温阳通络胶囊干预骨关节炎大鼠软骨细胞的炎症反应和血管新生

背景:温阳通络胶囊在临床上治疗骨关节炎具有明显的疗效,但其作用机制不明确。目的:探讨温阳通络胶囊对骨关节炎的治疗作用,以及其对软骨细胞中miR-140/血管内皮生长因子信号的调控机制。方法:(1)动物实验:将75只SD大鼠分为5组,每组15只:正常组、模型组、药物组每天左后肢膝关节内注射miR-140-antagomir NC和siRNAVEGF NC,抑制剂组每天左后肢关节内注射mi R-140-antagomir和si RNA-VEGF NC,干扰组每天关节内注射mi R-140-antagomir和si RNA-VEGF,各组均注射2周;2周后,药物组、抑制剂组和干扰组灌胃给予温阳通络胶囊,连续灌胃4周;模型组、药物组、抑制剂组、干扰组实验的1,4,7 d关节腔内注射木瓜蛋白酶复制关节炎模型。给药结束后,进行相关检测。(2)细胞实验:将软骨细胞ATDC5分5组处理:正常组加入含mi R-140-antagomir NC和si RNA-VEGF NC的培养基;模型组加入含白细胞介素1β、mi R-140-antagomir NC和si RNA-VEGF NC的培养基;药物组加入含白细胞介素1β、mi R-140-antagomir NC、si RNA-VEGF NC及温阳通络胶囊的培养基;抑制剂组加入含白细胞介素1β、mi R-140-antagomir及温阳通络胶囊的培养基;干扰组加入含白细胞介素1β、mi R-140-antagomir、si RNA-VEGF及温阳通络胶囊的培养基,进行相关检测。结果与结论:(1)动物实验:与正常大鼠相比,骨关节炎大鼠软骨组织中miR-140 mRNA表达降低(P <0.05),血管内皮生长因子mRNA表达升高(P <0.05)。与模型组相比,药物组、抑制剂组、干扰组大鼠血清中白细胞介素6和肿瘤坏死因子α水平、软骨细胞凋亡、新生血管数量、血管内皮生长因子蛋白表达均明显减少(P <0.05),其中以药物组效果最明显。(2)细胞实验:与正常软骨细胞相比,骨关节炎软骨细胞中miR-140 mRNA表达降低(P <0.05),血管内皮生长因子mRNA表达升高(P <0.05)。与模型组相比,药物组、抑制剂组、干扰组细胞增殖活性提高(P <0.05),细胞凋亡、上清中白细胞介素6和肿瘤坏死因子α水平、新生血管数量、血管内皮生长因子基因及蛋白表达均明显减少(P <0.05),其中以药物组效果最明显。(3)温阳通络胶囊能明显抑制软骨细胞的炎性应激和血管新生,缓解关节炎大鼠软骨病理损伤,这可能与调控miR-140/血管内皮生长因子信号轴有关。