自发性2型糖尿病db/db小鼠肝病理损伤特点

目的动态观察自发性2型糖尿病db/db小鼠肝产生的病理变化及特点,为将db/db小鼠肝作为2型糖尿病肝损伤模型的实验研究提供基础理论和实验依据。方法 7～8周龄,雄性,SPF级db/m小鼠作为对照组,糖尿病db/db小鼠作为模型组,各16只。动态观察其体重、空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)、血清丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)活性,计算肝指数,光镜与电镜下观察肝的病理学改变。结果 db/db小鼠空腹血糖、血清ALT、AST活性均明显高于db/m小鼠,组织学检查发现db/db小鼠肝在16周龄时就出现严重损害,主要表现为肝细胞脂肪变性、炎细胞浸润等;到32周龄时病变加剧,镜下可见肝组织内有大量的胶原纤维;电镜下可见线粒体、内质网等结构被破坏甚至消失,出现明显的脂滴、炎细胞,组织内含有大量的胶原纤维。结论 db/db小鼠16周龄时肝出现明显的脂肪变性以及炎细胞浸润等,32周龄时表现为明显的纤维化,因此db/db小鼠的肝可作为实验研究时良好的2型糖尿病肝损伤模型。

槲皮素对db/db小鼠胰岛病理损伤的抑制作用分析

目的:探究槲皮素对db/db小鼠胰岛病理损伤的抑制作用,为临床实际应用提供实验依据。[方法]正常对照组(db/m小鼠),db/db小鼠随机分为模型组、槲皮素组(每天100mg/kg),槲皮素组口服给药连续8周。给药结束时测体重和随机血糖,通过HE、Masson染色法观察各组小鼠胰腺包括胰岛组织形态结构。结果:与db/m小鼠相比,db/db小鼠体重较大且其随机血糖水平显著升高(P<0.01,P<0.05),db/db小鼠胰岛与周围组织之间的界限不清晰、形态不规则,部分胰岛细胞完全萎缩,胞浆疏松或空泡化,间质明显增生,可见大量蓝染胶原物质;槲皮素干预组可降低血糖,抑制胰腺组织和胰岛细胞病理损伤。结论:槲皮素有抑制db/db糖尿病小鼠胰岛病理损伤的作用。

PLK1抑制剂Volasertib联合紫杉醇对小鼠三阴性乳腺癌细胞增殖和迁移的影响

目的:探讨PLK1抑制剂Volas e rtib(Vol)联合紫杉醇对小鼠三阴性乳腺癌细胞增殖、迁移的影响。方法:培养小鼠三阴性乳腺癌4T-1细胞,检测Vol与紫杉醇对4T-1细胞增殖的影响;将4T-1细胞分为对照组、Vol组、紫杉醇组、Vol+紫杉醇组,检测Vol与紫杉醇联合对4T-1细胞迁移的影响;评估细胞周期、迁移相关蛋白的表达;构建荷瘤小鼠模型探讨两者联合用药对4T-1细胞体内增殖的影响。结果:与对照组比较,Vol组、紫杉醇组细胞增殖抑制率均升高(P<0.05);与对照组相比,Vol组、紫杉醇组、Vol+紫杉醇组4T-1细胞迁移数目、细胞周期蛋白B1(CCNB1)、周期蛋白依赖性激酶1(CDK1)、基质金属蛋白酶2(MMP2)、基质金属蛋白酶9(MMP9)蛋白、荷瘤小鼠肿瘤体积、重量均降低(P<0.05);与对照组相比,紫杉醇组G_(0)/G_(1)比例升高,Vol+紫杉醇组G_(0)/G_(1)比例升高,S期、G_(2)/M比例下降(P<0.05);Vol与紫杉醇联合作用对4T-1细胞增殖、迁移及体内抑制效用加强(P<0.05)。结论:Vol与紫杉醇可协同抑制4T-1细胞增殖、迁移,并抑制细胞体内生长。

