参附注射液预处理对大鼠急性脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的观察参附注射液预处理大鼠发生脑缺血再灌注时其神经功能、梗死脑组织体积、形态及显微结构等方面的变化,探讨参附注射液预处理对脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法 120只健康雄性SD大鼠随机分为5组,即假手术组,缺血再灌注组(模型组),参附注射液预处理高、中、低剂量组(腹腔注射给药7 d,每天1次,第7天腹腔注射2 h后制作模型;给药剂量分别为20、10、5 mg/kg)。采用线栓法制作大脑中动脉缺血2 h再灌注模型,Longa5分制评分评价大鼠行为学改变,TTC染色法检测脑梗死体积,再灌注24 h电镜观察缺血边缘区脑组织超微结构的变化。结果与假手术组对比,模型组大鼠脑组织梗死体积增大,差异有显著性(均P<0.05);与模型组对比,参附注射液预处理各组大鼠脑梗死体积均呈现不同程度的减少,差异具有统计学意义(P<0.05,或P<0.01);电镜下,参附注射液预处理组大鼠脑组织超微结构损伤较模型组明显减轻,以高剂量组效果最为明显。结论参附注射液预处理对大鼠急性脑缺血再灌注损伤具有保护作用。

延迟性脑缺血后处理对大鼠海马CA1区神经元及超微结构的影响

目的:探讨延迟性脑缺血后处理对大鼠海马CA1区神经元及超微病理改变的影响。方法:制作改良四动脉结扎全脑缺血模型,SPF级成年雄性SD大鼠随机分为:假手术组、缺血再灌注(I/R)组、延迟性脑缺血后处理(PostC)组。通过焦油紫染色方法观察神经元生存密度,透射电镜技术观察大鼠海马CA1区超微病理改变。结果:焦油紫染色显示I/R组海马CA1区神经元生存密度较低、电镜下病变最严重,可见神经元、微血管、星形胶质细胞、轴突的超微病理改变,并出现凋亡神经元;PostC组海马CA1区神经元生存密度明显高于I/R组(P<0.05),电镜下神经元及星形胶质细胞、微血管、轴突的超微病理改变显著减轻,未见明显凋亡神经元。假手术组海马CA1区神经元生存密度较高,细胞超微结构正常。结论:延迟性脑缺血后处理促进大鼠海马CA1区神经元的生存,抑制全脑缺血后大鼠海马CA1区神经元的凋亡样改变,大鼠CA1区超微病理变化明显得到改善。

牛膝预处理对心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的研究牛膝(AB)预处理在心肌缺血再灌注损伤(MIRI)中的保护作用。方法 60只SPF级健康成年雄性Wistar大鼠随机分为3组:假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(I/R组)、AB预处理组(I/R+AB组)。通过电子显微镜和光学显微镜观察心肌的变化,采用伊文思蓝加氯化三苯基四氮唑(TTC)双染法测定心肌梗死面积,采用ELISA法测定炎症因子白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量,采用免疫组织化学法检测Bax、Bcl-2的表达,采用Western blot法检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2及磷酸化糖原合成酶激酶3β(p-GSK-3β)的表达情况。结果与I/R组相比,AB预处理可以显著减少心肌梗死面积(P<0.01),减轻心肌损伤;AB预处理使心肌IL-1β、TNF-α的含量分别降低到(52.09±0.94)ng/L和(461.85±25.59)ng/L(P<0.05);AB预处理抑制Bax的表达(P<0.05),促进Bcl-2、p-GSK-3β的表达(P<0.05)。结论 AB预处理可以抑制炎症反应、减少心肌梗死面积和细胞凋亡、减轻心肌损伤,其机制可能与促进p-GSK-3β表达,进而阻止线粒体通透性转移孔开放有关。

