猪白细胞介素-6基因的非融合原核表达研究

用DNA重组技术,将已克隆的猪IL-6基因阅读框片段插入非融合原核表达质粒pBV220中的适当位置,获得重组质粒pBVpIL-6,转化大肠杆菌DH5α后,42℃诱导阳性表达菌。经SDS-PAGE检测发现目的蛋白获得了高效表达,表达量约占总蛋白的20%。表达的蛋白以包涵体形式存在,包涵体经过变性溶解和复性后用酶联免疫吸附试验(ELISA)做定性定量检测。ELISA结果证实了所表达的蛋白为猪IL-6,复性后具有一定活性,并测出了复性后活性蛋白的浓度。

猪(杜长大三元杂)白细胞介素-6基因的克隆及序列分析

分离猪（杜长大三元杂）外周血单核细胞（PBMC）进行体外培乔，经诱导刑LPS或ConA的诱导培养48h后，提取细胞总RNA，应用RT-PCR扩增猪IL-基因，并克隆到pMDl8-T载体后测序。结果成功获得猪IL-6基因重组质粒pMDpIL-6，序列分析发现所获得的猪IL-6cDNA长度为716bp．开放阅读框为636bp，编码211个氨基酸，相对分子质量约24ku，等电点5．5。所获得的猪IL-6与GenBank上已报道的不同来源猪的IL-6有单个氨基酸存在差异；与人和其他动物IL-6氨基酸序列的同源性为78．1％-90．1％，同时反映出IL-6基因具有种的多样性，不同种动物的IL-6基因亲缘关系越近，进化关系也越近。