矿物质代谢障碍病的诊治及卫生保健

在规模化养牛过程中,常常会因饲养管理不当或饲粮中营养搭配不合理导致牛矿物质缺乏或矿物质比例不当,进而引起矿物质代谢障碍病。矿物质代谢障碍病主要有骨营养不良和青草抽搐,骨营养不良是指牛的日粮中钙、磷缺乏或比例失调;青草抽搐指镁缺乏,不管牛发生骨营养不良还是青草抽搐都会使其行动异常,如果不采取有效的治疗措施,可能使牛失去经济价值而被淘汰。在饲养过程中要早发现早治疗,积极做好牛的卫生保健工作,以保证机体内矿物质水平含量正常,本文就牛骨营养不良和青草抽搐的发病原因、临床症状、诊断、治疗及卫生保健工作进行了介绍,供参考。

猪支气管败血波氏杆菌的分离鉴定

从河北廊坊养猪场采集有明显呼吸道症状的猪肺脏进行病原菌分离培养,通过对分离菌株进行形态观察、培养特性、16S r RNA测定,以及支气管败血波氏杆菌fla及Dnt基因PCR鉴定,确定成功分离鉴定到4株猪支气管败血波氏杆菌。药敏试验结果显示,分离菌株对庆大霉素、替米考星、氟苯尼考、恩诺沙星及头孢吡肟高度敏感。对小鼠具有一定致病性。

鲑鱼降钙素及甲状旁腺素(1-34)对卵巢切除大鼠椎体骨密度及骨组织形态计量学影响的比较

目的比较鲑鱼降钙素(salmon calcitonin,CT)及甲状旁腺素(parathyroid hormone,PTH)(1-34)对卵巢切除大鼠腰椎骨密度(bone mineral density,BMD)及骨组织形态计量学的影响。方法40只3月龄雌性Sprague-Dawley(SD)大鼠,随机分为4组,每组10只:假手术(Sham)组;双侧卵巢切除(OVX)组;双侧卵巢切除+甲状旁腺素(1-34)(OVX+PTH)组;双侧7卵巢切除+鲑鱼降钙素(OVX+CT)组。OVX+CT组及OVX+PTH组于卵巢切除术后3个月分别给予皮下注射CT或PTH(1-34)。连续给药3个月后处死所有大鼠并收集标本。取L4椎体进行BMD检测。L5椎体进行Gemisa染色及骨组织形态计量学检测。结果卵巢切除术后6个月,OVX组BMD显著低于Sham组(P<0.05),而OVX+CT组及OVX+PTH组椎体BMD显著高于OVX组(P<0.05),且OVX+PTH组BMD显著高于OVX+CT组(P<0.05)。OVX组BV/TV低于Sham组,OVX+CT组高于OVX组,OVX+PTH组BV/TV高于Sham组、OVX组、OVX+CT组,差异均有统计学意义(P<0.05)。OVX组、OVX+CT组Tb.Th低于Sham组,OVX+PTH组高于Sham组、OVX组、OVX+CT组,差异均有统计学意义(P<0.05)。OVX组Tb.Sp高于Sham组,OVX+CT组和OVX+PTH组低于OVX组,差异均有统计学意义(P<0.05)。各组大鼠Tb.N差异无统计学意义(P>0.05)。结论 CT及PTH(1-34)可显著增加卵巢切除大鼠腰椎BMD并抑制骨重建的高转换状态,且PTH(1-34)作用要优于CT。

寄生原虫端粒蛋白研究进展

端粒蛋白是指那些直接或间接与端粒结合的蛋白组分。近年来寄生虫端粒蛋白研究引起了人们广泛的关注,为寄生虫病的研究提供了新的思路。端粒蛋白具有维持染色体稳定和细胞周期调控等多种功能,共同参与寄生虫生命周期的调节,同时也为寄生虫病的预防和治疗开辟了新的途径。论文主要综述了包括TRFs、Rap1、TERT、RPA、Sir2和Orc1、Gbp、Ku、Rbp38以及LaTBP1等原虫端粒蛋白及其功能,以期为寻找新的防治寄生虫病的靶点提供借鉴。

