沉默范可尼贫血补充组Ⅰ基因对肝癌细胞增殖和周期的影响

目的探究范可尼贫血补充组Ⅰ基因(FANCI)对肝细胞癌(HCC)细胞增殖和周期的影响。方法通过癌症基因组图谱(TCGA)数据库和本院临床标本,验证了FANCI表达与肝癌患者的临床相关性,并对FANCI共表达基因进行富集分析(GSEA),通过敲减FANCI基因,探索FANCI表达减少对肝癌细胞增殖和细胞周期的影响,组织样本来源于2018年10月至2019年2月收集就诊于广州市第一人民医院并被诊断为"HCC"的患者,组间比较采用t检验。结果FANCI在肝癌组织信使RNA(mRNA)(0.006±0.004比0.001±0.001,t=3.828,P<0.01)和蛋白(0.202±0.052比0.613±0.346,t=3.333,P<0.05)水平高于正常组织,高表达FANCI的HCC患者预后较差(P<0.01);单因素和多因素Cox回归分析显示FANCI是HCC预后不良的因素之一(P<0.05);GSEA富集分析显示FANCI共表达基因富集于细胞周期等生物过程中,细胞实验发现敲低FANCI后细胞增殖能力下降,细胞周期阻滞于G_(1)~S期,细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)表达下调。结论FANCI基因在HCC中高表达,敲低FANCI后可能通过下调Cyclin D1来抑制细胞增殖。

异紫堇碱衍生物COM33对Huh7细胞增殖和凋亡的影响

目的观察异紫堇碱衍生物COM33对肝癌Huh7细胞增殖和凋亡的影响。方法以0.625、1.25、2.5、5、10、20、40、80μmol/L COM33分别处理正常肝细胞LO2和肝癌细胞Huh724 h后,采用细胞计数法(CCK-8)检测细胞吸光度(A)值,并在Graphpad prism软件中通过非线性回归分析获得半数抑制浓度(IC50)。随后采用COM33处理Huh7细胞,以无COM33组设为对照组;细胞克隆实验用于评估COM33对Huh7细胞增殖的影响;10μmol/L COM33处理Huh7细胞24 h后,在倒置显微镜下观察细胞形态变化,用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)/碘化丙锭(PI)双染试剂盒检测细胞凋亡情况,免疫印迹实验检测给药前后细胞中Gasdermin D(GSDMD)蛋白、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)蛋白、bcl-2相关X蛋白(bax)、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-9剪切体(cleaved Caspase-9)的表达水平。组间比较采用Student’st检验。结果COM33剂量依赖性地抑制Huh7细胞增殖,且在Huh7细胞中的IC50值明显低于LO2细胞[(11.99±0.53)μmol/L比(33.33±3.10)μmol/L,t=11.810,P<0.01];给药组细胞形成的克隆集落少于对照组[(681±13)个比(387±29)个,t=15.950,P<0.01];Huh7细胞经COM33处理后出现皱缩变圆、贴壁不良;给药组Annexin V阳性细胞比例高于对照组[(7.28±0.86)%比(1.37±0.09)%,t=11.820,P<0.01];两组细胞GSDMD蛋白表达并无差异,且未检测到GSDMD剪切体;bax蛋白相对表达量给药组高于对照组(1.02±0.04比0.50±0.06,t=12.250,P<0.01);cleaved Caspase-9蛋白相对表达量给药组高于对照组(0.39±0.11比0.07±0.03,t=4.726,P<0.01;0.39±0.11比0.16±0.07,t=2.942,P<0.05);bcl-2蛋白相对表达量给药组低于对照组(0.54±0.06比0.82±0.12,t=3.551,P<0.05)。结论COM33对LO2细胞毒性不明显,可有效抑制Huh7细胞增殖,并诱导其凋亡。