木犀草素预处理对H_2O_2诱导大鼠心肌H9C2细胞损伤的保护机制研究

为了探讨木犀草素能否通过再灌注损伤挽救激酶(Reperfusion injury salvage kinase,RISK)细胞信号通路发挥抗心肌氧化应激损伤保护作用,本实验分别用1、50、100、150μmol/L的木犀草素预处理大鼠心肌来源的H9c2细胞,再使用650μmol/L的H_2O_2制作氧化应激损伤模型。利用MTT法(四甲基偶氮唑盐比色法)检测细胞存活率,然后用最适浓度的木犀草素预处理H9c2细胞并利用激光共聚焦显微镜技术检测线粒体膜电位,Western blot检测P-ERK1/2、P-Akt、P-GSK-3β以及凋亡相关蛋白细胞色素C。最后我们发现不同浓度的木犀草素预处理均能提高细胞存活率,其中在100μmol/L时达到最佳效应。与H_2O_2组相比,100μmol/L的木犀草素预处理可以使TMRE(四甲基罗丹明乙酯)强度降低程度明显减轻,对抗H_2O_2引起的细胞氧化损伤。同时木犀草素预处理可以降低细胞色素C表达,使P-GSK-3β、P-Akt、P-ERK1/2表达升高,渥曼青霉素(PI3K抑制剂)和PD98059(ERK1/2抑制剂)可以阻断这种作用。因此我们认为木犀草素预处理可以减轻H_2O_2引起的氧化应激损伤,这一作用可能是通过RISK信号通路增加P-GSK-3β表达,抑制m PTP开放实现的。

金属材料修复临界性骨缺损的实验研究进展

金属支架材料是近年来新兴的骨组织工程支架材料之一,包括可降解金属支架材料和不可降解金属支架材料。金属支架材料生物相容性良好,耐腐蚀性强,力学性能优,相比传统支架材料,其机械强度更高,可为新组织生长提供良好的支撑,适用于临界性骨缺损(CSD)的修复,虽处于实验研究阶段,临床应用较少且时间较短,还有待进一步研究,但不可否认其在修复CSD方面具有巨大的优势和潜力,未来可能成为骨科治疗CSD的植入材料。笔者对目前常用的金属支架材料的种类及特性进行简要综述。

乙酰化微管蛋白α在肺、肝和肾纤维化中的表达及其病理意义

目的研究乙酰化微管蛋白α(Ac-α-Tub)在动式染尘矽肺大鼠肺纤维化模型、单侧输尿管结扎(UUO)肾纤维化模型和硫代乙酰胺(TAA)致肝纤维化模型中的表达及其病理意义。方法采用动式染尘构建矽肺大鼠模型,采用UUO构建肾纤维化模型,采用TAA构建肝纤维化模型。采用免疫组织化学染色观察Ac-α-Tub及波形蛋白(vimentin)在组织中的差异表达,采用HistoQurst图像分析软件对免疫组织化学结果进行分析。结果随着染尘时间的延长,vimentin的阳性表达率明显上调,而Ac-α-Tub的阳性表达率明显下调;在肝、肾纤维化中,随着造模时间的延长,vimentin和Ac-α-Tub的阳性表达率均明显上调。结论 Ac-α-Tub在肺、肝和肾纤维化中阳性细胞的定位及临床病理意义均具有差异,其缺失表达可能提示肺纤维化进展,而在肝、肾纤维化过程中则可能起到相反作用。

局部解剖学实验教学视频应用的调查与分析

对医学全日制本科临床专业大学三年级进行局部解剖学实验教学视频应用并开展调查与分析,调查围绕局部解剖学实验视频的播放内容、时间、效果等情况,分析局部解剖学教学视频在实验教学中的作用及学生的认同程度,以改进局部解剖学实验的教学方法,提高教学质量。

