鸡球虫基因工程疫苗研究进展

近年来 ,应用鸡球虫基因工程疫苗预防球虫病的试验报道逐年递增 ,许多保护性抗原陆续被发现。各种研究结果表明 ,动物机体的抗球虫免疫以细胞免疫为主 ,因此能否诱导机体产生细胞免疫是判定虫体蛋白能否作为重组疫苗成分的标准之一 ;此外 ,研究结果也显示 ,孢子或裂裂子生殖阶段的部分抗原可以诱导机体产生抗球虫免疫 ;抗有性生殖阶段抗原的抗体也可以减少攻虫雏鸡的排卵囊量。虽然在试验条件下 ,重组基因工程疫苗可以减轻球虫感染所造成的病理损伤或者减少卵囊在体内的繁殖数量 ,但距离应用于生产还相差较远 ,因此仍然有必要对相关的一系列问题进行更加详细和更深一层的研究 。

堆形艾美球虫广东株3-1E基因在毕赤酵母中的表达

以重组质粒pGEM-3-1E为模板,扩增了序列两端分别含有EcoRⅠ和XbaⅠ酶切位点的堆形艾美球虫(Eimeria acervulina)广东株3-1E基因(长度为529 bp),将3-1E基因克隆至巴斯德毕赤酵母分泌型表达载体pPICZαC中,构建了酵母表达质粒pPICZαC-3-1E。转化毕赤酵母X-33得到含有3-1E基因的重组酵母,甲醇诱导产生的目的蛋白经SDS-PAGE分析和免疫印迹检测,表明毕赤酵母成功表达了3-1E基因。

堆型艾美球虫广东株3-1E基因的克隆与序列分析

根据GenBank中登录的堆型艾美球虫31E基因序列,设计了3条引物,以广东株堆型艾美球虫裂殖子总RNA为模板,利用反转录聚合酶链反应(RTPCR)扩增获得了31E基因部分片段,将这一片段克隆至pGEMTEasy载体中,经PCR、限制性内切酶分析和克隆片段的序列测定、比较,证实了克隆片段的可靠性。序列比较发现,所克隆的基因片段与Eimeriaacervulina美国株(US)、E.acervulinaQH株31EcDNA的核苷酸同源性分别为99.0%和99.2%,推导氨基酸的同源性分别为98.2%和97.6%。