动物废弃物中病原体的污染及其控制

本文概述了畜牧业废弃物中的病原体种类、数量及其污染与控制措施。

恩诺沙星残留对土壤微生物功能的影响

研究了恩诺沙星残留对土壤呼吸作用、纤维分解作用、氨化作用、硝化作用的影响 ,结果表明 ,相对较低浓度恩诺沙星残留(0 .0 1μg/ g土 ,0 .1μg/ g土 )刺激土壤呼吸作用 ,相对较高浓度恩诺沙星残留 (1μg/ g土 )对土壤呼吸作用产生抑制 ,药物作用活性维持期为 6 d;恩诺沙星残留对土壤纤维分解作用影响较不明显 ;较低浓度恩诺沙星残留 (0 .0 1μg/ g土 ,0 .1μg/ g土 )对土壤氨化作用有刺激作用 ,而较高浓度恩诺沙星残留 (1μg/ g土 ,10μg/ g土 )则会对其起抑制作用 ,药物作用活性期为 9d;不同浓度恩诺沙星对土壤硝化作用影响极其显著 ,当恩诺沙星浓度达到 1μg/ ml时 ,在 3～ 9d内 ,对土壤硝化作用有一定抑制作用。当恩诺沙星浓度达到 10μg/ ml时 ,强烈抑制了土壤硝化作用 ,直到本试验结束时 ,其抑制作用未见减弱。结果表明恩诺沙星残留影响了土壤微生物这些功能 。

恩诺沙星残留对土壤微生物数量及群落功能多样性的影响

对不同浓度恩诺沙星作用于土壤后三大类微生物数量及群落功能多样性进行了研究. 结果表明,恩诺沙星残留对它们影响强弱顺序为:细菌>放线菌>真菌,其影响作用随浓度从每克土0.01 μg至10 μg的增加而加大,药物作用活性维持期为6～8 d,但对真菌作用不明显. 相对较低浓度的恩诺沙星残留(每克土中0.1 μg,1 μg)不影响土壤微生物群落功能多样性,而相对较高浓度的恩诺沙星残留(每克土中10 μg)则降低了其微生物群落功能多样性. 图2 表2

食品中沙门氏菌LAMP快速检测方法的建立

食品及其原料中沙门氏菌的快速、现场检测对食品安全控制具有重要意义.根据沙门氏菌invA基因核苷酸序列设计一组引物,应用环介导等温扩增技术(LAMP),分别对7种不同血清型沙门氏菌和4种非沙门氏菌进行扩增,同时建立沙门氏菌人工污染的食品模型,比较了LAMP法与活菌计数检测的敏感性.结果表明,该方法仅对沙门氏菌产生特异性扩增,灵敏度高达336,mL-1,食品样品经细菌富集培养后,检测灵敏度高达8.25,g-1.所建立的检测沙门氏菌方法具有较高的特异性与灵敏性,操作简单、快速,可用于沙门氏菌污染食品的快速检测.

新城疫病毒(NDV)HN基因真核表达重组质粒的构建

应用一对自行设计的引物 ,通过反转录 -聚合酶链反应 (RT-PCR)获得新城疫病毒 (NDV) Lasota株的血凝素神经氨酸酶 (HN)基因片段 ,其长度约为 1 .7kb,与已报道的 NDV-HN基因片段大小一致。再将该 HN基因片段定向插入真核表达质粒 pc DNA3中 ,经酶切和测序鉴定 ,表明构建的重组质粒含有 NDV-HN基因片段。

兽药残留免疫检测技术应用进展

免疫检测技术 ( Immunoassays,IAs)是利用抗原与抗体在体外的特异性反应建立起来的检测技术。兽药属于小分子物质 ( MW<1 0 0 0 D) ,没有免疫原性 ,必须与大分子物质交联成人工抗原才能获得免疫原性。本文从兽药人工抗原的制备、抗体的制备、免疫检测方法的建立等三个方面对免疫技术在兽药残留检测的应用进行了综述 。

实时荧光定量PCR构建奶牛生殖系统PrP基因标准品质粒和标准曲线

为阐释PrP基因在奶牛生殖系统的正常表达和正常的生理功能,以及为确定生殖系统在疯牛病垂直传播中的地位和其分子机理奠定基础,采用实时荧光定量RT-PCR的方法构建了奶牛生殖系统PrP基因的标准质粒和标准曲线。对含有目的基因质粒的EcoRⅠ酶切鉴定表明所插入的片段大小为302 bp,与预期的结果一致。所构建的标准曲线的相关系数r2=0.999,系统生成的回归方程为y=-0.29x+9.48,说明成功构建了奶牛生殖系统PrP基因的标准质粒和标准曲线,为研究PrP基因在奶牛其他组织的定量奠定基础。