逐瘀通脉胶囊联合针刺对脑卒中大鼠皮质区病理变化的影响

目的观察逐瘀通脉胶囊联合针刺对脑卒中大鼠皮质区病理变化的影响。方法将50只健康雄性SD大鼠随机分为5组:对照组(A)、模型组(B)、通脉组(C)、针刺组(D)及针药联合组(E),采用两血管法建立脑卒中模型,苏木精—伊红染色法(hematoxylin-eosin staining,HE)观察各组大鼠脑皮质病理改变,高倍镜下图像分析软件计数,检测神经元生存密度。结果光镜下可见B组较A组皮质区的细胞排列紊乱,且有坏死软化病灶,神经元出现不同程度的细胞变性,神经元生存密度下降;C、D、E组较B组皮质区细胞坏死减少,变性程度减轻,血管及血管周围间质水肿好转,神经元生存密度增加;E组与C、D组比较,脑皮质区细胞排列较密集,部分锥体细胞胞体突起明显,大部分缺血神经元病理变化明显改善,神经元生存密度明显增加。结论逐瘀通脉胶囊联合针刺可以明显改善大鼠脑皮质区神经细胞病理变化,增加神经元生存密度。

掌背筋膜皮瓣修复2~5指近节圆形大面积皮肤缺损

目的探讨应用掌背筋膜皮瓣修复2~5指近节圆形大面积皮肤缺损的临床疗效。方法2014年8月至2022年12月唐山市第二医院收治25例(25指)近节皮肤圆形大面积缺损(面积约3 cm×4 cm~4 cm×6 cm),其中男22例,女3例;年龄18~65岁,平均(40.0±2.5)岁;致伤原因:压砸伤20例,绞伤5例。25例全部合并近节指骨粉碎骨折、神经血管损伤,其中急诊新鲜的近节圆形皮肤缺损5例,一期清创骨折复位内固定、神经血管肌腱修复手术后,皮肤坏死的20例。首先创面彻底清创,骨折复位内固定,神经血管肌腱修复后,然后于相应的手掌背侧切取筋膜皮瓣逆向翻转修复手指近节创面。结果25例患者均获得随访,随访时间3~18个月,平均(8.0±1.5)个月。术后皮瓣全部顺利成活,功能及外形均满意。根据中华医学会手外科学会上肢部分功能评定试用标准,优10指,良3指,差12指,优良率为50%。结论掌背筋膜皮瓣修复2~5指近节圆形大面积皮肤缺损,简单、实用,供区损伤小,成活率高,是一种有效可行的手术方法。

RGD多肽修饰多孔钽可激活MG63细胞整合素/黏着斑激酶信号通路

背景:在材料表面复合RGD多肽可诱导成骨细胞整合素基因的表达,促进成骨细胞黏附在生物材料的表面并分化成熟,促进新骨形成。目的:分析RGD多肽修饰国产多孔钽后对MG63细胞整合素/黏着斑激酶信号通路的影响。方法:制备RGD多肽修饰的多孔钽材料。将MG63细胞分别接种于多孔钽、RGD多肽修饰的多孔钽材料表面,以单纯培养的MG63细胞为空白组,培养1,3,5,7 d时,采用CCK-8法检测细胞增殖;培养1,3,5 d时,倒置显微镜下观察细胞生长状态;培养3,5 d时,扫描电镜观察细胞黏附;培养5 d时,采用Western-blot与RT-PCR法检测Ⅰ型胶原、整合素β1与黏着斑激酶表达。结果与结论:①RGD修饰组培养3,5,7 d的细胞增殖快于多孔钽组、空白组(P<0.05),多孔钽组各时间点细胞增殖与空白组比较差异无显著性意义(P>0.05);②倒置显微镜显示,培养1 d时,多孔钽组、RGD修饰组细胞贴附在材料边缘,细胞数量随着培养时间的延长逐渐增加,其中RGD修饰组细胞数量及密集程度优于多孔钽组;③扫描电镜显示,培养3 d时,多孔钽组、RGD修饰组材料表面均可见细胞黏附生长,细胞在材料孔壁及孔隙内黏附生长,伸出伪足嵌入孔洞内;5 d时,细胞分泌大量细胞外基质,细胞通过基质相互连接并逐渐覆盖材料表面,其中RGD修饰组细胞生长状态、基质分泌及细胞覆盖面积优于多孔钽组;④Western-blot检测显示,RGD修饰组Ⅰ型胶原、整合素β1蛋白表达高于多孔钽组、空白组(P<0.05),多孔钽组Ⅰ型胶原、整合素β1、黏着斑激酶蛋白表达高于空白组(P<0.05);⑤RT-PCR检测显示,RGD修饰组Ⅰ型胶原、整合素β1与黏着斑激酶mRNA表达高于多孔钽组、空白组(P<0.05),并且多孔钽组高于空白组(P<0.05);⑥结果表明,RGD多肽修饰多孔钽后可上调细胞膜上Ⅰ型胶原、整合素β1表达激活整合素/黏着斑激酶信号通路,促进细胞黏附、生长。

