玻璃化冷冻卵巢原位移植技术介导胰岛素/IGF-1信号通路易感糖代谢紊乱风险的实验研究

目的初探玻璃化冷冻后卵巢原位移植技术对其子代小鼠糖代谢水平的影响和机制。方法建立卵巢玻璃化冷冻后原位移植出生子代小鼠模型,实验分为新鲜卵巢原位移植出生子代(新鲜组)和玻璃化冷冻卵巢原位移植出生子代(玻璃化冷冻组),另设自然交配出生子代为对照组,每组16只小鼠,检测子代小鼠出生到6月龄时各阶段体质量及6月龄成年子代鼠的空腹血糖、空腹胰岛素、糖耐量水平;取材6月龄子代小鼠肝脏组织,qRT-PCR检测生长因子受体结合蛋白10(growth factor receptor-bound protein 10,Grb10)mRNA的表达;Western blotting检测Grb10、磷酸化蛋白激酶B(phosphate-protein kinase B,p-AKT)和磷酸化丝裂原活化蛋白激酶(phosphate-mitogen-activated protein kinase,p-MAPK)蛋白的表达。结果玻璃化冷冻组2周龄和3周龄子代小鼠的体质量均低于对照组(P=0.007,P<0.001),差异均具有统计学意义;新鲜组4月、5月龄子代小鼠的体质量均低于对照组(P=0.023,P=0.013),差异均具有统计学意义。6月龄子代鼠新鲜组和玻璃化冷冻组小鼠空腹血糖均较对照组升高(P<0.001,P=0.002),差异均具有统计学意义;玻璃化冷冻组小鼠空腹胰岛素水平较对照组升高,差异具有统计学意义(P=0.017),但玻璃化冷冻组与新鲜组之间差异均无统计学意义(均P>0.05)。葡萄糖注射后30 min时,新鲜组子代小鼠血糖水平显著高于玻璃化冷冻组(P<0.001),120 min时,新鲜组和玻璃化冷冻组子代小鼠血糖水平显著高于对照组(P=0.034,P=0.018),差异均具有统计学意义。新鲜组和玻璃化冷冻组子代肝脏内Grb10 mRNA和蛋白的表达显著高于对照组(均P<0.001),差异均具有统计学意义;玻璃化冷冻组和新鲜组子代肝脏内p-AKT(均P=0.024)和p-MAPK(P=0.019,P=0.002)蛋白的表达较对照组显著性降低,差异均具有统计学意义,玻璃化冷冻组与新鲜组之间差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论卵巢玻璃化冷冻后原位移植技术影响子代小鼠生长和糖代谢,通过子代成年小鼠肝脏内印记基因Grb10过表达,抑制肝脏内胰岛素/胰岛素样生长因子-1信号通路,降低细胞利用葡萄糖水平,使成年子代小鼠出现糖代谢紊乱的现象。