PCR-SSCP技术及其在寄生虫学上的应用

聚合酶链反应 单链构象多态性 (PCR SSCP)技术是一种简便、快速、灵敏的基因突变分析方法 ,能有效地检出碱基突变。目前 ,该方法在寄生虫学领域已得到日益广泛和深入的应用 ,尤其是近几年来用于寄生虫的分子分类学、分子遗传学、虫种及虫株鉴定等方面的研究已取得了很大的成功。本文综述了该技术的基本原理、影响因素。

AFLP技术及其在寄生虫学上的应用

扩增片断长度多态性(amplifiedfragmentlengthpolymorphism,AFLP)是1993年由Zabeau和Vos犤1犦发明并发展起来的一种检测DNA多态性的新方法。它克服了限制性片段长度多态性(RFLP)和PCR的缺点,结合了RFLP技术的可靠性和PCR技术的高效性。该方法问世后很快应用于动物犤2～10犦、植物犤11～14犦、微生物犤15～19犦、寄生虫犤5,16,18,20犦等生物的遗传育种、构建遗传图谱、遗传多样性分析、基因定位、分类等方面的研究。本文简要介绍了这种技术的原理、特点及在寄生虫学上的应用。

SRAP分子标记及其应用概述

序列相关扩增多态性(SRAP)是近年来发展起来的一种新型分子标记系统,它具有简便、中等产量、高共显性、重复性、易于分离条带及测序等优点,最大的特点是它针对的是基因的阅读框区域(ORFs)。SRAP标记中,引物的设计是关键,它是基于两个引物的扩增,上游引物长17bp,对外显子进行特异扩增,下游引物长18bp,特异扩增的是内含子及启动子区域,由于个体不同以及物种之间的内含子、启动子之间间隔长度不同而产生多态性。两个引物均由5P端14～15bp的核心序列,和3’端3个选择性碱基组成,其中核心序列又由长为10～11bp的无特异性的填充序列以及CCGG(正向引物中),或AATT(反向引物中)组成。且正向和反向引物中的填充序列必须不同。扩增的过程采用复性变温法,前5个循环复性温度为35℃,后30～35个循环则为50℃,扩增后的DNA片段可用聚丙烯酰胺或琼脂糖凝胶电泳分离,EB、银染或放射自显影检测。目前SRAP已开始在植物种质资源鉴定评价、种缘进化关系、遗传图谱构建、基因定位、重要性状标记以及比较基因组学方面得到成功应用。

鸡球虫中山分离株对7种抗球虫药的药敏试验

试验比较7种离子载体类抗球虫药对鸡球虫中山野外分离株的敏感性。试验分为9组,包括拉沙洛西钠(90mg/kg)、盐霉素(60mg/kg)、马杜霉素(5mg/kg)、莫能霉素(100mg/kg)、那拉霉素(70mg/kg)、敌球素(30mg/kg)和赛杜霉素(25mg/kg)7个用药组,感染不用药及不感染不用药2个对照组。每组选用15只2周龄本地黄鸡,从感染前1d开始喂药直到试验结束(感染后7d)。攻毒剂量为6万孢子化球虫卵囊。结果为拉沙洛西钠、敌球素、莫能霉素、那拉霉素、盐霉素、赛杜霉素和马杜霉素的抗球虫指数(ACI)分别是199、186、185、146、135.3、135和125;病变记分减少率(RLS)依次是拉沙洛西钠(100%)、敌球素(100%)、莫能霉素(80%)、那拉霉素(15%)、赛杜霉素(15%)、盐霉素(10%)和马杜拉霉素(5%)。结果表明:拉沙洛西钠、敌球素和莫能霉素对鸡球虫中山分离株属于敏感药物,盐霉素、国产马杜霉素、那拉霉素和赛杜霉素对鸡球虫中山分离株均不敏感。

猪蛔虫的生活史及体外培养研究进展

猪蛔虫病对养猪业的危害严重。蛔虫体外培养技术即是人工模拟宿主体内环境条件,从而使蛔虫在离开宿主状态下完成生活史中的部分或全部的发育阶段。通过该技术可对其生活史、不同发育阶段的形态变化、感染机制及基因功能等方面进行深入研究,对寄生虫学发展意义重大。本文主要阐述不同学者对蛔虫生活史的看法及培养过程中培养条件变化,如pH、气相、培养基化学成分的变化,对虫体生长发育的影响。但目前对蛔虫体外培养的研究,还处于探索阶段,最适培养基、气相及pH值的筛选还有待进一步的研究。