RECK与MMP-9在人骨肉瘤组织中的表达及相关性分析

目的探讨伴有kazal域的富含半胱氨酸的逆转诱导蛋白(RECK)与基质金属蛋白酶9(MMP-9)在人骨肉瘤组织中的表达及相关性。方法选取唐山市人民医院2001年1月~2010年12月临床及病理资料完整存档的人骨肉瘤组织标本34例为观察组,另取临床及病理资料完整存档的骨软骨瘤组织标本34例为对照组,采用免疫组织化学法检测RECK和MMP-9,采用定量PCR法检测RECK和MMP-9的mRNA,并分析指标相关性。结果观察组RECK阳性率(58.8%)低于对照组(91.2%),而MMP-9阳性率(64.7%)高于对照组(11.8%),差异有统计学意义(P<0.05)。RECK阳性率、RECK的mRNA表达、MMP-9阳性率、MMP-9的mRNA表达在年龄、性别、病发部位方面比较,差异无统计学意义(P>0.05)。RECK阳性率、RECK的mRNA表达、MMP-9阳性率、MMP-9的mRNA表达在转移、复发以及生存时间方面比较,差异有统计学意义(P<0.05)。RECK与人骨肉瘤组织呈明显负相关(r=-0.561,P=0.000)。MMP-9与人骨肉瘤组织呈明显正相关(r=0.613,P=0.000)。结论 RECK可抑制MMP-9表达,发挥抑癌作用,有望成为未来诊断以及治疗人骨肉瘤的潜在靶标。

同指指固有动脉背侧分支皮瓣与邻指皮瓣瓦合修复末节脱套伤

目的探讨采用同指指固有动脉背侧分支皮瓣与邻指皮瓣瓦合修复末节脱套伤的临床效果。方法2010年6月至2020年12月唐山市第二医院应用同指指固有动脉背侧分支岛状皮瓣联合邻指皮瓣修复30例(30指)新鲜末节脱套伤(伴或不伴末节指骨骨折),其中男18例,女12例;年龄16~60岁,平均(39±3)岁。采用中华医学会手外科学会上肢部分功能评定试用标准进行疗效评定。结果术后30例患者皮瓣全部顺利成活。28例获得完整随访,随访时间3~18个月,平均(12±1)个月,手指外形及功能非常满意。上肢功能评定,优29例,良1例(感染),优良率100%。结论同指指固有动脉背侧分支皮瓣与邻指皮瓣瓦合修复末节脱套伤,是一种简单、安全、有效、适合基层医院广泛应用的治疗方法。