环磷酸腺苷信号对矽肺纤维化形成的影响

目的观察环磷酸腺苷(cAMP)信号在大鼠矽肺纤维化发生、发展过程中的变化及其对矽肺纤维化形成的影响。方法采用HOPE-MED8050动式染尘控制系统复制大鼠矽肺模型,雄性Wistar大鼠随机分为6组,每组10只,分别染尘0、2、4、8、12和16周。采用Masson三色染色观察肺组织形态,采用免疫组织化学法染色和Western blot检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)、纤连蛋白(Fn)、激动型G蛋白α(Gαs)、抑制型G蛋白α(Gαi2、Gαi3)及cA MP的表达。结果 Masson三色染色显示,矽肺模型4周组细胞性结节区域可见蓝紫色胶原沉积,并随模型制备时间的延长纤维化病变区域胶原沉积逐渐增加。免疫组织化学法染色显示,对照组α-SMA阳性表达部位在气管及血管平滑肌;在矽肺模型16周组,α-SMA表达于结节周边及间质纤维化病变区域。α-SMA、CollagenⅠ、Fn及Gαi2、Gαi3蛋白表达在矽肺模型4、8、12和16周较对照组逐渐增多。在矽肺模型8周组Gαs蛋白表达及cAMP含量较对照组下降,至染尘16周达最低。结论 cAMP的表达在矽肺发生、发展过程中呈下降趋势,cAMP信号参与大鼠矽肺纤维化过程。

新型骨植入材料多孔钽-骨结合界面成骨以及相关成骨因子的表达及意义

背景:具有自主知识产权的国产多孔钽材料具有无毒性及良好的生物相容性,前期体内外实验研究得出结论:国产多孔钽无毒性,具有良好的生物相容性,具有促成骨作用。此次实验是多孔钽-骨界面成骨机制的探讨。目的:观察多孔钽兔股骨植入后钽-骨结合界面成骨形态特点及成骨相关因子整合素β1及纤维粘连蛋白的表达,探讨多孔钽骨内植入钽-骨界面骨整合的生物学机制。方法:实验采用自身对照方法,取日本大耳白兔制备双侧股骨髁骨缺损模型,同一动物左侧股骨内植入多孔钽棒为实验组,右侧股骨内植入异体骨为对照组。术后2,4,8周于骨缺损部位取材,石蜡切片、硬组织切片光镜观察多孔钽与宿主骨交界处成骨形态特点;扫描电镜观察多孔钽-骨界面成骨特征;免疫组织化学检测整合素β1及纤维粘连蛋白的表达。结果与结论:(1)多孔钽棒植入后与宿主骨结合紧密。石蜡切片苏木精-伊红染色结果显示:界面纤维膜早期疏松、较厚,晚期致密较薄,界面出现片状成骨;(2)硬组织切片观察:2周时钽-骨界面已出现新生骨及小血管并向孔隙内生长;4、8周时钽-宿主骨界面新生骨增多并与宿主骨连接成片,骨小梁成熟;(3)扫描电镜下可见成骨细胞在多孔钽表面及孔隙内生长,晚期骨质成熟并见板层骨;(4)免疫组化结果显示:多孔钽骨植入2周时实验组整合素β1的表达显著低于对照组(P<0.05);而纤维粘连蛋白的表达在两组之间比较差异均无显著性意义(P>0.05);整合素及纤维粘连蛋白的表达在2,4,8周时均呈递减趋势;(5)结论:多孔钽有利于成骨细胞在其表面及孔隙内黏附,整合素β1及纤维粘连蛋白在成骨初期钽-骨界面表达增高,可能对早期成骨起促进作用,而在骨成熟期表达则降低,有利于骨整合及改建。