弓形虫表面抗原SAG2基因片段的克隆与原核表达

目的 扩增弓形虫主要表面抗原 (SAG2 )编码基因片段并进行重组表达。方法 设计合成 1对引物 ,从弓形虫基因组DNA中扩增SAG2基因序列 ,以低熔点琼脂糖回收纯化 ,并以限制性内切酶BamHⅠ和SalⅠ进行双酶切、纯化后 ,再插入表达载体 pGEX - 4T - 2 ,经PCR和双酶切筛选 ,测序验证后 ,在大肠杆菌中进行表达 ,并用SDS -PAGE和Westernblot鉴定。结果 从弓形虫核酸提取物中扩增出约 477bp的SAG2基因 ,构建成功了重组质粒 pGEX - 4T - 2 -SAG2 ;SAG2基因在大肠杆菌中得到高效表达。SDS -PAGE电泳 pGEX - 4T - 2 -SAG2的融合蛋白条带的分子量约为 42kD ,Westen -blot显示融合蛋白能被兔抗弓形虫血清识别。结论 GST融合表达载体的构建和SAG2基因片段成功表达 ,为进一步为SAG2重组疫苗及重组诊断抗原的研制奠定了基础。

达氟沙星(Danofloxacin)在鸡体内的组织残留

建立了鸡组织中达氟沙星 ( Danofloxacin)的高效液相色谱 ( HPL C)测定方法 ,并测定了鸡单次内服 (每千克体重5 m g)给药后组织中的达氟沙星残留特征。组织样品用含 0 .0 15 mol/ L H3PO4 和 0 .0 15 mol/ L HCl O4 的水 -甲醇 ( 5 0∶5 0 )提取 ,5 0℃水浴酸性水解 90 min,离心后取上清液作 HPL C检测。色谱柱为 Hypersil BDS C1 8柱 ;荧光检测器检测 ,激发波长 2 80 nm,发射波长 4 4 0 nm;流动相为含 0 .0 15 m ol/ L 四丁基溴化铵的水 -乙腈 ( 90 5∶ 95 ,组织检测时为 915∶85 )混合物 ,85 %磷酸调 p H为 3.0。血浆、肝脏、肾脏、肺脏、肌肉中达氟沙星的检测限为 0 .0 2 m g/ L或 0 .0 2μg/ g,血浆样品回收率大于 90 % ,组织样品回收率均大于 74 %。鸡单次内服甲磺酸达氟沙星后 ,在 6 0 h内各组织中均可检出药物 ,但在 4 8h所有组织中药物残留量均低于相应的 MRL s(最高残留限量 )。结果表明 。

苏丹红Ⅰ、Ⅲ和对位红竞争ELISA检测方法的初步建立

以4-氨基苯甲酸重氮化后与2-萘酚反应,合成苏丹红Ⅰ号的衍生物(CSD Ⅰ),以活性脂法将CSD Ⅰ与蛋白载体偶联,制备CSD Ⅰ-BSA免疫抗原与CSD Ⅰ-OVA检测抗原。以CSD Ⅰ-BSA免疫Balb/c小鼠,适当免疫后取脾细胞与SP2/0融合,筛得抗CSD Ⅰ的单克隆抗体细胞株5H3。以该细胞株生产抗体与CSD Ⅰ-OVA建立CSD Ⅰ的间接竞争ELISA检测方法,该方法对苏丹红Ⅰ、Ⅲ和对位红的灵敏度约为0.1ng/ml,IC50分别为1.03、1.13、0.89ng/ml,与其他染料交叉反应率低。该ELISA检测方法灵敏、特异,可用于苏丹红Ⅰ、Ⅲ和对位红的快速检测。

环丙沙星在霉形体性肺炎猪体内的组织药代动力学研究

将21头健康杜洛克×长白×大白杂交猪复制成霉形体性肺炎模型后,分别肌肉注射环丙沙星(5.0 mg/kg)进行组织及血浆药代动力学研究。结果显示,环丙沙星在感染猪肺中的浓度-时间数据适合一级吸收二室开放模型,外观正常肺与外观实变肺的主要参数分别是:t1/2Ka为0.19和0.46 h,t1/2α为2.68和2.52 h,t1/2β为8.12和6.87 h,tmax为1.10和1.47 h,Cmax为6.00和4.46μg/g,AUC为38.65和33.33mg/(L.h),Tcp(ther)为57.10和50.59 h。气管、支气管组织中的药物浓度-时间数据适合一级吸收一室开放模型,主要参数分别是:t1/2Ka为0.56和0.38 h,t1/2ke为5.68和5.67 h,tmax为2.08和1.60 h,Cmax为3.73和2.62μg/g,AUC为39.44和26.10 mg/(L.h),Tcp(ther)为50.60和47.16 h。表明,环丙沙星对霉形体性肺炎猪呼吸道组织具有良好的穿透性,组织药物浓度明显高于血浆药物浓度,且消除缓慢。