鲑鱼降钙素及甲状旁腺素(1-34)对卵巢切除大鼠椎体骨密度及骨组织形态计量学影响的比较

目的比较鲑鱼降钙素(salmon calcitonin,CT)及甲状旁腺素(parathyroid hormone,PTH)(1-34)对卵巢切除大鼠腰椎骨密度(bone mineral density,BMD)及骨组织形态计量学的影响。方法40只3月龄雌性Sprague-Dawley(SD)大鼠,随机分为4组,每组10只:假手术(Sham)组;双侧卵巢切除(OVX)组;双侧卵巢切除+甲状旁腺素(1-34)(OVX+PTH)组;双侧7卵巢切除+鲑鱼降钙素(OVX+CT)组。OVX+CT组及OVX+PTH组于卵巢切除术后3个月分别给予皮下注射CT或PTH(1-34)。连续给药3个月后处死所有大鼠并收集标本。取L4椎体进行BMD检测。L5椎体进行Gemisa染色及骨组织形态计量学检测。结果卵巢切除术后6个月,OVX组BMD显著低于Sham组(P<0.05),而OVX+CT组及OVX+PTH组椎体BMD显著高于OVX组(P<0.05),且OVX+PTH组BMD显著高于OVX+CT组(P<0.05)。OVX组BV/TV低于Sham组,OVX+CT组高于OVX组,OVX+PTH组BV/TV高于Sham组、OVX组、OVX+CT组,差异均有统计学意义(P<0.05)。OVX组、OVX+CT组Tb.Th低于Sham组,OVX+PTH组高于Sham组、OVX组、OVX+CT组,差异均有统计学意义(P<0.05)。OVX组Tb.Sp高于Sham组,OVX+CT组和OVX+PTH组低于OVX组,差异均有统计学意义(P<0.05)。各组大鼠Tb.N差异无统计学意义(P>0.05)。结论 CT及PTH(1-34)可显著增加卵巢切除大鼠腰椎BMD并抑制骨重建的高转换状态,且PTH(1-34)作用要优于CT。

天麻素抗心肌氧化应激损伤的作用机制研究

目的探讨天麻素在大鼠心肌细胞氧化应激损伤时是否通过线粒体机制发挥心脏保护作用。方法首先使用过氧化氢H_2O_2650μmol/L处理大鼠心脏组织来源的H9c2心肌细胞,复制氧化应激损伤模型。分别使用50.0、10.0、1.0和0.1μmol/L天麻素预处理,利用共聚焦显微镜成像技术,检测线粒体膜电位的变化,四甲基偶氮唑盐比色法检测天麻素对细胞存活率的影响,Western blot检测天麻素对糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)、蛋白激酶-B(Akt)活性的影响。结果不同浓度的天麻素预处理均能减弱H_2O_2引起的四甲基罗丹明乙酯荧光强度降低程度,且与模型组(0.30±0.25)比较,10.0μmol/L天麻素预处理组(0.79±0.08)作用最为明显。天麻素(10.0μmol/L)预处理能提高H9c2细胞的存活率,使p-GSK-3β(Ser^9)、p-Akt(Ser^(473))蛋白水平升高,而磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)抑制剂渥曼青霉素可以阻断其发挥作用。结论天麻素能够减轻由H_2O_2引发的H9c2心肌细胞氧化应激损伤,其可能是通过PI3K/Akt途径使GSK-3β失活,抑制mPTP开放以发挥心脏保护作用。

Notch1与Wnt10b在人骨肉瘤组织中的表达及临床意义

目的探讨人骨肉瘤与骨软骨瘤组织中Notch1、Wnt10b表达的规律。方法采用免疫组织化学染色方法检测骨肉瘤组(观察组)46例与骨软骨瘤组(对照组)32例组织标本中Notch1、Wnt10b蛋白表达情况,分析其与临床病理及预后的关系。结果 Notch1、Wnt10b在人骨肉瘤中表达的阳性率分别为是87.0%(40/46)、65.2%(30/46),明显高于骨软骨瘤6.3%(2/32)、34.4%(11/32),差异均有统计学意义(P<0.05)。根据人骨肉瘤病Ennecking的分期,发现骨肉瘤细胞Ⅱ、Ⅲ期Notch1、Wnt10b阳性表达率在明显高于Ⅰ期(P<0.05);比较肿瘤转移组与非转移组,发现Notch1、Wnt10b在转移组阳性表达率分别为94.1%(16/17)、88.2%(15/17),非转移组阳性率分别为13.8%(4/29)、20.7%(6/29),差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Notch1、Wnt10b在骨肉瘤中呈现高表达,且与肿瘤恶性程度及肿瘤转移关系密切,检测Notch1与Wnt10b对骨肉瘤进展及预后的判断具有重要指导意义。