细胞外信号调节激酶1/2通路在Peroxiredoxin-1抑制转化生长因子-β_1诱导的Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达中的作用

目的探讨细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)在转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的肺成纤维细胞合成Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白中的作用,及新型过氧化物酶Peroxiredoxin-1(Prx-1)对该作用的影响。方法体外培养肺成纤维细胞随机分为4组:对照组(0.4%血清)、TGF-β1组(5μg/L)、阴性转染组(TGF-β1+阴性对照si RNA)和Prx-1 si RNA转染组(TGF-β1+Prx-1 si RNA)。采用脂质体转染法转染si RNA,实时定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测转染后Prx-1 m RNA表达;Western blot检测Ⅰ和Ⅲ型胶原蛋白、ERK1/2及Prx-1表达;2,7-二氯荧光素二乙酸(DCFH-DA)检测活性氧(ROS)水平。结果 Prx-1 si RNA转染肺成纤维细胞后,Prx-1 m RNA表达明显降低,最大抑制率为92%。与对照组比较,TGF-β1组的Ⅰ和Ⅲ型胶原蛋白、ROS、磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)及Prx-1蛋白的表达水平均明显提高。与TGF-β1组比较,阴性转染组中的上述观察指标无明显变化,但Prx-1转染组的Ⅰ和Ⅲ型胶原蛋白、ROS、p-ERK1/2水平进一步提高,而Prx-1蛋白的表达被抑制。结论 TGF-β1能够诱导肺成纤维细胞生成ROS,并促进ERK1/2通路的激活,导致Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白合成增加,而Prx-1 si RNA可通过提高ROS水平进一步促进TGF-β1该作用。

Ac-SDKP与AngⅡ信号交互作用对矽肺纤维化发生、发展的影响

目的观察N-乙酰基-丝氨酰-天冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸(Ac-SDKP)和血管紧张素转换酶(ACE)/血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)/血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)轴在大鼠矽肺纤维化发生、发展过程中的表达变化及其对矽肺纤维化形成的影响。方法 60只雄性Wistar大鼠随机分为6组(n=10),分别染尘0、2、4、8、12、16周构建大鼠矽肺模型。HE染色观察肺组织形态,Western blotting检测矽肺大鼠肺组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原(ColⅠ)、纤连蛋白(Fn)、ACE及AT1R蛋白的表达,ELISA法检测矽肺大鼠肺组织中Ac-SDKP和AngⅡ的含量。结果 HE染色结果显示,大鼠染尘2周后即可见肺泡壁增宽及巨噬细胞浸润,4周组偶见孤立的细胞性结节形成(主要由巨噬细胞构成),8周组和12周组大鼠肺泡间隔增宽明显,且细胞性结节数量增多,16周组肺组织内可见多个细胞性结节的融合和间质纤维化的形成,并可见细胞纤维性矽结节的形成。与对照组比较,矽肺模型4、8、12、16周组大鼠肺组织α-SMA、ColⅠ、Fn蛋白表达逐渐增高(P<0.05),2、4、8、12、16周组大鼠肺组织ACE、AngⅡ、AT1R蛋白表达逐渐增高(P<0.05),而大鼠肺组织中Ac-SDKP的表达水平在矽肺模型2周组明显高于对照组(P<0.05),随后逐渐降低,在12周和16周组已明显低于对照组(P<0.05)。结论矽肺局部组织ACE/AngⅡ/AT1R的表达在矽肺发生、发展过程中逐渐升高,而Ac-SDKP的表达逐渐降低。Ac-SDKP和AngⅡ信号参与了大鼠矽肺纤维化的过程。

