改良的乳鼠心肌细胞分离与培养新方法

目的探讨一种简单有效的SD大鼠乳鼠心肌细胞分离与培养方法。方法取出生24 h以内的大鼠心室,0.08%的胰蛋白酶反复消化多次,离心收集心肌细胞,差速培养后5-溴脱氧尿嘧啶核苷纯化心肌细胞。用全细胞膜片钳方法,记录心肌细胞动作电位,并用激光共聚焦显微镜观察钙瞬变、线粒体膜电位。结果心肌细胞存活率大于93%,心肌细胞纯度大于96%,细胞形态良好,出现节律性搏动,钙瞬变波形稳定、规律,动作电位和线粒体膜电位均正常。结论本研究方法分离心肌细胞存活率高、活性好,是一种简单、高效的心肌细胞原代培养方法,可广泛应用于各种研究。

局灶性脑缺血大鼠血浆蛋白组学研究

目的研究脑缺血后的血浆蛋白质组学的变化差异,筛选出具有高度脑特异性的差异表达蛋白。方法用大脑中动脉闭塞(MCAO)法建立大鼠局灶性脑缺血模型。造模成功后,收集新鲜血浆。用阳离子交换色谱分级血浆蛋白,并用胰蛋白酶消化蛋白,得到的肽段混合物经超高效液相色谱分离后进行飞行时间质谱鉴定,确定缺血前后血浆中的差异表达蛋白,对差异蛋白进行基因表达组织特异性分析,筛选具有高度脑特异性的蛋白。结果在正常组和缺血组的大鼠血浆中各鉴定到285种和309种蛋白质。其中,缺血组的差异蛋白种类数量为200。经基因表达的组织特异性分析,从缺血组差异蛋白中筛选出6个具有高度脑特异性的差异蛋白。结论脑缺血后,血浆蛋白组发生明显变化。鉴定到的脑特异性蛋白,为后续生物标记物研究提供了候选蛋白。