猪脂联素基因启动子区甲基化与其mRNA表达分析

脂联素(Adiponectin)是至今发现的唯一与肥胖呈负相关的脂肪细胞特异性蛋白,是调控生物体的能量稳态、葡萄糖代谢和脂肪代谢的脂源性细胞因子之一。生物信息学分析发现,adiponectin基因启动子区-1500～-1350bp是CpG位点的富集区域。为了进一步研究脂联素基因的表达调控研究,文章从表观遗传学角度出发,通过Real-time PCR与甲基化特异性PCR(Methylation special PCR,MSP)的方法对脂联素基因的表达及其启动子区的甲基化状况进行了分析。结果表明,在adiponectin基因启动子区CG富集的区域(-1500～-1350bp)中,90日龄长白猪大多去甲基化(83%),90日龄蓝塘猪部分去甲基化(33%),成年蓝塘猪全是高度甲基化(100%),成年长白猪部分去甲基化(33%)。甲基化与去甲基化过程主要发生在某些特定CpG位点。脂联素基因在猪肌肉组织中以高度甲基化状态为主,这一结果与该基因在肌肉组织中表达量相吻合。以上结果提示,随个体发育,脂联素基因的甲基化状态随基因表达的波动呈现动态的过程,表现出与基因表达量波动基本一致的波动趋势。

猪Myl1基因启动子克隆及多态性研究

肌球蛋白轻链1基因(Myl1)编码的不同剪切体(主要是MLC1f和MLC3f)与哺乳动物骨骼肌肌纤维类型相关。通过猪BAC文库筛选及引物步行法测序获得Myl1基因的启动子序列,采用PCR-RFLP技术分析蓝塘猪、大花白猪、大白猪、长白猪和杜洛克猪5个品种Myl1基因启动子区的多态性。结果表明,Myl1基因-678C/T位点在蓝塘和大花白等本地猪种中多态性丰富,而在杜洛克、长白和大白等外来猪种中几乎只有CC基因型。

猪脂联素基因启动子克隆及多态性研究

[目的]为脂联素基因作为脂肪沉积候选基因的研究提供依据。[方法]通过猪BAC文库筛选及primer-walking的测序方法获得脂联素基因的启动子序列,采用PCR-RFLP技术对蓝塘猪、大花白猪、大白猪、长白猪和杜洛克猪5个品种共290头猪的脂联素基因启动子区的多态性进行了分析。[结果]脂联素基因的5’侧翼区-1 010 bp(G/A)的SNP位点,本地猪种中GG基因型频率明显高于外来猪种;-394 bp(T/C)的SNP位点,本地猪种基因型分布较为丰富,而在外来猪种中却没有检测到CC基因型,且外来猪中T等位基因频率较高。[结论]脂联素基因上游-1 010 bp(G/A)的SNP位点突变可能会引起该基因转录水平的改变,而-394 bp(T/C)的SNP位点与基因转录水平及与脂肪沉积可能无关。

猪脂联素基因启动子克隆及多态性研究(摘要)(英文)

[目的]为脂联素基因作为脂肪沉积候选基因的研究提供依据。[方法]通过猪BAC文库筛选及引物步移法(primer-walking)的测序方法获得脂联素基因的启动子序列,具体步骤:通过已经发表的部分猪脂联素基因cDNA序列设计特异引物用于BAC克隆的筛选。以超级池DNA为模板进行第1次PCR反应,筛出含阳性克隆的超级池;以挑出的阳性超级池的3维池DNA为模板进行第2次PCR反应,根据阳性板池、列池、行池序号得到可能的阳性克隆号;依照阳性克隆号从工作文库中取出相应的BAC克隆,平板划线37℃倒置培养20 h。待菌落长好后,做菌体PCR鉴定,以确认克隆的正确性。将获得的BAC阳性克隆平板划线,37℃摇菌过夜培养,进行BAC的提取、纯化与酶切回收。先以M13引物向BAC两端测序,再以发表的cDNA序列外显子1设计测序引物采用primer-walking的方法,获得连续的DNA序列。采用PCR-RFLP技术对蓝塘猪、大花白猪、大白猪、长白猪和杜洛克猪5个品种共290头猪的脂联素基因启动子区的多态性进行分析。[结果]脂联素基因的5′侧翼区-1 010 bp(G/A)的SNP位点,本地猪种中GG基因型频率明显高于外来猪种;-394 bp(T/C)的SNP位点,本地猪种基因型分布较为丰富,而在外来猪种中却没有检测到CC基因型,且外来猪中T等位基因频率较高。[结论]脂联素基因上游-1 010 bp(G/A)的SNP位点突变可能会引起该基因转录水平的改变,而-394 bp(T/C)的SNP位点与基因转录水平及与脂肪沉积可能无关。

毛细管场放大技术研究进展

毛细管电泳技术具有高效,快速,微量,自动,高通量,清洁无污染等特点,自其产生以来便获得广泛的关注和应用,但在其应用过程中其有限的检测光学路程及有限长度所造成的微小进样量使其灵敏度低,特别是配合常用的UV检测器时,灵敏度问题更是成为制约其应用的一个关键因素。因此,针对其灵敏度问题展开研究已成为一个热点,其中样品富集技术有操作简单,不需昂贵的仪器设备,灵敏度高的优点。而场放大技术更是以其成熟的理论基础,简单的操作模式,较高的灵敏度成为应用最多的富集技术之一,具有极高的实际应用价值。

淀粉基降解塑料的研究进展

简单介绍淀粉的基本性质，综述淀粉基可降解塑料的研究现状，指出了淀粉塑料目前存在的问题及发展方向。