二丁酰环磷腺苷对大鼠矽肺纤维化的保护作用

目的观察环磷酸腺苷(c AMP)类似物二丁酰环磷腺苷(db-c AMP)对大鼠矽肺纤维化的保护作用。方法雄性Wistar大鼠随机分为3组(n=10):对照16周组皮下注射生理盐水10 mg/(kg·d),矽肺模型16周组皮下注射生理盐水10 mg/(kg·d),染尘至16周,db-c AMP预防治疗组皮下注射db-c AMP 10 mg/(kg·d),染尘至16周。采用Masson三色染色观察肺组织病理形态的改变,Western blot检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)、纤连蛋白(Fn)、Gαs、Gαi2/3和c AMP的含量,利用免疫荧光化学染色检测矽肺组织α-SMA/Gαi3的共表达。结果 Masson染色显示,结节及间质纤维化区域出现蓝紫色胶原沉积。免疫荧光结果显示,纤维化病变区域α-SMA/Gαi3共表达增强,矽肺模型16周组与对照16周组比较,Gαs和c AMP的表达明显下降,Gαi2/3及CollagenⅠ、α-SMA、Fn的蛋白表达明显升高。与矽肺模型16周组相比,db-c AMP预防治疗组肺组织胶原沉积减轻,α-SMA/Gαi3共表达下降,Gαs和c AMP的蛋白表达明显升高,Gαi2/3及α-SMA、CollagenⅠ、Fn的表达显著降低。结论 db-c AMP对大鼠矽肺纤维化具有保护作用,这与其调节Gαs/Gαi信号促进c AMP的生成,抑制肌成纤维细胞转化及细胞外基质的生成有关。

基于二代高通量测序技术的新型冠状肺炎病毒S朊突变点分析

通过对美国华盛顿洲在2020年3至4月底爆发的新冠肺炎病人二代高通量测序数据分析,找出新冠病毒刺突糖蛋白(简称S朊)中存在的所有突变类型,为研究病毒在体内复制的突变规律及研究疫苗提供基础资料。利用NCBI中公布的130例美国华盛顿区报道的新冠肺炎病人二代高通量测序数据,进行序列组装,并对其朊编码基因进行深度突变分析,找出其潜在的疑似抗原变异位点(antigen variation,以下简称突变点)。排除30条未获全长的数据,共获得100份病人完整的SARS CoV 2序列,其S朊编码基因,主要突变点集中在S1区的SP区及受体结合区(RBD)之前的间隔区(突变区基本呈连续分布:126aa~153aa,194aa~204aa)和S2区的1250aa~1270aa区。100份样本的数据研究结果显示,新冠病毒S基因在病人体内复制过程中较为稳定,编码氨基酸的突变点(突变频率>15%)呈单样本散在分布,且S2区较S1区更为稳定。未在新冠病毒的RBD区找到突变率>20%的点,而S区散在零星突变区域主要集中在S1区间隔区(126aa~153aa,194aa~204aa处,且基本呈连续分布)和S2末端约20aa处。

ERK1/2通路在Peroxiredoxin-1抑制TGF-β_1诱导的肺成纤维细胞增殖中的作用

目的探讨细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)在新型过氧化物酶Peroxiredoxin-1(Prx-1)抑制转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的肺成纤维细胞增殖中的作用。方法体外培养肺成纤维细胞,随机分为对照组、TGF-β1组、阴性转染组、Prx-1 siRNA转染组。各组细胞用0.4%血清培养12 h使其同步化。TGF-β1组、阴性转染组和Prx-1 siRNA转染组均添加5μg/L TGF-β1刺激24 h,阴性转染组和Prx-1 siRNA转染组分别利用脂质体Lipo2000将干扰siRNA和Prx-1 siRNA转染到肺成纤维细胞,培养48 h。Real-time PCR检测转染后Prx-1 mRNA表达;MTT检测细胞增殖、Western blot检测ERK1/2及Prx-1表达、2,7-二氯荧光素二乙酸(DCFHDA)检测活性氧(ROS)水平。结果 Prx-1 siRNA转染肺成纤维细胞后,Prx-1 mRNA表达明显降低,最大抑制率为92%。与对照组比较,TGF-β1组的细胞增殖、ROS、磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)及Prx-1蛋白的表达水平均明显增加。与TGF-β1组比较,阴性转染组中的上述观察指标无明显变化,但Prx-1 siRNA转染组的细胞增殖、ROS、p-ERK1/2的水平明显上升,而Prx-1蛋白的表达被抑制。结论 TGF-β1能够诱导肺成纤维细胞生成ROS,并由此促进ERK1/2的激活,最终导致细胞增殖,而Prx-1 siRNA则可通过增加ROS水平进一步促进TGF-β1的作用。

