异性标志测定:对照组和神经节苷脂100μmol/L组仅见极少量的神经前体细胞的特异性标志神经巢蛋白表达阳性,神经元特异性烯醇化酶、微管联合蛋白-2和胶质纤维酸性蛋白表达阴性。神经诱导培养基组和神经诱导培养基组加神经节苷脂组于诱导后1h出现Nestin表达阳性,5h出现神经元特异性烯醇化酶、微管联合蛋白2和胶质纤维酸性蛋白表达阳性。在一定时间内,上述指标表达强度随时间逐渐增加,但神经诱导培养基组加神经节苷脂组与神经诱导培养基组比较,神经巢蛋白、神经元特异性烯醇化酶和微管联合蛋白2表达阳性率增加,胶质纤维酸性蛋白表达阳性率降低,差异有显著性意义(P<0.05)。结论:神经节苷脂具有增强神经诱导培养基的诱导作用,并促进人脂肪组织来源的基质细胞向神经细胞分化。

维甲酸联合脑源性神经生长因子体外诱导人脐血间充质干细胞向神经样细胞定向分化的实验研究

目的探讨脐血间充质干细胞(MSCs)向神经样细胞定向诱导分化的条件及方法,以明确其神经分化潜能。方法将人脐血MSCs体外培养扩增、保存后,取第5代的MSCs分别用维甲酸(RA,RA组)、维甲酸联合脑源性神经生长因子(BDNF,RA+BDNF组)诱导方法向神经样细胞诱导,诱导分化期间观察细胞形态变化,同时设对照组,对照组不加任何诱导分化剂,比较3组巢蛋白(nestin)、神经元特异性烯醇化酶(NES)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达差异。结果两种不同诱导方法均能诱导细胞发生典型变化,对照组未发现神经样细胞生长。免疫组化法显示3组诱导后均表达nestin、NSE、GFAP,BDNF+RA组的表达量多于RA组。Real-time RT-PCR显示诱导组及对照组均有NSE mRNA、GFAP mRNA表达,但RA组、RA+BDNF组诱导后表达上调(P<0.05),且RA+BDNF组较单纯RA组上调明显(P<0.05)。结论脐血MSCs经两种神经营养因子诱导均可分化为神经样细胞,并表达神经元特异性标志物,其中添加BDNF后较单纯应用RA诱导效果好。

缺血性脑卒中患者入院时白细胞水平与卒中类型及其神经功能缺损关系的研究

目的研究缺血性脑卒中患者入院时白细胞水平在不同卒中类型中的变化规律及白细胞水平与入院神经功能缺损程度的关系。方法收集急性缺血性脑卒中患者910例,按照国际TOAST卒中分型标准将其分为大动脉粥样硬化性脑卒中(large artery arteriosclerosis,LAA)425例、小动脉闭塞性脑卒中(small artery occlusion,SAO)370例、心源性栓塞性脑卒中(cardiac embolism,CE)88例、其他病因明确性脑卒中(other certain,OC)及原因不明性脑卒中(undetermined etiology,UE)27例,对所有患者进行入院神经功能缺损评定,并与入院白细胞水平进行对照分析。结果心源性栓塞性脑卒中组白细胞水平最高,神经功能缺损最严重;大动脉粥样硬化性脑卒中组次之;小动脉闭塞性脑卒中组白细胞水平大致正常,神经功能缺损较轻或无缺损。结论缺血性脑卒中患者入院时的白细胞水平可能与其神经功能缺损程度相关,且白细胞水平随卒中类型的不同而变化。