新型骨植入材料多孔钽-骨结合界面成骨以及相关成骨因子的表达及意义

背景:具有自主知识产权的国产多孔钽材料具有无毒性及良好的生物相容性,前期体内外实验研究得出结论:国产多孔钽无毒性,具有良好的生物相容性,具有促成骨作用。此次实验是多孔钽-骨界面成骨机制的探讨。目的:观察多孔钽兔股骨植入后钽-骨结合界面成骨形态特点及成骨相关因子整合素β1及纤维粘连蛋白的表达,探讨多孔钽骨内植入钽-骨界面骨整合的生物学机制。方法:实验采用自身对照方法,取日本大耳白兔制备双侧股骨髁骨缺损模型,同一动物左侧股骨内植入多孔钽棒为实验组,右侧股骨内植入异体骨为对照组。术后2,4,8周于骨缺损部位取材,石蜡切片、硬组织切片光镜观察多孔钽与宿主骨交界处成骨形态特点;扫描电镜观察多孔钽-骨界面成骨特征;免疫组织化学检测整合素β1及纤维粘连蛋白的表达。结果与结论:(1)多孔钽棒植入后与宿主骨结合紧密。石蜡切片苏木精-伊红染色结果显示:界面纤维膜早期疏松、较厚,晚期致密较薄,界面出现片状成骨;(2)硬组织切片观察:2周时钽-骨界面已出现新生骨及小血管并向孔隙内生长;4、8周时钽-宿主骨界面新生骨增多并与宿主骨连接成片,骨小梁成熟;(3)扫描电镜下可见成骨细胞在多孔钽表面及孔隙内生长,晚期骨质成熟并见板层骨;(4)免疫组化结果显示:多孔钽骨植入2周时实验组整合素β1的表达显著低于对照组(P<0.05);而纤维粘连蛋白的表达在两组之间比较差异均无显著性意义(P>0.05);整合素及纤维粘连蛋白的表达在2,4,8周时均呈递减趋势;(5)结论:多孔钽有利于成骨细胞在其表面及孔隙内黏附,整合素β1及纤维粘连蛋白在成骨初期钽-骨界面表达增高,可能对早期成骨起促进作用,而在骨成熟期表达则降低,有利于骨整合及改建。

环磷酸腺苷信号对矽肺纤维化形成的影响

目的观察环磷酸腺苷(cAMP)信号在大鼠矽肺纤维化发生、发展过程中的变化及其对矽肺纤维化形成的影响。方法采用HOPE-MED8050动式染尘控制系统复制大鼠矽肺模型,雄性Wistar大鼠随机分为6组,每组10只,分别染尘0、2、4、8、12和16周。采用Masson三色染色观察肺组织形态,采用免疫组织化学法染色和Western blot检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)、纤连蛋白(Fn)、激动型G蛋白α(Gαs)、抑制型G蛋白α(Gαi2、Gαi3)及cA MP的表达。结果 Masson三色染色显示,矽肺模型4周组细胞性结节区域可见蓝紫色胶原沉积,并随模型制备时间的延长纤维化病变区域胶原沉积逐渐增加。免疫组织化学法染色显示,对照组α-SMA阳性表达部位在气管及血管平滑肌;在矽肺模型16周组,α-SMA表达于结节周边及间质纤维化病变区域。α-SMA、CollagenⅠ、Fn及Gαi2、Gαi3蛋白表达在矽肺模型4、8、12和16周较对照组逐渐增多。在矽肺模型8周组Gαs蛋白表达及cAMP含量较对照组下降,至染尘16周达最低。结论 cAMP的表达在矽肺发生、发展过程中呈下降趋势,cAMP信号参与大鼠矽肺纤维化过程。

金匮温经汤对妇科虚寒证模型大鼠子宫、卵巢GRP78、Nrf-2表达的影响

目的:观察金匮温经汤对妇科虚寒证模型大鼠子宫、卵巢GRP78、Nrf-2表达的影响。方法:120只3月龄SD雌性清洁级大鼠,随机数字表法分为4组,对照组、模型组、温经汤高、低剂量组(各30只)。模型组、温经汤高、低剂量组采用延长冰箱冷冻加冰水浸泡时间的方法造模,同时温经汤高、低剂量组给予金匮温经汤灌胃,对照组、模型组给予同体积蒸馏水灌胃,连续30 d。处死大鼠,取子宫、卵巢,采用免疫组织化学染色和Western blot检测GRP78、Nrf-2的表达。结果:模型组子宫、卵巢GRP78、Nrf-2表达低于对照组(P<0.05),高、低剂量组子宫、卵巢GRP78、Nrf-2表达高于模型组(P<0.05),其中高剂量组升高更为显著,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:金匮温经汤通过上调子宫、卵巢GRP78、Nrf-2表达,拮抗内质网应激,缓解氧化损伤,恢复改善靶器官功能,治疗妇科虚寒证。

