植烟土壤中枯萎病菌和黑胫病菌的快速检测方法

【目的】枯萎病和烟草黑胫病是植烟土壤中最为常见的主要土传病害,为害严重,建立植烟土壤中两种病原菌尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)和烟草疫霉菌(Phytophthora parasitica var.nicotianae)快速检测方法,为烟草种植过程中病害流行与治理提供技术支持,保障烟草行业的稳定生产。【方法】以采集广西百色地区土传病害土壤与健康土壤为测试材料,以标准病原菌为参考模板建立标准曲线,利用尖孢镰刀菌和烟草疫霉菌的保守区域设计的引物,根据目标条带及荧光定量PCR(qPCR)的溶解曲线与循环阈值(Ct值)筛选出特异性引物;同时,改进土壤中微生物DNA试剂盒提取方法,建立PCR和qPCR检测体系。【结果】分别筛选出一对尖孢镰刀菌和烟草疫霉菌的特异性的引物Pn3和JBR,模板浓度在1×10^(2)~1×10^(-4)ng之间,具有良好的线性关系,两种病原菌的DNA数量在发病土壤高于健康土壤。风干土壤并研磨再加两次洗脱有助于提取土壤中病原菌的DNA,建立了以普通PCR预扩增反应得到的产物作为模板的qPCR检测方法。【结论】PCR和qPCR联用技术能快速地分辨和检测尖孢镰刀菌和烟草疫霉菌,对枯萎病和烟草黑胫病实时监测和前期预警具有重要作用。

3个不同地区山胡椒的果、茎、叶挥发性成分分析

为充分利用山胡椒的果、茎、叶,本研究通过GC-MS方法比较它们的化学组成差异,综合评价各自的特点,以期为拓宽山胡椒的应用提供依据。对采自云南怒江州3个地区山胡椒的果、茎、叶均采用二氯甲烷超声进行提取相应挥发性成分,通过GC-MS分析比较二氯甲烷提取物中各挥发物成分的含量差异,以期发现具有潜在应用价值的化学成分。结果发现,不同地区的山胡椒所含挥发物种类和含量均有差异,同地区山胡椒的不同部位之间所含挥发物种类和含量差别大。亚坪山胡椒的果、茎、叶中存在挥发物种类更多、更为丰富,各含有254、66、60个挥发物,金顶山胡椒的果、茎、叶中各含有192、60、76个挥发性化合物,姚家坪山胡椒的果茎叶各含有251、43、55个挥发物;3个地区山胡椒的果实间共同挥发物有43个,茎之间的共同挥发物有21个,叶之间的共同挥发物有24个。山胡椒的果实中醛类含量最多,其次含量较多的是有机酸类化合物;茎中多数为酯类化合物,其次是烷烃类化合物,叶片中多数为烷烃类、烯烃类化合物。在金顶和亚坪地区的山胡椒中,棕榈酸、正癸酸、月桂酸、油酸和亚油酸含量较高;在姚家坪地区的山胡椒中,4,8-dimethyl-3,7-nonadien-2-ol、epoxy-linalooloxide、geranic acid、(Z)-3,7-二甲基-2,6-辛二烯醛、2-甲基-5-(1-甲基乙烯基)环己酮、3-甲基-2-环己烯-1-酮这几种物质含量较高。上述物质在化工、医药等领域都有较大应用,3个地区山胡椒不同部位化学成分及含量的差别会导致其在应用上存在差别,该研究将为云南怒江州不同地区山胡椒果茎叶的开发利用提供一定科学依据。

不同浓度二氧化氯防治烟草根茎病害的应用效果

为探究不同浓度二氧化氯处理土壤对烟草根茎病害防效及烟叶农艺性状、产量、品质的影响,通过对烟草根茎病害中度发病田和重度发病田进行1.5 kg/667m^(2)、2.0 kg/667m^(2)两种二氧化氯浓度处理,测定各处理对烟草根茎病害的防效及烟叶农艺性状,同时结合定量荧光PCR技术、气相-质谱联用仪(GC-MS)技术,检测不同处理土壤主要病原微生物数量、烟叶挥发性成分,并比较各处理区的经济效益。结果表明,二氧化氯处理后重度发病烟田发病率明显下降,1.5 kg/667m^(2)处理和2.0 kg/667m^(2)处理的病害防效相持平;中度发病烟田2.0 kg/667m^(2)处理的发病率最低。经二氧化氯处理后烟草的株高、株宽、叶片数等农艺性状显著提升,同时提升了上等烟与中等烟的产值、产量。主成分分析显示,经二氧化氯不同浓度处理后的烟叶挥发性成分存在显著差异,成熟烟叶主要有益物质显著提升。不同处理土壤病原微生物检测结果可知,两种二氧化氯浓度处理对中度发病田中青枯菌和烟草疫霉的抑制效果最为显著。不同浓度二氧化氯可以有效控制烟草根茎病害的发生,改善烟叶的农艺性状,提高烟叶的产量和品质。

土壤中青枯病菌快速检测方法的建立与应用

烟草青枯病是由茄科雷尔氏菌引起的一种细菌性土传病害,针对该青枯病菌建立了一套二次荧光定量PCR方法,对青枯病菌DNA的检测灵敏度可达0.06 pg/μL。对广西百色等地烟区201份土壤样品中的青枯病菌进行定量检测,结果表明发病土壤中青枯病菌含量明显高于未发病土壤,前者含有青枯病菌的阈值(CT值)为15.6~20.5,后者含有青枯病菌的阈值(CT值)为20.5~24.7。本研究建立的二次荧光定量PCR方法可以快速、准确地检测土壤中青枯病菌的丰度,为烟草青枯病预警提供技术支持。