急性一氧化碳中毒迟发性脑病大鼠海马神经细胞凋亡及Erk1/2,Bad蛋白的表达

目的:研究急性一氧化碳(CO)中毒迟发性脑病(DEACMP)模型大鼠海马神经细胞凋亡及细胞外信号调节蛋白激酶1/2(Erk1/2)、Bcl-2/Bcl-xl相关凋亡蛋白(Bad)的表达,探讨DEACMP可能的发病机制.方法:体质量240～280g雄性SD大鼠48只,随机均衡分为对照组、染毒后1,3,7,14,21d组.分次腹腔注射CO纯品气体制备DEACMP模型,观察大鼠染毒后表现,并动态监测大鼠尾血碳氧血红蛋白(COHB)浓度.取各组大鼠海马组织制备石蜡病理切片,分别采用苏木精-伊红(HE)染色、末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧尿苷酸缺口末端标记(TUNEL)法、免疫组织化学法观察海马神经元形态学变化、凋亡细胞数量,及Erk1/2,Bad蛋白的表达.结果:染毒后大鼠昏迷时间较长,COHB长时间(>16h)维持在高水平(>50%);染毒后7～14d海马神经细胞出现明显变性坏死;凋亡细胞数在第7～14d达到高峰(P<0.05);Erk1/2于染毒后1～21d表达水平随时间延长逐渐减低(P<0.05);Bad表达于染毒后1d升高,3d达峰值后逐渐降低,但至21d时表达仍高于正常对照组(P<0.05).结论:CO中毒后Erk1/2表达下调、Bad早期表达上调后又回落,提示Erk1/2、Bad蛋白介导了海马区神经元的凋亡,参与了DEACMP的发生.

慢性酒精中毒大鼠海马神经元凋亡及caspase-8、AIF的表达升高

目的观察慢性酒精中毒大鼠海马神经元凋亡及caspase-8、AIF蛋白表达情况,探讨慢性酒精中毒脑损伤可能的发病机制。方法清洁级8周龄雄性SD大鼠45只,随机分为对照组和酒精组,采用逐步增加浓度自由饮方法建立慢性酒精中毒大鼠动物模型。应用Morris水迷宫检测大鼠学习记忆功能,采用HE染色法观察海马神经元病理形态学改变,TUNEL法、免疫组化法检测凋亡神经元数量及caspase-8、AIF蛋白的表达。结果酒精组可见海马神经元数目缺失及细胞变性和损伤,其凋亡神经元数和caspase-8、AIF蛋白表达阳性细胞数均高于对照组(P<0.01)。结论慢性酒精中毒大鼠海马存在明显神经元凋亡,伴有caspase-8、AIF蛋白表达增加,通过caspase依赖性和非依赖性两种通路发生细胞凋亡可能是其病理基础之一。

不同剂量的神经节苷脂对人脂肪组织来源的基质细胞分化为神经组织细胞的影响

目的探讨不同剂量的神经节苷脂(GM1)对人脂肪组织来源的基质细胞(ADSCs)分化为神经组织细胞的影响。方法分离培养人ADSCs,采用神经诱导培养基(NIM)加不同剂量的GM1对各组进行诱导培养。实验分6组:对照组,只加改良Eagle培养液(α-MEM);A组,神经诱导培养基(NIM);B组,NIM加50μmol/LGM1;C组,NIM加100μmol/LGM1;D组,NIM加200μmol/LGM1;E组,NIM加400μmol/LGM1。诱导后1h、5h、1d和5d倒置相差显微镜下连续观察各组细胞生长情况和形态变化;免疫组化法鉴定各组神经巢蛋白(Nestin)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、微管联合蛋白-2(MAP2)及胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达情况。结果(1)诱导后,ADSCs可分化为神经细胞,在一定的时间内,分化的神经细胞数逐渐增加,于诱导后5h、1d和5dE组增加更明显(均P<0.05)。(2)各组Nestin的表达随时间逐渐增强,1d时表达最高,5d时表达减弱,除1h外,其余各时间点E组表达最高(均P<0.05);NSE和MAP2的表达随时间逐渐增强,5d时表达最高,各时间点E组表达最高(均P<0.05);GFAP的表达随时间逐渐增强,5d时表达最高,各时间点E组表达最低(均P<0.05)。结论GM1可促进人ADSCs向神经细胞分化,并呈剂量依赖性。

脂肪组织来源的基质细胞向神经细胞分化及其在脑缺血疾病治疗中的应用进展

近年来，细胞移植治疗脑缺血疾病已成为研究热点，多种细胞已被用于基础研究及临床治疗中。目前常用的种子细胞是骨髓基质细胞（bone marrow stromal cells，BMSCs），它在一定的条件下可分化为成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、肌母细胞和神经细胞。但骨髓穿刺具有创伤性，有一定的痛苦，且只能得到少量的细胞（大约1MSC／10s基质干细胞），需经体外大量扩增才能满足临床需要，是一个费时、昂贵、并有细胞污染和丢失风险的过程，因此。广泛、大量使用颇为受限。

