宠物源大肠埃希菌耐药性及耐药基因调查

【目的】了解广州市宠物源大肠埃希菌Escherichia coli耐药性和耐药基因携带情况。【方法】2016年7月至2017年7月从广州市4家宠物医院采集健康或患病犬猫样品共319份,其中,健康动物127份,患病动物192份。采用选择性培养基分离大肠埃希菌,利用基质辅助激光解析串联飞行时间质谱仪(MALDI-TOF MS)鉴定菌种;采用琼脂稀释法测定大肠埃希菌对11种抗菌药物的敏感性,利用PCR和测序检测耐药基因的携带情况。【结果】319份样品共分离得到大肠埃希菌203株,其中,患病动物源109株,健康动物源94株。203株大肠埃希菌中有179株至少对1种抗生素耐药;对氨苄西林耐药率最高(76.85%),对头孢噻肟、四环素、多西环素和磺胺甲噁唑-甲氧苄啶耐药率均高于50%;对阿米卡星最为敏感,耐药率仅为10.84%。患病动物源大肠埃希菌对11种抗菌药物的耐药率均高于健康动物源,除阿米卡星、氟苯尼考和磷霉素外,对其他药物的耐药性均差异极显著(P<0.01)。耐药基因检测结果显示,floR检出率最高(检出率为34.97%),blaCTX-M-9G、blaCTX-M-1G、fos A3、rmt B和bla CMY-2检出率分别为22.66%、20.19%、17.73%、10.34%和1.48%,未检测到blaCTX-M-2G和blaCTX-M-25G。【结论】广州地区宠物源大肠埃希菌耐药状况严峻,且常携带多种重要耐药基因。应当加强对宠物源细菌耐药性的监测。

9种夹竹桃科和大戟科植物抗菌和抗氧化活性测定

【目的】筛选具有抗菌和抗氧化活性的植物次生代谢产物,为夹竹桃科和大戟科植物资源的开发和利用提供理论依据。【方法】以华南地区常见的5种夹竹桃科植物和4种大戟科植物为研究对象,采用甲醇冷浸提取和乙酸乙酯萃取方法制备植物提取物,以薄层层析(TLC)—生物自显影法测定9种植物提取物的体外抗细菌和抗氧化活性,通过斑点及斑点的迁移率(R_f)初步评价样品中化合物的极性和活性,根据抑菌斑大小评价化合物的活性。【结果】除银柴外,其余8种植物提取物对供试细菌均表现出一定的抑制活性,其中红背桂、红背山麻杆和蝴蝶果对7种供试细菌均表现出较强的抑菌活性,且红背桂和蝴蝶果提取物的抑菌斑直径超过10 mm,R_f集中在0~0.13,说明活性化合物极性偏大。除夹竹桃科的羊角坳外,其余8种植物提取物均表现出一定的抗氧化活性,其中红背山麻杆的抗氧化活性最强,R_f为0~0.52,抗氧化斑直径为5~10 mm。【结论】TLC-生物自显影法能够快速检测和筛选具有抗菌和抗氧化活性的植物提取物。红背山麻杆、红背桂和蝴蝶果可作为抗细菌的候选植物资源利用,红背山麻杆可同时作为优良的抗氧化植物资源利用。

氟苯尼考缓释颗粒的制备及体外释放特性

【目的】延长药物有效血药浓度的维持时间,产生持续稳定的抑菌作用,避免多剂量连续使用氟苯尼考产生胚胎毒性和免疫抑制。【方法】以硬化油、聚乙二醇、甘油酯为辅料,采用离心喷雾干燥制粒技术法制备氟苯尼考缓释颗粒,高效液相色谱法(HPLC)测定氟苯尼考含量。以药物在不同释放介质(pH 1.2盐酸缓冲液、pH 4.3醋酸缓冲液和pH6.8磷酸缓冲液)中的释放特性为指标,对氟苯尼考粉和自制的氟苯尼考缓释颗粒进行溶出试验,考察体外释放特性。【结果】4个批次制备的氟苯尼考缓释颗粒中氟苯尼考实际含量在标示含量中的占比分别为99.19%、100.01%、97.45%和100.72%,相对标准偏差(RSD)分别为0.82%、0.86%、0.77%和0.24%。氟苯尼考粉在0.25 h内完全释放,自制的氟苯尼考缓释颗粒在模拟胃液环境(pH 1.2盐酸缓冲液)基本不释放,在模拟肠液环境(pH 4.3醋酸缓冲液和pH6.8磷酸缓冲液)缓慢释放,5 h内释放量达95%以上。【结论】自制的氟苯尼考缓释颗粒中药物分布较均匀,符合中国兽药典要求。相比于氟苯尼考粉,氟苯尼考缓释颗粒表现出良好的耐酸性体外缓释性,可为后续的临床试验研究和临床使用药物提供参考依据。

细菌附属敏感性的研究进展

多重耐药细菌的广泛传播已严重威胁公众健康。在细菌的耐药性进化过程中,“附属敏感性(collateral sensitivity,CS)”的出现,即细菌对一种抗生素的耐药性增加时对另一种抗生素的敏感性增加的现象,为对抗多重耐药细菌感染带来一种可能的选择,从而为细菌耐药性防控提供新的思路。深入研究细菌的附属敏感性有助于我们科学地选择用药组合,降低多重耐药细菌感染治疗的失败率,为保障公共卫生健康提供启示。为了更好地把握细菌附属敏感性的发展全局,本文对细菌附属敏感性的发展历史、研究内容、意义与相关的研究方法进行综述,并提出了目前研究的不足与对未来研究的展望。

家禽中blaNDM阳性大肠杆菌的筛查和传播特征分析

对从山东某养鸡场分离的29株鸡源大肠杆菌和从广东某兽医站采集的182份死禽器官样品筛查blaNDM阳性大肠杆菌,采用药敏试验检测产NDM(New Delhi metallo-β-lactamase)大肠杆菌对14种抗菌药物的敏感性,PCR方法检测菌株携带的其他耐药基因;通过脉冲场凝胶电泳(pulsed filed gel electrophoresis,PFGE)分析菌株间的亲缘关系,并进一步进行接合转移/转化试验、Southern blot杂交以及复制子分型分析blaNDM质粒特征。结果显示:在29株山东鸡源大肠杆菌和182份广东病死禽样品中分别检测到9株和22株blaNDM阳性大肠杆菌,blaNDM基因亚型包括blaNDM-1、blaNDM-5和blaNDM-9;药敏试验结果显示blaNDM阳性大肠杆菌对β-内酰胺类抗生素普遍耐药,对其他多类抗生素耐药率也较高;PFGE分型表明,blaNDM阳性大肠杆菌亲缘关系总体较远,在小范围内存在克隆现象;Southern blot和接合转移试验结果表明,所有菌株blaNDM基因定位于质粒上,且大部分携带blaNDM基因的质粒可进行接合转移,质粒为IncB/O、IncY、IncX3、IncHI2和IncI1-HI2型质粒。结果表明:blaNDM阳性大肠杆菌在广东和山东某些地区流行较为严重,且多重耐药现象严重;blaNDM基因主要通过接合转移方式进行水平传播,也存在小范围的克隆传播。