酪氨酸激酶抑制剂在肺纤维化治疗中的研究进展

肺纤维化是一种发病率高的进行性慢性肺部疾病。虽然致病途径尚未完全阐明,但其致病过程大致相近。酪氨酸激酶参与一系列对细胞稳态至关重要的信号传导途径。来自体外研究和实验动物模型的实验数据表明,酪氨酸激酶具有推动肺纤维化发生和发展的作用,并且酪氨酸激酶抑制剂在肺纤维化的动物模型中显示出良好的抗纤维化和抗炎的作用。

帕比司他对小鼠矽肺纤维化的干预作用

[背景]矽肺的病理改变主要是大量纤维增生和矽结节的形成。部分矽肺患者肺功能严重受损。目前临床上还没有有效的治疗矽肺的方法。组蛋白去乙酰化酶抑制剂与许多疾病有关,但其在小鼠矽肺纤维化中的作用尚不明确。[目的]探究组蛋白去乙酰化酶抑制剂帕比司他对二氧化硅诱导小鼠矽肺纤维化的作用。[方法]将28只C57BL/6雄性小鼠,随机均分为对照组、模型组、帕比司他治疗组及帕比司他药物对照组。模型组每天鼻腔滴注100 mg/mL SiO2悬浊液50μL,连续7 d;帕比司他治疗组给予与模型组同样处理外,第8天开始每周给予3次帕比司他腹腔注射(5 mg/kg·d),连续3周;帕比司他药物对照组只给予药物,不作其他处理。对照组给予生理盐水。第48天检测小鼠肺功能,并处死所有小鼠。试剂盒检测小鼠肺组织中的羟脯胺酸含量;HE染色观察小鼠肺组织的病理改变;天狼猩红染色观察小鼠肺组织中Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原的表达;ELISA试剂盒检测小鼠血清和肺泡灌洗液中转化生长因子β1(TGF-β1)的含量。[结果]与对照组相比,模型组肺组织中炎症细胞浸润和矽结节明显增加,Ⅰ、Ⅲ型胶原的分布明显增多;羟脯胺酸含量[(1 008.43±182.07)mg/g]也较对照组[(566.83±120.22)mg/g]升高;肺泡灌洗液和血清中TGF-β1的含量[分别为(109.97±2.14)、(934.65±68.13)mg/L]相比对照组[(52.62±3.57)、(540.36±1.06)mg/L]增加,差异均具有统计学意义(P <0.05)。与模型组相比,帕比司他治疗组肺组织中矽结节明显减少,羟脯胺酸含量降低至(824.08±94.88)mg/g,Ⅰ、Ⅲ型胶原分布减少;此外,帕比司他还可明显改善矽肺小鼠肺功能,模型组呼吸频率与气道狭窄系数分别为(318.14±9.77)次/min和(2.22±0.41),帕比司他治疗组的分别为(378.95±36.47)次/min和(1.59±0.12);并下调肺泡灌洗液和血清中TGF-β1的蛋白表达水平[分别为(72.15±8.81)、(765.46±86.99)mg/L]。[结论]帕比司他可以干预小鼠矽肺纤维化的发展,改善矽肺小鼠肺功能。

Wnt信号通路对软骨和软骨下骨双靶向调控及其在骨关节炎进展中的作用

目的综述Wnt信号通路在骨关节炎(osteoarthritis,OA)发生发展中的活性变化,及其对软骨、软骨下骨的双靶向调控和两者间信息交流对OA进程的影响和机制。方法查阅近年在体内外实验研究及临床研究中,OA和非OA状态下Wnt信号通路对关节软骨、软骨下骨调控作用及软骨与软骨下骨间信息交流的相关文献,并对其作用机制进行分析总结。结果 Wnt信号可通过依赖β-catenin的经典或不依赖β-catenin的非经典Wnt信号通路及其与其他信号通路的交联,调控软骨细胞、成骨细胞的分化和功能,进而影响软骨及骨的代谢。过度激活Wnt信号可加重软骨OA样退变,并且Wnt信号通路可激活下游蛋白Wnt1诱导的信号通路蛋白1调控OA进展,还可通过软骨及软骨下骨中不同细胞间建立的缝隙连接,直接进行分子交流调控OA的发生发展。关节腔内注射Wnt信号通路抑制剂SM04690可以抑制OA进程;在成骨细胞中过表达Wnt信号通路抑制剂Dickkopf可以拮抗VEGF对软骨细胞的作用,并抑制其基质的分解代谢。结论 Wnt信号通路及其与其他信号分子的交互作用,可调控软骨和软骨下骨的代谢和功能及两者间信息交流,因此在OA的发生发展中发挥重要作用,有望成为OA治疗的新靶点。

应用iTRAQ技术对动式染尘矽肺大鼠肺组织差异蛋白的定量分析

目的筛选动式染尘矽肺大鼠肺组织差异蛋白并在动物体内及体外中验证,以期为矽肺早期诊断及相关机制研究提供新思路。方法构建动式染尘矽肺大鼠动物模型,采用同位素标记相对和绝对定量(isobaric tags for relative and absolute quantification,iTRAQ)技术联合液相色谱-串联质谱(liquid chromatography-trandem mass spectrometry,LC-MS/MS)技术筛选肺组织中的差异蛋白。免疫印迹试验检测差异蛋白在动物模型肺组织和SiO2诱导的小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞中的表达。结果共得到471个差异蛋白,其中252个上调蛋白,219个下调蛋白。差异倍数>1.5,共有28种差异表达蛋白,其中上调差异蛋白20种。在动物模型肺组织及SiO2诱导的小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞中Factor B、PTPN2、VRK1和MOT4蛋白表达上调,差异均具有统计学意义(均有P<0.05)。结论差异蛋白Factor B、PTPN2、VRK1和MOT4蛋白可能是矽肺纤维化进程中的关键蛋白,为矽肺纤维化的研究提供了新靶点。

抑制线粒体自噬在牛磺酸脱氧胆酸发挥心肌细胞保护中的作用及机制

目的:探讨内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)抑制剂牛磺酸脱氧胆酸(tauroursodeoxycholic acid,TUDCA)是否通过抑制线粒体自噬保护心肌细胞。方法:H9c2心肌细胞常规培养,内质网应激诱导剂2-脱氧葡萄糖(2-deoxyglucose,2-DG)建立ERS模型。随机分为对照组、2-DG组、TUDCA+2-DG组、TUDCA+2-DG+自噬抑制剂3MA组、TUDCA组、3MA组。Western Blot法检测ERS分子伴侣葡萄糖调节蛋白78 (GRP 78)、自噬蛋白P62、LC3Ⅱ/Ⅰ、线粒体自噬特异性蛋白Nix的表达情况;激光共聚焦扫描显微镜观察各组线粒体与自噬小体荧光强度变化及其共定位;MTT法检测各组细胞存活率。结果:与对照组相比,2-DG使GRP 78,LC3Ⅱ/Ⅰ,Nix表达明显增加,P62表达明显减少;使线粒体Mito Tracker红色荧光强度明显降低,自噬体Lyso Tracker蓝色荧光强度明显增高;使细胞存活率明显降低。TUDCA明显抑制2-DG引起的各种改变,而3MA可进一步加强TUDCA的作用。结论:TUDCA通过抑制线粒体自噬降低内质网应激进而提高细胞生存率,发挥心肌细胞保护作用。