胫后神经体感诱发电位对早期脑梗死临床价值的研究

目的研究胫后神经体感诱发电位 (somatosensoryevokedpotential,SEP)对早期脑梗死的诊断价值。 方法病例组选择发病早期脑梗死患者 39例 ,男 2 4例 ,女 15例 ,平均年龄 (5 9.0± 8.2 )岁。对照组为 40例健康人。所有患者发病 2 4小时内均完成头颅CT及胫后神经SEP检查 ,全部患者 3天后复查头颅CT。结果 39例脑梗死患者中 ,31例显示异常 ,SEP异常率为 79.5 %。SEP异常与脑梗死部位有关 ,其中丘脑梗死、顶叶梗死、脑干梗死、基底节区梗死 ,凡影响到感觉中枢或感觉传导通路部位的脑梗死患者的SEP异常率高。结论胫后神经SEP在脑梗死早期即可出现波形异常 。

养血清脑颗粒对阿尔茨海默病模型大鼠海马神经细胞凋亡的影响

目的:观察养血清脑颗粒对阿尔茨海默病模型大鼠海马神经细胞凋亡的影响。方法:在双侧海马CA1区缓慢注射Aβ和生理盐水制成模型。对照组在双侧海马各注射生理盐水2μl;模型组在双侧海马各注射Aβ1～42各2μl;给药组在双侧海马各注射Aβ1～42各2μl,术前3 d及术后每天用养血清脑颗粒灌胃24mg/kg/d,共灌胃28d。结果:养血清脑颗粒对Aβ诱导的AD模型大鼠脑海马组织Bcl-2基因的表达影响不大,但对Bax、casepase-3基因表达有影响。结论:养血清脑颗粒主要通过抑制促凋亡基因Bax以及Caspase-3的表达,从而抑制Aβ诱导的AD模型大鼠脑海马的神经细胞凋亡,发挥神经细胞的保护作用,而对凋亡抑制基因Bcl-2表达影响不大。

维甲酸联合神经生长因子体外诱导人脐血间充质干细胞向神经样细胞定向分化的实验研究

目的:探讨脐血间充质干细胞(MSCs)向神经样细胞定向诱导分化的条件及方法,以明确其神经分化潜能。方法:将人脐血间充质干细胞体外培养扩增、保存后,取第5代的MSCs分别用维甲酸(RA)、维甲酸联合神经生长因子(NGF)诱导方法向神经样细胞诱导,诱导分化期间观察细胞形态变化,并比较表达神经元特异性烯醇化酶(NES)mRNA、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)mRNA的差异。结果:两种不同诱导方法均能诱导细胞发生典型变化,对照组未发现神经样细胞生长。免疫组化法显示三种诱导方法诱导后均表达Nestin、NSE、GFAP,NGF+RA组多于RA组。Real-time RT-PCR显示诱导组及对照组均有NSE mRNA、GFAP mRNA表达,但两种诱导方法诱导后表达上调(P<0.05),添加NGF较单纯RA组上调明显(P<0.05)。结论:脐血MSCs经两种神经营养因子诱导法均可分化为神经样细胞,并表达神经细胞特异性标志物,其中添加NGF后较单纯应用RA诱导效果好。

不同时间窗吻合大鼠坐骨神经后应用CNTF对脊髓运动神经元内Ca^(2+)的作用

目的:研究睫状神经营养因子(CNTF)对坐骨神经损伤延期手术后对相应脊髓Ca2+作用和脊髓神经损伤的再生修复作用.方法:大鼠双侧坐骨神经切断后延期即刻、3,7,14,21d后行神经外膜端-端吻合术,给予CNTF治疗.吻合术后饲养3d后处死检测脊髓Ca2+浓度,饲养28d后处死行Tunel染色凋亡细胞计数、HE染色观察L4～6脊髓神经元形态、神经吻合口部位神经纤维镀银染色形态学观.结果:用药组TUNEL阳性细胞数目比未用药组、盐水组少,用药组在3个大组中凋亡数目少且均与其他3组有统计学差异(P<0.05),用药组7d凋亡数目较盐水组、非用药组低;Ca2+质量浓度较未用药组、盐水组增幅减低;用药组即刻、3d、14d、21d亚组28d处死时可见部分神经纤维通过吻口,7d通过吻合口更多,但排列不整齐,而未治疗组和对照组的神经纤维通过吻口数量较治疗组不明显.结论:坐骨神经在不同时间切断吻合后均可诱导脊髓前角运动运动神经元的凋亡;大鼠坐骨神经离断吻合后,不同时间窗吻合术后应用CNTF可以降低急性期脊髓组织Ca2+离子水平,可能起到减少脊髓运动神经元凋亡的发生、保证周围神经轴索再生数量的作用.

