GPD1酶在毕赤酵母中的表达及纯化

目的构建可以分泌表达GPD1酶的毕赤酵母,并使用Profinia蛋白纯化系统获得纯度90%以上的GPD1酶,扩大GPD1酶的制备,以进一步研究其在肿瘤中的功能及作为抗肿瘤靶点的临床应用研究。方法提取人细胞的总RNA,逆转录成cDNA,以此为模板通过PCR扩增GPD1基因,PCR产物与表达载体pPICZα-C用EcoRⅠ和XbaⅠ双酶切,连接构建重组表达质粒pPICZα-C-gpd1;pPICZα-C-gpd1质粒电转至毕赤酵母X-33中,筛选阳性转化子,经甲醇诱导表达,采用固化金属亲和层析(IMAC)纯化分泌的目的蛋白。结果经SDS-PAGE鉴定,成功表达和纯化了GPD1酶,纯度达90%以上。结论本研究建立了毕赤酵母分泌表达GPD1酶的方法,可用于制备GPD1酶,为进一步的肿瘤机制研究和应用研究奠定基础。