游离SiO2对肺泡巨噬细胞泡沫化的作用研究

目的脂质代谢紊乱所致细胞泡沫化是否参与矽肺的发生发展仍尚未阐明,文中探讨游离二氧化硅(SiO_2)对大鼠肺泡巨噬细胞株NR8383细胞泡沫化的诱导作用。方法体外培养NR8383细胞,分为对照组(常规培养的细胞)、SiO_2组(50μg/mL SiO_2刺激)、氧化低密度脂蛋白组(50μg/mL ox-LDL刺激)以及模型组(50μg/mL SiO_2和ox-LDL刺激),分别培养36 h。采用细胞增殖毒性检测试剂盒(MTS)检测ox-LDL对细胞存活率的影响;油红O染色镜下观察脂质蓄积情况;酶联免疫法检测细胞中总胆固醇、游离胆固醇和胆固醇酯表达情况;采用Western blot和RT-PCR技术分别检测过氧化物酶增殖体激活性受体(PPARγ)和CD36基因和蛋白的表达情况。结果随着ox-LDL浓度增高,细胞存活率呈现递增趋势。与对照比较,在50μg/mL时细胞存活率达到最大[(1.501±0.201)%],且差异具有统计学意义(P<0.05)。SiO_2组、ox-LDL组和模型组有泡沫细胞产生,但以模型组更为明显,同时也可以观察到大量吞噬的SiO_2颗粒。与ox-LDL组组TC、FC、CE以及CE/TC[(14.195±2.260)μg/mg、(7.722±0.690)μg/mg、(6.473±1.707)μg/mg、45.057%]比较,模型组均增加[(35.764±4.226)、(10.049±0.689)、(25.715±4.243)μg/mg、71.642%],差异有统计学意义(P<0.05)。结论游离SiO_2可以促使巨噬细胞脂质代谢紊乱,加剧细胞泡沫化,且PPARγ和CD36可能在此过程中起到重要的调节作用。

敲低HSC-LX2人肝星状细胞钙网蛋白引起细胞内Ca^(2+)水平升高并促进细胞凋亡

目的探讨沉默钙网蛋白(CALR)基因对人肝星状细胞(HSC-LX2)凋亡及细胞内Ca^(2+)水平的影响.方法设计靶向CALR的小干扰RNA(siRNA),脂质体法转染至HSC-LX2细胞,筛选出敲低CALR的HSC-LX2细胞.采用异硫氰酸荧光素标记的膜联素V/碘化丙啶(annexinⅤ-FITC/PI)双标记结合流式细胞术检测细胞凋亡,Fluo 3-AM钙离子荧光探针负载结合激光共聚焦显微镜观察细胞内Ca^(2+)浓度变化,反转录PCR检测细胞CALR、B细胞淋巴瘤分子2(Bcl2)、Bcl2相关X蛋白(BAX)的mRNA水平,Western blot法检测CALR、BAX、Bcl2蛋白表达.结果敲低HSC-LX2细胞CALR后,细胞凋亡率显著增加,Ca^(2+)浓度也有明显升高,BAX的表达显著增加,Bcl2表达明显降低,且BAX/Bcl2比值显著升高.结论敲低HSC-LX2细胞CALR的表达会增加细胞Ca^(2+)水平,上调BAX/Bcl2的比值,促进细胞凋亡.