多孔金属骨科内植物的研究进展

随着人口老龄化,老年人骨折的发生率和患病率显著增加,特别是骨质疏松性骨折[1,2],骨不愈合和近远期固定不佳是骨折后的常见并发病,目前骨科植入物尚存在不足,需要新的植入材料来改善这一现状,多孔金属内植物具有较好的生物学相容性和近远期固定效果,能够修复严重骨缺损和良好的生物学固定[3~6]。修复骨缺损的当前策略包括自体移植、同种异体移植物、合成移植物、金属假体、

转化生长因子β1对多孔钽/MG63成骨样细胞复合物细胞增殖及分泌功能的影响

背景:前期研究已得出国产多孔钽无毒性,具有良好的生物相容性,具有促成骨作用。目的:观察转化生长因子β1对国产多孔钽/MG63成骨样细胞复合物中成骨细胞生长增殖、细胞周期及分泌功能的影响,方法:取生长状态良好的第3代MG63成骨样细胞悬液,按1×10~9L^(-1)的细胞浓度接种于多孔钽材料上,分别以含0,0.5,5,10μg/L转化生长因子β1的培养基培养。CCK-8法检测培养1-13 d成骨细胞增殖水平;培养5,9 d,扫描电镜及透射电镜观察培养细胞形态及超微结构,检测细胞分泌Ⅰ型胶原水平。结果与结论:(1)0.5,5,10μg/L转化生长因子β1均可促进多孔钽上成骨细胞的增殖,其中以5μg/L转化生长因子β1的促增殖作用最明显;(2)在5μg/L转化生长因子β1作用下,成骨细胞在多孔钽支架表面及微孔内形成叠层黏附生长,向材料表面伸出较多的伪足,细胞分泌的基质基本覆盖多孔钽表面,胞浆内可见大量粗面内质网、游离核糖体及致密分布的线粒体,高尔基复合体较发达,并且胞质内出现较多基质小泡;(3)5μg/L转化生长因子β1组培养5,9 d的Ⅰ型胶原水平高于0.5及10μg/L转化生长因子β1组(P<0.05);(4)结果表明:转化生长因子β1可促进国产多孔钽表面MG63成骨样细胞的增殖,其中以5μg/L转化生长因子β1对成骨细胞的促增殖及Ⅰ型胶原分泌作用最明显。