辛伐他汀可刺激骨髓间充质干细胞的成骨分化

背景:辛伐他汀可显著刺激骨髓间充质干细胞成骨分化,但机制不明。近年研究证实p38 MAPK信号通路参与调控骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的过程。目的:观察p38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路在辛伐他汀体外干预刺激骨髓间充质干细胞成骨分化中的作用。方法:分离培养SD大鼠股骨和胫骨骨髓间充质干细胞,第2代骨髓间充质干细胞分为3组:对照组、辛伐他汀组(加入10^-7 mol/L辛伐他汀)、阻断剂组(加入辛伐他汀30 min前给予10μmol/L p38MAPK信号通路特异性阻断剂SB203580),均使用含有10 mmol/Lβ-甘油酸磷酸钠、50 mg/L抗坏血酸的DMEM完全培养基进行成骨诱导分化。各组干预第6天进行碱性磷酸酶染色;第6天和第12天采用Western blot法检测p38 MAPK和磷酸化p38 MAPK的表达;第12天采用免疫荧光染色和实时荧光定量聚合酶链反应检测骨钙素、Ⅰ型胶原的表达;第21天茜素红染色观察钙结节形成情况。结果与结论:①辛伐他汀组碱性磷酸酶表达和基质矿化能力显著高于对照组,阻断剂组显著低于辛伐他汀组(P<0.05);②辛伐他汀组磷酸化p38 MAPK与p38 MAPK比值高于对照组(P<0.05),阻断剂组低于辛伐他汀组(P<0.05);③辛伐他汀可以促进骨钙素和Ⅰ型胶原的表达,而阻断剂组显著低于辛伐他汀组(P<0.05);④结果表明,辛伐他汀可以促进骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化,这一作用可能与促进p38 MAPK磷酸化进而提高该通路活性有关。

二丁酰环磷腺苷对大鼠矽肺纤维化的保护作用

目的观察环磷酸腺苷(c AMP)类似物二丁酰环磷腺苷(db-c AMP)对大鼠矽肺纤维化的保护作用。方法雄性Wistar大鼠随机分为3组(n=10):对照16周组皮下注射生理盐水10 mg/(kg·d),矽肺模型16周组皮下注射生理盐水10 mg/(kg·d),染尘至16周,db-c AMP预防治疗组皮下注射db-c AMP 10 mg/(kg·d),染尘至16周。采用Masson三色染色观察肺组织病理形态的改变,Western blot检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)、纤连蛋白(Fn)、Gαs、Gαi2/3和c AMP的含量,利用免疫荧光化学染色检测矽肺组织α-SMA/Gαi3的共表达。结果 Masson染色显示,结节及间质纤维化区域出现蓝紫色胶原沉积。免疫荧光结果显示,纤维化病变区域α-SMA/Gαi3共表达增强,矽肺模型16周组与对照16周组比较,Gαs和c AMP的表达明显下降,Gαi2/3及CollagenⅠ、α-SMA、Fn的蛋白表达明显升高。与矽肺模型16周组相比,db-c AMP预防治疗组肺组织胶原沉积减轻,α-SMA/Gαi3共表达下降,Gαs和c AMP的蛋白表达明显升高,Gαi2/3及α-SMA、CollagenⅠ、Fn的表达显著降低。结论 db-c AMP对大鼠矽肺纤维化具有保护作用,这与其调节Gαs/Gαi信号促进c AMP的生成,抑制肌成纤维细胞转化及细胞外基质的生成有关。