脑梗死患者血清瘦素、胰岛素敏感指数与梗死体积及神经功能缺损的关系

目的:观察瘦素、胰岛素敏感指数在脑梗死患者急性期血清水平变化,探讨其与患者梗死体积及神经功能缺损的关系。方法:选择华北煤炭医学院附属医院2004-02/2005-02收治的86例急性脑梗死患者为观察对象。测定其急性期血清中的瘦素、胰岛素、血糖、胰岛素敏感指数的水平,与同期健康体检者31例对照。将脑梗死患者按梗死体积分为小梗死组(<5cm3),中梗死组(5～15cm3),大梗死组(>15cm3);根据神经功能缺损程度评分分为轻度损伤组(0～15分),中度损伤组(16～30分),重度损伤组(31～45分),比较不同梗死体积和损伤程度时瘦素水平、胰岛素抵抗程度的变化,并进行血清瘦素与胰岛素抵抗之间的直线相关和回归分析。结果:按实际处理分析,117例观察对象全部进入结果分析。①脑梗死组的血糖、瘦素水平显著高于对照组[(7.05±2.22),(5.39±0.88)mmol/L;(17.85±15.09),(9.21±4.76)μg/L,(P<0.05)],胰岛素、胰岛素敏感指数显著低于对照组[(11.22±3.35),(19.75±8.06)mIU/L;-0.94±0.52,-1.89±0.79,(P<0.05)]。②脑梗死体积越大,脑梗死患者血清中瘦素、胰岛素、血糖越高(F=15.79～12.00,P<0.05),胰岛素敏感指数越低(F=24.27,P<0.05)。③神经功能缺损程度越重,脑梗死患者血清中瘦素、胰岛素、血糖越高(F=14.28～11.00,P<0.05),胰岛素敏感指数越低(F=23.24,P<0.05)。④直线与相关回归分析表明瘦素与胰岛素、血糖呈显著正相关(r=0.53,0.26,P<0.001),与胰岛素敏感指数呈显著负相关(r=-0.66,P<0.001)。结论:①脑梗死体积越大,神经功能缺损评分越高,瘦素水平越高,胰岛素抵抗程度越重,提示瘦素抵抗、胰岛素抵抗可加重缺血性脑损害。②瘦素水平越高,胰岛素抵抗程度越重,脑梗死体积越大,神经功能缺损评分越高,提示观测脑梗死患者血清瘦素水平及胰岛素抵抗程度对脑组织损伤程度及预后判断有一定的价值。③瘦素抵抗与胰岛素抵抗可能相互促进、相互影响促进脑梗死的发生,加重病情。

复方麝香注射液对急性脑卒中所致意识障碍患者体温及神经功能缺损的影响

目的观察复方麝香注射液对急性脑卒中所致意识障碍患者体温及神经功能缺损的影响。方法将84例急性脑卒中后意识障碍患者单盲随机分为2组,治疗组44例在常规治疗基础上予复方麝香注射液20 mL加入0.9%氯化钠注射液250 mL中静脉滴注,每日1次,7 d为1个疗程。对照组40例予单纯西医常规治疗。以入院时所测体温的平均值为基础值,观察每日体温增长情况;治疗前后统计脑卒中患者临床神经功能缺损程度积分。结果2组治疗第1 d和第2 d体温增长情况比较差异无统计学意义(P>0.05),在第3 d后,治疗组体温增长且呈递减趋势,与对照组同期比较差异均有统计学意义(P<0.05),说明治疗组可有效控制体温;2组治疗后神经功能缺损程度评分均减少,与本组治疗前比较差异均有统计学意义(P<0.05);2组治疗后神经功能缺损程度评分比较差异有统计学意义(P<0.05),治疗组少于对照组。结论在西医常规治疗基础上采用复方麝香注射液治疗急性脑卒中所致意识障碍可起到控制体温,改善神经功能缺损。

