基于CRISPR/Cas9技术研究金针菇冷诱导结实基因HK1和HK2的编辑转化系统

对金针菇(Flammulina velutipes)冷诱导相关的组氨酸激酶基因HK1和HK2构建了基因组编辑(CRISPR/Cas9)pgfvs-Cas9-HK1-gRNA和pgfvs-Cas9-HK2-gRNA表达载体,探索了金针菇菌丝体及原生质体对潮霉素的最低敏感浓度,利用PEG介导的方法将表达载体pgfvs-Cas9-HK1/HK2-gRNA转化金针菇原生质体,经潮霉素筛选后的拟转化子再进行PCR鉴定。结果显示:金针菇菌丝体及原生质体对潮霉素的最低敏感浓度均为50μg/mL;经潮霉素筛选后的部分拟转化子成功扩增出Cas9的部分片段,携带有HK1、HK2基因载体的Cas9蛋白基因成功整合到了金针菇的基因组中,两个表达载体转化率分别为24.1%和12.5%。

高产类胡萝卜素的蛹虫草液体培养基优化及其提取工艺研究

以类胡萝卜素含量为目标,采用谷物类为培养基对蛹虫草CM-03、CM-04和CM-11三株菌株进行了液体发酵培养基的优化,结果表明:三株菌株的最优培养基配方分别为CM-03:1.4 g·L^(-1)小麦、2.8 g·L^(-1)玉米、0.3 g·L^(-1)大豆、0.1 g·L^(-1)MgSO_4·7H_2O、0.1 g·L^(-1)KH_2PO_4、0.05 mg·L^(-1)VB_1、pH自然,类胡萝卜素含量为(694.8±15.4)μg/g;CM-04:1.2 g·L^(-1)大米、0.6 g·L^(-1)玉米、0.3 g·L^(-1)大豆,0.1 g·L^(-1)MgSO_4·7H_2O、0.1 g·L^(-1)KH_2PO_4、0.05 mg·L^(-1)VB_1、pH自然,类胡萝卜素含量为(708.5±25.8)μg/g;CM-11:1.7 g·L^(-1)小麦、2.6 g·L^(-1)玉米、0.3 g·L^(-1)大豆,0.1 g·L^(-1)MgSO_4·7H_2O、0.1 g·L^(-1)KH_2PO_4、0.05 mg·L^(-1)VB_1、pH自然,类胡萝卜素含量为(700.5±19.1)μg/g。同时,使用乙醇提取法对类胡萝卜素提取工艺进行了优化,结果表明乙醇提取法的最佳工艺条件为:采用石英砂研磨破壁,乙醇浓度60%、料液比1∶40,水浴提取温度80℃,提取级数2级,提取率达到92.8%。

三种诱导物对金针菇子实体产量及部分化学成分含量的影响

研究壳聚糖、2,4-二氯苯氧乙酸及三十烷醇对金针菇(Flammulina velutipes)的原基分化时间、子实体产量以及部分化学成分含量的影响。结果表明,实验浓度内3种诱导物均可显著缩短原基分化时间,与对照组相比,处理浓度为1、2mg/kg的壳聚糖使原基分化时间缩短3d。除0.5mg/kg壳聚糖、1mg/kg 2,4-二氯苯氧乙酸和0.5mg/kg三十烷醇外,其余浓度的3种诱导物均可显著增加金针菇子实体产量。其中2,4-二氯苯氧乙酸的浓度为0.05 mg/kg时,金针菇子实体产量达到最大值(57.15±1.72)g。壳聚糖浓度为0.05mg/kg时,子实体的蛋白质含量最高,为(39.73±0.05)mg/g;当壳聚糖浓度为0.5mg/kg时,子实体的总黄酮、总多酚和花色苷含量最高,分别为(50.55±0.02)、(2.15±0.01)mg/g和(51.34±0.29)μg/g。三种诱导物中,1mg/kg壳聚糖显著增加金针菇甘露醇含量,为(57.20±0.02)mg/g。0.5mg/kg的2,4-二氯苯氧乙酸处理的金针菇子实体总多糖含量达到最高(12.43±0.05)μg/g。

芽孢杆菌P6产抗菌脂肽条件优化及发酵液性质研究

目的:提高芽孢杆菌P6发酵产抗菌脂肽的水平,探究其应用潜力。方法:考察时间、温度、培养基起始pH、转速、接种量、装液量这6个因素对供试菌株产抑菌活性物质的影响,考察发酵液的温度、紫外照射、酸碱稳定性。结果:菌株P6生产抗菌脂肽的最佳发酵条件为:温度30℃,培养基初始pH天然,装液量100 mL/250mL,接种量1%,转速130 r/min,发酵时间60 h。发酵上清液能够耐100℃高温,pH耐受范围3～9,紫外照射3 h后活性仍保持50%以上。抑菌谱试验结果表明,发酵液对15种水产致病菌均有抑菌活力。结论:优化后抑菌圈直径比优化前提高了54%,且菌株P6产生的抗菌物质具有良好的稳定性和广谱性,有很大的应用潜力。