RGD多肽修饰多孔钽对MG63成骨样细胞-钽界面形态及成骨因子表达的影响

目的:通过观察精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(Arg-Gly-Asp polypeptedes,RGD)多肽表面修饰多孔钽对MG63成骨样细胞-多孔钽结合界面形态变化以及相关成骨因子表达的影响,评价RGD修饰多孔钽对钽-骨界面骨整合所起的重要作用。方法:直径10 mm、厚3 mm的多孔钽片通过表面吸附法分别将3种质量浓度的RGD溶液(1 g/L、5g/L、10 g/L)吸附于多孔钽表面。取第2代MG63成骨样细胞与钽-RGD复合培养成为成骨细胞/钽/RGD复合物,分为4组:未修饰Ta组(对照组),1 g/L成骨细胞/Ta/RGD组,5 g/L成骨细胞/Ta/RGD组及10 g/L成骨细胞/Ta/RGD组。扫描电子显微镜观察多孔钽及复合物外观特征、成骨细胞与Ta/RGD界面的相互作用,测定成骨细胞在Ta/RGD材料上的黏附率,免疫细胞化学染色检测各组成骨蛋白骨钙蛋白(osteocalcin,OC)、纤维连接蛋白(fibronectin,FN)及丝状肌动蛋白(filamentous actin,F-actin)的表达。结果:扫描电子显微镜观察,成骨细胞在RGD修饰后多孔钽界面铺展并向孔隙内伸延,分泌细胞外基质覆盖于多孔钽微孔内及界面。24 h、48 h及72 h各组成骨细胞在Ta/RGD材料界面的黏附率均高于未修饰组(对照组),其中5 g/L成骨细胞/Ta/RGD组在48 h的黏附力最强[(68.07±3.80)vs.(23.40±4.39),P<0.05]。免疫细胞化学染色发现,成骨细胞与Ta/RGD复合培养48 h成骨细胞OC、FN及F-actin的阳性表达均高于未修饰组,其中5 g/L成骨细胞/Ta/RGD组高于10 g/L组及1 g/L组[OC:(18.08±0.08)vs.(15.14±0.19),P<0.05;(18.08±0.08)vs.(14.04±0.61),P<0.05。FN:(24.60±0.98)vs.(15.90±0.53),P<0.05;(24.60±0.98)vs.(15.30±0.42),P<0.05。F-actin:(29.20±1.31)vs.(24.50±1.51),P<0.05;(29.20±1.31)vs.(16.92±0.40),P<0.05]。细胞骨架蛋白F-actin呈丝状分布于胞质,沿细胞胞突纵向排列,其蛋白表达高于OC及FN。结论:RGD多肽有利于成骨细胞在多孔钽界面黏附、铺展及细胞骨架蛋白的重组,从而促进成骨细胞-多孔钽界面改建及骨整合。

肝激酶B1过表达对人甲状腺乳头状癌K1细胞增殖及转移的影响

目的探讨肝激酶B1(LKB1)过表达对人甲状腺乳头状癌K1细胞增殖及转移的影响。方法将培养好的甲状腺乳头状癌K1细胞随机分为空白组、阴性对照组和实验组,将空载病毒、LKB1重组真核体分别转染入阴性对照组、实验组,空白组不做任何处理。RT-PCR技术检测各组LKB1 mRNA表达,Western blotting法检测细胞内LKB1蛋白表达,用MTT法检测细胞增殖能力(OD值),用Transwell侵袭试验检测细胞转移能力,流式细胞术检测细胞周期分布。结果实验组LKB1 mRNA、蛋白相对表达量高于阴性对照组、空白组(P均<0.05)。转染72 h,继续培养24、48、72、96 h实验组OD值低于阴性对照组、空白组(P均<0.05)。转染24 h,实验组穿膜细胞数少于阴性对照组、空白组(P均<0.05)。转染24 h,与阴性对照组、空白组比较,实验组G0/G1期细胞增多,S期、G2/M期细胞减少(P均<0.05)。结论 LKB1过表达能抑制人甲状腺乳头状癌K1细胞增殖、转移。