伪狂犬病毒作为疫苗载体的研究进展

随着生物技术的快速发展,对伪狂犬病病毒的研究也不断深入,特别是伪狂犬病病毒作为疫苗病毒载体成为人们研究的一个热点。利用基因工程技术使伪狂犬病病毒中的毒力基因失活,从而致使病毒毒力减弱,但其病毒粒子仍然保持着良好的抗原性,并能有效地刺激机体产生免疫反应,将重组的病毒粒子同插入的外源基因一起在动物体内表达,既安全又能起到预防多种病原的作用。笔者就伪狂犬病病毒的主要研究进展及其在寄生虫上的应用前景进行了综述。

生命科学研究的重大发现——2002年诺贝尔生理学/医学奖与秀丽新杆线虫介绍

因在器官发育及细胞程序性死亡的遗传调节方面所作出的突出贡献 ,SydneyBrenner ,H .RobertHorvitz及JohnE .Sulston荣获 2 0 0 2年度诺贝尔生理学 /医学奖。本文概要介绍这一生命科学的重大发现 ,以及这一科学发现和其它生命科学研究所用的优秀模型生物

SAG1-MIC8复合DNA基因疫苗免疫小鼠诱导抗弓形虫感染的保护性研究(英文)

目的观察弓形虫SAG1-MIC8复合DNA基因疫苗对C57BL/6J小鼠的免疫保护作用。方法构建重组质粒pcDNA3.1-SAG1、pcDNA3.1-MIC8和pcDNA3.1-SAG1-MIC8,并分别转染Hela细胞体外表达蛋白,蛋白质印迹(Westernblotting)分析鉴定。将70只小鼠随机均分为5组,分别为PBS组、空质粒组、pcDNA3.1-SAG1组、pcDNA3.1-MIC8组和pcDNA3.1-SAG1-MIC8组,每2周肌注免疫(100μg/只)1次,共3次,于免疫前和初次免疫后13、27、41和55d采血分离血清。初次免疫后56d,每组小鼠中7只剖杀后分离脾细胞,另7只经腹膜感染弓形虫RH株速殖子(1×104/只),观察各组生存时间。ELISA法分别检测各组小鼠血清IgG、IgG1、IgG2b和IgG2c水平,以及干扰素γ(IFN-γ)和白介素4(IL-4)水平。放射法检测T淋巴细胞增殖情况。结果Westernblotting分析结果显示,重组质粒pcDNA3.1-SAG1、pcDNA3.1-MIC8和pcDNA3.1-SAG1-MIC8均能在Hela细胞表达,蛋白相对分子质量(Mr)分别为34000、74000和109000。pcDNA3.1-SAG1-MIC8组初次免疫后41d和55d血清中IgG,末次血清中IgG2b、IgG2c和IFN-γ,以及T淋巴细胞增殖能力均显著高于其他各组(均P<0.05)。各组的末次血清中IgG1和IL-4水平差异均无统计学意义(均P>0.05)。5组小鼠感染弓形虫速殖子后生存时间中位数分别为3、4、7、7和10d,各组间差异有统计学意义(P<0.01)。结论弓形虫SAG1-MIC8复合DNA抗原较SAG1和MIC8单基因抗原有更好的免疫保护性。

AFLP标记在微生物学上的应用

扩增片段长度多态性(amplifiedfragmentlengthpolymorphism,AFLP)是一种用来检测基因组多态性的新一代分子标记,具有分辨率高、稳定性好、重复性好等特点。近年来,AFLP已广泛用于动物、植物、微生物等许多研究领域,在遗传图谱的构建、遗传多态性的分析、系统分类学等方面显示了极大的优越性。本文主要介绍其原理、方法特点以及在微生物学上的应用。

鸽毛滴虫与大肠杆菌及白色念珠菌的混合感染

2006年3月，在广东省东莞、佛山、增城等地多处鸽场的个别青年鸽发生以精神沉郁、腹泻、消瘦、呼吸困难、口腔黏膜增厚、羞明流泪为主要特征的传染病，使用恩诺沙星、泰勒菌素、青霉素、链霉素等抗生素效果很差。4月份青年鸽死亡增多，而且陆续发现有乳鸽死亡；5月份乳鸽死亡数增多，部分场每天死亡高达0．3％～0．5％，种鸽产蛋率明显下降：