自主神经兴奋性在不同部位脑梗死时对脑血流动力学的影响

1目的 研究不同部位脑梗死时自主神经兴奋性对脑血流动力学的影响。 2方法 不同部位脑梗死患者和健康查体人员共 96例 ,并在左耳给予 30℃水 5 0 ml刺激前庭诱发其自主神经反应 ,于刺激前、后分别测定颅内 9条主要脑血管的血流动力学指标。3结果 刺激前、后测定的各脑血管血流动力学指标均无明显变化 (P>0 .0 5 ) ,对脑梗死部位与刺激前、后脑血流动力学指标 ,右大脑前动脉收缩峰速度、年龄、刺激前左大脑后动脉舒张末速度、刺激后右大脑前动脉舒张末速度 4项有明显相关性 (P<0 .0 5 ) ;对刺激后无眩晕组与刺激前左大脑前动脉舒张末速度 3项呈相关性 (P<0 .0 5 ) ;而刺激后出现眩晕组则筛选出刺激后右大脑前动脉收缩峰速度、刺激后右侧椎动脉收缩峰速度及右侧椎动脉舒张末速度、和刺激前右大脑中动脉收缩峰速度等 4项指标显著相关 (P<0 .0 5 )。 4结论 脑血管对于自主神经兴奋性的改变具有很好的协调功能 ,但若病灶影响了右大脑前动脉血流收缩峰速度和舒张末速度、左椎动脉血流舒张末速度和右椎动脉的收缩峰速度可能较易并发应激性自主神经反应 ;左大脑前动脉舒张末速度和右椎动脉的收缩峰速度可能较易并发应激性自主神经反应 ;左大脑前动脉舒张末速度、左大脑后动脉血流舒张末速度较高时 。

人体神经平衡控制系统电生理改变与脑血流动力学的相关性研究

1目的 研究人体神经平衡控制系统电生理与脑血管血流动力学及眩晕之间的关系。2方法 测定 45例健康人员的神经平衡控制系统电生理指标和 9条主要脑血管的血流动力学状态 ,同时对眩晕病史等临床指标进行统计学分析。3结果 睁眼左面低位置时 ,左眼慢相幅度和右耳灌注 44℃水睁眼时 ,右眼快相幅度及双侧兴奋性不对称比 (CP) ,异常时 ,则以非中枢神经系统实质性损害所致眩晕的可能性大 ;大脑中动脉的血流动力学改变主要引起位置试验和 /或凝视试验改变 ;大脑前动脉可引起温度试验、凝视试验、位置试验和视动试验改变 ;大脑后动脉可引起凝视试验、温度试验、视动试验变化 ;基底动脉可引起位置试验、凝视试验、温度试验改变 ;椎动脉则主要与温度试验和注视指数有关。 4结论 人体神经平衡控制系统电生理改变与脑血流动力学有密切关系。

局灶性脑缺血再灌注大鼠海马CA1区神经元凋亡研究

目的观察大鼠局灶性脑缺血再灌注(ischemiareperfusion,I/R)损伤后海马CA1区神经元凋亡、TUNEL阳性细胞变化,以及凋亡相关蛋白Bcl-2与Bax蛋白的表达情况。方法将健康雄性SD(Sprague-Dawley)大鼠随机分为假手术组和I/R组,每组再分为缺血再灌注后3、6、12、24、48、72 h亚组。应用免疫组化方法检测再灌注后不同时间点大鼠海马CA1区神经元凋亡基因Bcl-2和Bax蛋白的表达及Bcl-2/Bax比值变化,采用原位细胞凋亡检测(TUNEL)技术检测凋亡阳性细胞数。结果各组非缺血侧相应区域神经元胞质中Bcl 2均有微弱表达。I/R组缺血侧海马CA1区于再灌注3 h开始出现Bcl-2和Bax蛋白微弱表达,随再灌注时间延长神经元内Bcl-2表达逐渐增强,再灌注24 h后Bcl-2表达达高峰,假手术组与I/R组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 I/R损伤后海马CA1区神经元不仅存在变性坏死,还存在明显的细胞凋亡且细胞凋亡在大鼠I/R损伤中发挥重要作用;I/R可诱导海马CA1区细胞凋亡基因Bcl 2和Bax蛋白表达,且其表达呈一定规律。