乙型脑炎病毒E蛋白抗原优势区域的鉴定

流行性乙型脑炎（Japanese Encephalitis，JE）是一种人与动物共患的虫媒病毒性疾病，严重危害着人畜的健康。E蛋白是乙型脑炎病毒（Japanese Encephalitis Virus，JEV）的主要结构蛋白，在病毒的吸附、融合、血凝、细胞趋向性、病毒毒力和诱导保护性免疫反应中起重要作用。为了确定该蛋白的抗原优势区域，本研究设计了3对引物，将E蛋白分成3个大段，分别是EF1（1～291aa）、EF2（292～402aa）和EF3（403-500aa），又将EF1分成4个相互重叠的小片段，分别是EF1-1（1～88aa）、EF1—2（68～155aa）、EF1—3（129～222aa）和EF1—4（202～291aa），将以上基因片段分别克隆到原核表达载体进行GST融合表达。SDS-PAGE电泳鉴定各融合蛋白均获得表达，各表达产物以包涵体的形式存在。通过Western blot分析表明融合蛋白GST-EF1、GST—EF2、GST—EF1—1、GST-EF1-2、GST—EF1—3和GST—EF1～4均能被阳性血清识别。通过ELISA鉴定，GST-EF2反应性最强，GST-EF1反应性比GST-EF2稍弱，而GST-EF3反应性最弱，GST-EF1-1、GST-EF1—2、GST-EF1—3和GST—EF1—4片段融合蛋白反应性与GST—EF1相似。由此本研究鉴定出1-402aa是E蛋白的抗原优势区域，在此区域内包括了12个Cys的保守区及域Ⅰ、域Ⅱ和域Ⅲ3个主要抗原域。E蛋白抗原优势区域的鉴定，为E蛋白抗原表位的鉴定以及针对于E蛋白诊断试剂的开发奠定了基础。

牛传染性鼻气管炎病毒糖蛋白gC基因抗原活性区的克隆与表达

通过聚合酶链式反应从牛传染性鼻气管炎病毒Bartha Nu/67株中扩增得到病毒gC基因并克隆至T载体pMD20T,再以后者为模板扩增gC蛋白第15-177位氨基酸对应的抗原活性区片段gCd。将gCd插入原核表达载体pET32a构建重组表达质粒pET32a-bhv1gCd。限制性内切酶以及序列分析鉴定表明重组表达质粒克隆片段序列与阅读框正确。对重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）的培养物进行蛋白电泳,可检测到分子量约45ku的目的产物,IPTG诱导后5h表达量最高。免疫印迹试验结果证实,gCd重组蛋白与牛传染性鼻气管炎标准阳性血清发生特异性反应,表明gC抗原活性区片段在原核获得表达并具有良好的抗原性。该重组蛋白可用于建立ELISA等免疫诊断方法。

鸡小脑浦肯野细胞向海马的直接投射-透射电镜观察

目的：进一步观察和确定前期的鸡小脑浦肯野细胞向端脑海马结构的直接投射。方法：选择2月龄左右的青年鸡，外科方法开顿，直流电损毁小脑V叶白质或红藻氨酸选择性损毁Ⅵa的浦肯野细胞和颗粒细胞，动物存活7d，透射电镜观察端脑海马结构的旁海马内侧区（APHm）超微结构的变化。结果：于APHm内出现变性纤维及变性终末，以泡沫型变性最为普遍。并可见到变性终末与APHm内神经元形成突触联系。结论：鸡小脑浦肯野细胞可直接投射向海马结构，并与APHm神经元形成单突触联系。

腹水综合征患鸡自由基代谢的研究进展

1肉鸡腹水综合征的危害 养禽业是近年来国内外畜牧业生产中发展最快的一个行业,目前阻碍养禽业发展的最大障碍之一是营养代谢病.而世界肉鸡业所面临的危害最严重的营养代谢病是肉鸡腹水综合征(ascites syndrome,AS),又称肉鸡肺动脉高压,主要表现出严重的腹水;右心衰竭和肥大;肝肿大或萎缩,肺脏表面覆盖一层黄色胶冻样纤维性凝结块,有的飘浮在腹水中;肝和肾充血,有时出血;生长缓慢,体重下降,精神倦怠,鸡冠发紫,腹部下垂,有波动感,腹部皮肤暗紫色,发凉,呼吸困难,步履蹒跚,捕捉时常突然死亡等临床症状和病理变化.其发生发展的中心环节是肺动脉高压.……

兽药残留的危害及监控防范措施

兽药残留(Veterinary drug residue)又称药物残留(drug residue),是指给畜禽等动物使用药物后蓄积或贮存在动物细胞、组织和器官内以及可食性产品中的药物或化学物的原形、代谢产物和杂质.

猪附红细胞体病的诊断与治疗

2001年5月,广东某猪场售出的50日龄猪在进入农户家1周后,发生了以排稀便为主要表现症状的疾病,并造成猪死亡.经诊断确诊为附红细胞体病.