QDPR基因表达水平对肾小管上皮细胞系NRK-52E细胞DHFR表达的影响

目的 OLETF大鼠醌式二氢生物喋呤还原酶(Quinoid dihydropteridine reductase,QDPR)存在K93T点突变,QDPR催化醌型二氢生物喋呤还原成四氢生物喋呤(tetrahydrobiopterin,BH4);二氢叶酸还原酶(dihydrofolate reductase,DHFR)能将二氢喋呤还原成BH4,提示生物喋呤代谢与叶酸代谢通路之间有串扰。文中通过研究QDPR基因表达水平对肾小管上皮NRK-52E细胞DHFR表达的影响,探讨QDPR基因在糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)中的作用机制。方法 Western blot检测高糖环境下NRK-52E细胞及OLETF大鼠DHFR蛋白表达情况。利用慢病毒技术感染NRK-52E细胞,制作空载过表达、过表达QDPR敲低随机序列对照和敲低QDPR模型。每组再分别给予5.4 mmol/L正常糖培养基和30 mmol/L高糖培养基培养细胞72 h,模拟DN模型。实验分组:NRK-52E对照组、NRK-52E高糖组、空载过表达病毒对照组、空载过表达病毒高糖组、QDPR基因过表达组、QDPR基因过表达高糖组、敲低随机序列对照组、敲低随机序列高糖组、QDPR基因敲低组、QDPR基因敲低高糖组。观察高糖环境QDPR基因的表达情况对DHFR蛋白表达水平的影响。结果 NRK-52E高糖组DHFR蛋白含量(0.33±0.16)低于NRK-52E对照组(0.64±0.05),差异有统计学意义(P<0.05);OLETF大鼠DHFR蛋白的表达水平(1.03±0.12)明显低于LETO大鼠的表达水平(1.56±0.16),差异有统计学意义(P<0.01)。与空载过表达病毒高糖组(0.63±0.08)相比,QDPR基因过表达高糖组DHFR蛋白含量(0.12±0.09)降低,差异有统计学意义(P<0.01);与敲低随机序列对照组(0.52±0.08)相比,QDPR基因敲低高糖组DHFR表达量(0.62±0.27)差异无统计学意义(P>0.05)。结论DHFR蛋白在DN的发生发展中可能起到重要作用,QDPR基因过表达使DHFR蛋白表达含量下降,QDPR基因过表达通过下调DHFR蛋白的表达水平进而影响DN的发展。

氯化锂调控端粒酶逆转录酶抗大鼠老年痴呆凋亡作用的研究

目的探究氯化锂调控端粒酶逆转录酶(TERT)抑制老年痴呆模型大鼠脑细胞的凋亡作用。方法选择45只大鼠,随机分为假手术组、模型组、锂治疗组,每组15只。模型组和锂治疗组通过注射β-淀粉样蛋白(Aβ)构建老年痴呆大鼠模型;建模后假手术组、模型组腹腔注射0.5 ml的生理盐水,锂治疗组腹腔注射0.5 ml剂量为1 mg/kg的氯化锂生理盐水溶液,1次/d,治疗3周。通过水迷宫实验,检测大鼠的学习能力和认知能力。实验结束后迅速将大鼠处死,制备脑组织匀浆,通过酶联免疫吸附法(ELISA)分析TERT活性;通过原位缺口末端标记法(TUNEL)染色分析各组大鼠脑组织细胞凋亡情况;通过蛋白印记(western blot)分析各组大鼠脑组织中的蛋白表达。结果Morris水迷宫结果显示锂治疗组大鼠的逃避潜伏期显著低于模型组,目标象限的穿台次数和时间明显高于模型组(P<0.05)。ELISA检测显示,与模型组相比,锂治疗组大鼠的TERT活性明显增加,差异有统计学意义(P<0.001)。TUNEL染色分析发现,与模型组相比,锂治疗组大鼠脑组织中凋亡细胞比例明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。Western blot蛋白分析结果显示,与模型组相比,锂治疗组大鼠脑组织中三肽氨基肽酶-1(TPP1)、端粒保护蛋白-1(POT1)、抑癌基因p53及抑凋亡B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白的表达量明显增加,TERT、诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)及促凋亡蛋白Bcl-2相关X蛋白(Bax)和裂解的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(cleaved-caspase-3)蛋白的表达明显受到抑制,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论氯化锂能够通过调控端粒酶逆转录酶抑制老年痴呆模型大鼠脑细胞的凋亡作用。